Одним из проявлений глазной инфекции является полиморбидное течение, в ходе которого из-за первичной вирусной инфекции, сопровождающейся образованием фолликулов, происходит вторичное бактериальное или грибковое обсеменение слизистых оболочек, что требует включения в состав глазных капель репаративного и антиоксидантного агента. В качестве оптимального репаративного агента нами был выбран цианокобаламин, обладающий выраженной активностью и стимулирующий синтез пуриновых нуклеозидов, к которым относится ацикловир. Другим проявлением вторичных глазных инфекций является грибковое поражение поврежденной слизистой оболочки глаза, что обусловливает необходимость введение антибактериального агента, в роли которого, согласно проведенным микробиологическим исследованиям, выбран ципрофлоксацин.
Однако разработка современного комплексного препарата для лечения конъюнктивитов не может быть осуществлена без разработки современного метода анализа. В ходе изучения научной и патентной литературы данных было установлено, что основным методом анализа ацикловира в различных лекарственных формах в общемировой практике является высокоэффективная жидкостная хроматография.
ВЭЖХ, интенсивно развиваясь несколько последних десятилетий, зарекомендовала себя в качестве одного из самых универсальных методов разделения и фармакопейного анализа субстанций и лекарственных средств.
Рассматривая методы анализа ципрофлоксацина в современной литературе, было установлено, что во всех мировых фармакопеях используется метод ВЭЖХ. Полученные результаты представлены в таблице 1.
Таблица 1. Сравнительная характеристика методов анализа ципрофлоксацина методом ВЭЖХ в различных фармакопеях мира
|
Фармакопеи, страна |
Условия хроматографирования |
||||||
|
Подвижная фаза |
Колонка |
Скорость потока, объем пробы |
Детектор, длина волны, |
Количество примесей |
Время хромато-графирования |
Число теорети-ческих тарелок |
|
|
ГФ XII[3] |
Данные отсутствуют |
||||||
|
БФ(белорусская фармакопея)[4] |
ацетонитрил Р - раствор 2,45 г/л кислоты фосфорной Р, доведенный до рН 3,0 триэтиламином Р, (13:87, об/об) |
0,25 м с внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем окта- децилсилильным с размером частиц 5 мкм; |
1,5 мл/мин, 50 мкл |
УФ, 278 нм |
Общая сумма примесей не более 0,5%, |
2х кратное время удерживания ципрофлоксацина |
Не указано |
|
BP (британская фармакопея 2013)[5] |
Смесь из 13 объемов ацентонитрила и 87 объемов 2,45 г/л раствора фосфорнй кислоты до рН 3,0 с триэтиламином |
Колонка 25 см *4,6 мм октадецильного силикагеля для хроматографии 5 мкм, температура колонки 40 градусов |
1,5 мл/мин, 50 мкл. |
УФ 278 нм |
Не более 0,5% сумма примесей |
Двойное время удерживания ципрофлоксацина |
Не указано |
|
USP 36 (американская фармакопея)[6] |
Подвижная фаза ацетонитрил и 0,025 М фосфорная кислота, доведение триэтиламином до рН 3,0+- 0,1 (13:87( |
4,6 мм*25 см, частицы L1,температура колонки 30 градусов цельсия |
1,5 мл/мин 10 мкл |
УФ, 278 ни |
Не более 1,5% |
Время удерживания 6,4-10,8 мин |
Не менее 2500 |
|
EPh (европейская фармакопея)[7] |
13 объемов ацетонитрила и 87 объемов 2,45 г/л раствором фосфорной кислоты, рН 3,0 с триэтиламином |
Колонка длиной 25 см *4,6 мм, с октадецильным силикагелем для хроматографии 5 мкм, температура 40 градусов цельсия |
1,5 мл/мин, 50 мкл |
УФ 278 нм |
Не более 0,5% |
Двойное время удерживания ципрофлоксацина |
Не указано |
Как видно из таблицы 1, требования к анализу ципрофлоксацина в ведущих фармакопеях в целом одинаковы. В ГФ XII не приводится информация об анализе ципрофлоксацина методом ВЭЖХ. Только USP 36 в качестве одного из показателей пригодности хроматографической системы выдвигает «количество теоретических тарелок», характеризующее качество используемой колонки. Также несколько изменяется в USP 36 температура колонки до 30 градусов Цельсия, по сравнению с остальными фармакопеями, а также четко регламентируется временной интервал выхода пика ципрофлоксацина.
