В настоящее время вакцинация является основным методом защиты поголовья птицефабрик. В современных условиях производства негативное влияние техногенных факторов способствует развитию иммунодефицитных состояний, что влечет снижение эффективности вакцинации и приводит к «прорыву» иммунитета у птицы [1,8].
В этой ситуации возрастает роль профилактических и лечебных мероприятий, направленных на повышение естественной резистентности птицы, стимуляции их иммунной системы [6]. В связи с этим создание и применение иммуномодуляторов, действие которых направлено на повышение общей резистентности организма птицы, устойчивости его к технологическим стрессам, снятию отрицательного иммунодепрессивного действия вакцинных препаратов, заслуживает пристального внимания [8].
Цель исследований. Изучить влияние препарата Ветостим (ООО «Сиббиотест») на иммунобиологический статус индюшат в системе специфической профилактики Ньюкаслской болезни.
Материалы и методы. Материалом для исследования служили индюшата-бройлеры кросса BIG-6, содержащиеся в одном из птицеводческих хозяйств Омской области. Для проведения эксперимента было сформировано две группы индюшат-бройлеров по 100 голов в каждой. Вес птицы на момент начала эксперимента составлял 50 гр.
Индюшатам первой группы вводили иммуномодулятор Ветостим в дозе 0,1 мг/кг в сочетании с живой вакциной против Ньюкаслской болезни. Вторая группа птиц также была вакцинирована, но без применения Ветостима (контроль).
Препарат применяли методом выпаивания с питьевой водой в сочетании вакциной Авивак-НБ против Ньюкаслской болезни на 14-е и 28-е сутки, согласно схеме вакцинопрофилактики, действующей на данном предприятии. Для этого птица предварительно была отделена от системы поения на 60 минут, после чего была проведена вакцинация.
В течение экспериментальных исследований осуществляли наблюдение за общим состоянием индюшат (внешний вид, оперение, аппетит, подвижность). Через 14 сут. после ревакцинации, у индюшат была получена кровь для гематологических, биохимических и иммунологических исследований, а также для оценки напряженности поствакцинального иммунитета.
С целью оценки иммунного статуса в периферической крови птиц определяли содержание иммунокомпетентных клеток в абсолютном содержании (тыс/мкл): число Т-лимфоцитов с помощью спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-рок), Т-киллеров - непрямого глобулинового розеткообразования с эритроцитами быка (ЕА-рок) и В-лимфоцитов - комплементарного розеткообразования с эритроцитами быка (ЕАС-рок). Уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ) с молекулярной массой 6000. Функциональную активность лейкоцитов оценивали в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) фотометрическим методом в спонтанном варианте [4].
Гематологические исследования осуществляли общепринятыми методами с последующим выведением лейкоцитарной формулы.
Биохимические показатели сыворотки крови экспериментальных индюшат-бройлеров определяли на биохимическом анализаторе «Screen Master» производства фирмы «Hospitex» (Швейцария, Италия) с использованием реактивов «Hospitex» (Швейцария, Италия). При этом определяли количество общего белка, глобулинов, альбуминов, креатинина и щелочной фосфатазы.
Для оценки напряжённости поствакцинального иммунитета были проведены серологические исследования проб крови (РЗГА). Кровь для серологических исследований получали на 40-е сут. жизни птицы, согласно технологии, действующей на данном предприятии.
Полученный в ходе экспериментальных исследований цифровой материал обрабатывали с помощью биометрических методов.
Результаты исследований
При анализе результатов гематологических исследований установлено, что содержание эритроцитов и гемоглобина в периферической крови индюшат опытной и контрольной групп не имело достоверных различий. При определении относительного количества лимфоцитов, зарегистрировано их увеличение у птиц в опытной группе на 11,2 % в сравнении с контролем (p<0,001). Количество псевдоэозинофилов в опытной группе ниже на 4,8 %, чем в контрольной. В опытной группе отмечено снижение эозинофилов и моноцитов на 2,6 % и 3,2 % соответственно в сравнении с контролем. Достоверной разницы в количестве базофилов не установлено (табл. 1).
Таблица 1
Гематологические показатели крови индюшат при применении препарата ветостим
|
Группа птиц |
Псевдоэозинофилы, % |
Эозинофилы, % |
Моноциты, % |
Базофилы, % |
Лимфоциты, % |
Эритроциты, 1012/л |
Гемоглобин, г/л |
|
Контроль |
37,4±1,7 |
5,0±0,5 |
5,4±0,5 |
1,8±0,6 |
50,4±1,6 |
2,08±0,18 |
104,0±5,4 |
|
Ветостим, 0,1 мг/кг |
32,6±0,9* |
2,4±0,5** |
2,2±0,4*** |
1,2±0,4 |
61,6±1,3*** |
1,86±0,16 |
99,8±5,3 |
Примечание: * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001.
Анализ биохимических характеристик сыворотки крови индюшат позволил установить, что достоверных изменений в количестве общего белка, глобулинов, альбумина и креатинина зарегистрировано не было. Количество глобулинов в контрольной группе было меньше на 3,4 г/л, чем в опытной, но не достигало достоверной разницы. Содержание щелочной фосфатазы в опытной группе увеличилось в 1,4 раза и составило 1944,6 МЕ/л, что на 536,4 МЕ/л больше, чем в контрольной группе (p<0,001) (табл. 2).
Таблица 2
Биохимические показатели крови индюшат при использовании препарата ветостим
|
Группа птиц |
Общий белок, г/л |
Глобулины, г/л |
Альбумин, г/л |
Креатинин, мкмоль/л |
Щелочная фосфотаза, МЕ/л |
|
Ветостим, 0,1 мг/кг |
29,9±2,3 |
19,3±1,8 |
10,6±0,9 |
39,6±3,2 |
1944,6±83,4*** |
|
Контроль |
28,1±1,2 |
15,9±0,9 |
12,2±0,8 |
37,9±2,7 |
1408,2±47,2 |
Примечание: * p<0,05; ** p<0,01; *** p<0,001.
Содержание иммунокомпетентных клеток у индюшат, привитых вакциной Авивак-НБ в сочетании с иммуномодулятором, достоверно выше, чем в группе, где не применяли Ветостим (Р<0,001). Также отмечено увеличение функциональной активности псевдоэозинофилов в НСТ-тесте (0,66±0,06; 0,50±0,002 ед. оп. пл.; Р<0,05). Усиленная фагоцитарная активность псевдоэозинофилов способствует разрушению, циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), о чем свидетельствует уменьшение их концентрации в сыворотке крови (66,00±14,90; 148,60±19,50 у.е.; Р<0,05) (табл. 3).
Таблица 3
Иммунологические показатели крови индюшат при использовании препарата Ветостим
|
Иммунологические показатели |
Группа животных |
||
|
Контроль |
Опытная группа |
||
|
M±m |
M±m |
Р |
|
|
Лейкоциты, тыс/мкл |
17,40±2,01 |
26,25±1,05 |
<0,01 |
|
Т-лимфоциты, тыс/мкл |
1,08±0,11 |
3,50±0,33 |
<0,001 |
|
Т-киллеры, тыс/мкл |
0,71±0,06 |
3,27±0,35 |
<0,001 |
|
В-лимфоциты, тыс/мкл |
0,75±0,13 |
2,70±0,24 |
<0,001 |
|
НСТ-тест, ед. оп. пл. |
0,50±0,02 |
0,66±0,06 |
<0,05 |
|
ЦИК, у.е. |
148,60±19,50 |
66,00±14,90 |
<0,05 |
При оценке напряженности иммунитета к вирусу Ньюкаслской болезни, после применения живой вакцины в сочетании с препаратом Ветостим, было установлено, что средний титр антител в опытной группе был выше на 0,29 log2, чем в контрольной, где данный показатель составил 4,58 log2. При этом эффективность иммунизации в опытной группе выше на 17 %, в сравнении с контрольной группой.
Заключение
Таким образом, иммунный статус у индюшат, иммунизированных вакциной Авивак-НБ в сочетании с препаратом Ветостим, характеризуется повышенным содержанием в крови Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов и Т-киллеров (Р<0,001) и увеличением показателей в НСТ-тесте (Р<0,05). Значительный рост числа иммунокомпетентных клеток и усиление функциональной активности лейкоцитов, а также увеличение титров антител к вирусу Ньюкаслской болезни отражают повышенную устойчивость к данному заболеванию, индуцированную при сочетанном введении препарата Ветостим с вакциной.
Рецензенты:
Новицкий А.А., д.вет.н., профессор, профессор кафедры микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина, г. Омск.
Бажин М.А., д.вет.н., профессор, заведующий лабораторией эпизоотологии и мер борьбы с туберкулезом ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных» Российской академии сельскохозяйственных наук, г. Омск.