Для анализа репаративного агента, в роли которого был выбран цианокобаламин, используется в основных мировых фармакопеях как метод ВЭЖХ, сравнительный анализ которого представлен в таблице 2, так и титриметрический метод, а также ТСХ.
Таблица 2. Сравнительная характеристика методов анализа цианокобаламина методом ВЭЖХ в различных фармакопеях мира
|
Фармакопеи, страна |
Условия хроматографирования |
|||||||
|
Подвижная фаза |
Колонка |
Скорость потока, объем пробы |
Детектор, длина волны, |
Количество примесей |
Время хромато-графирования |
Число теоретических тарелок |
||
|
ГФ XII |
Данные отсутствуют |
|||||||
|
БФ(белорусская фармакопея) |
смесь из 26,5 объемов метанола Р и 73,5 объемов раствора 10 г/ динатрия гидрофосфата Р, доведенного до рН 3,5 кислотой фосфорной Р (раствор годен в течение 2 дней); |
0,25 м и внутренним диаметром 4 мм, заполненная силикагелем октилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм; |
0,8 мл/мин, 30 мкл |
УФ, 361 нм. |
Сумма примесей не более 3% |
3х-кратное время удерживания цианокобаламина |
Не указано |
|
|
BP (британская фармакопея 2013) |
Мобильная фаза из 26,5 объемов метанола и 73,5 объемов 10 г/л раствора калия гидрофосфата до рН 3,5 с фосфорной кислотой (срок годности двое суток) |
Колонка 25 см * 4 мм с октадециольным силикагелем для хроматографии 5 мкм. |
0,8 мл/мин,20 мкл |
УФ, 361 нм |
Сумма примесей не более 3% |
тройное время удерживания цианокобаламина |
Не указано |
|
|
EPh (европейская фармакопея 2010) |
26 объемов метанола и 75,5 объема натрия гидрофосфата до рН 3,5 с фосфорной кислотой (раствор годен 2 дня) |
Колонка длиной 25 см , ширина 4 мм, стационарная фаса октадецильный силикагеля для хроматографиии 5 мкм |
0,8 мл/мин, 20 мкл |
361 нм, УФ |
Сумма примесей не более 3% |
3х-кратное время удерживания цианокобаламина |
Не указано |
|
Как видно из таблицы 2, в ведущих международных фармакопеях требования к анализу цианокобаламина идентичны, однако европейская фармакопея 2010 г. регламентируется несколько различное содержания объема метанола и натрия гидрофосфата в составе подвижной фазы, а британская фармакопея 2013 г. регламентирует включение в состав подвижной фазы калия гидрофосфата. Однако рН растворов в трех рассмотренных методиках остается неизменным. Также ни в одной из рассмотренных фармакопей не приводится количество теоретических тарелок для пика цианокобаламина.
Таким образом, можно сделать вывод, что в настоящее время ведущим методом исследования, который описан во многих фармакопеях мира, является ВЭЖХ. Для разработки метода количественного определения ципрофлоксацина и цианокобаламина является актуальной проблема создания чувствительного и высокоточного метода анализа.
Рецензент:
Степанова Э.Ф., д.ф.н., профессор кафедры «Технологии лекарств» Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск;
Голивец Т.П., д.м.н., профессор, заведующая кафедрой терапии ФПМО МИ НИУ «БелГУ», г. Белгород.