Данные относительно влияния инфицирования ВГС на течение ВИЧ-инфекции остаются противоречивыми. Ряд ученых отмечает более быстрое прогрессирование ВИЧ-инфекции у пациентов с ВГС [2, 3, 8]. Часть ученых отмечает, что никакого значимого влияния ВГС на число Т-хелперов, скорость развития СПИД или смертность у ВИЧ-инфицированных лиц не наблюдается [7].
Целью нашей работы стало изучение влияния ХВГС на субпопуляционный состав лейкоцитов и вирусную нагрузку ВИЧ у ВИЧ-инфицированных потребителей инъекционных наркотиков.
Материалы
В исследовании приняли участие 62 ВИЧ-инфицированных лица с III и IVА стадией заболевания по Покровскому, находящихся на диспансерном наблюдении в инфекционном отделении для лечения больных ВИЧ/СПИДом Клиники ГБОУ ВПО ЮУГМУ Минздрава России. Среди ВИЧ-инфицированных ПИН, вошедших в исследование, большая часть использовала героин или «ханку» (опиоидный наркотик кустарного производства).
Для исключения влияния стадии заболевания на результаты сравнения был проведен анализ отдельно для пациентов с III и IVА стадиями заболевания. ВИЧ-инфицированные лица каждой стадии были разделены на 2 группы - лица, не являющимися ПИН, без сопутствующего заболевания ХВГС (группа 1) и ПИН с сопутствующим диагнозом ХВГС (группа 2). Среди пациентов с III стадией заболевания в группу 1 вошли 25 человек, в группу 2-17 человек. Среди пациентов с IVА стадией заболевания в группу 1 вошли 5 человек, в группу 2-15 человек.
Среди ВИЧ-инфицированных лиц с III стадией в группе 1 средний возраст составил 30,0±6,3 лет, в группе 2 - 29,9±3,3 лет. Среди ВИЧ-положительных лиц с IVА стадией в группе 1 средний возраст составил 26,8±4,1 лет, в группе 2 - 32,8±4,0 лет. Все пациенты, включенные в исследование, не получали антиретровирусную терапию.
ВГС у большинства ВИЧ-инфицированных лиц, включённых в исследование, был охарактеризован врачом-клиницистом как ХВГС минимальной степени активности.
Методы
Для изучения субпопуляционного состава лейкоцитов нами была использована новейшая система расширенного дифференциального подсчета лейкоцитов методом проточной цитометрии CytoDiff производства компании BeckmanCoulter. Система CytoDiff включает в себя панель моноклональных антител, реагенты для контроля качества и соответствующее программное обеспечение. Анализ проводился на проточном цитометре FC500 Cytomicsпроизводства BeckmanCoulter.
Реагенты CytoDiff представляют собой пятицветную комбинацию из 6 моноклональных антител, которая позволяет с помощью проточной цитометрии определить 9 гематологических параметров в образце цельной крови. Комбинация антител CD36‑FITC/CD2‑PE/CD294(CRTH2)‑PE/CD19‑ECD/CD16‑PC5/CD45‑PC7.
Реагент предназначен для использования в рутинной практике клинической лаборатории для invitro диагностики.
При использовании значения общего количества лейкоцитов (WBC), полученного с помощью автоматического гематологического анализатора, анализ образца, окрашенного реагентом CytoDiff, позволяет получить как значения относительного содержания тех или иных популяций клеток, так и абсолютные значения.
Используемая стратегия гейтирования позволяет обнаружить циркулирующие лейкоциты, среди которых в дальнейшем определяют 9 гематологических параметров. Результат представляется в виде процентного содержания положительно-окрашенных клеток.
В образцах цельной крови система определяет следующие гематологические параметры (таблица 1).
Таблица 1
Популяции лейкоцитов и соответствующие им фенотипы, доступные для определения с помощью системы CytoDiff
|
Популяция клеток |
Условное обозначение (фенотип) |
|
В-лимфоциты |
Ly B (SSClow, CD45high, CD16-, CD2 и CRTH2-, CD19+) |
|
Т- и NK-клетки CD16- |
T- (SSClow, CD45high, CD16-, CD2+ или CRTH2+) |
|
Т- и NK-клетки CD16+ |
T+ (SSClow, CD45high, CD16+, CD2+ или CRTH2+) |
|
Т- и NK-клетки |
Lymph T&NK |
|
Общее количество лимфоцитов |
LymphTotal |
|
Популяция клеток |
Условное обозначение (фенотип) |
|
Моноциты CD16- |
M- (SSCint, CD16-, CD2- и CRTH2-, CD19-, CD36+) |
|
Моноциты CD16+ |
M+ (SSCint, CD16+, CD2- и CRTH2-, CD19-, CD36+) |
|
Общее количество моноцитов |
MonoТotal |
|
Незрелые гранулоциты |
Imm Gr (SSChigh, CD45int, CD16-, CD2- и CRTH2-) |
|
Эозинофилы |
Eo Total (SSChigh, CD45high, CD16-, CD2+ или CRTH2+) |
|
Зрелые нейтрофилы |
Neutro Mature (SSChigh, CD45high, CD16+) |
|
Общее количество нейтрофилов |
NeutroTotal |
|
Предшественники В-лимфоцитов |
Xb (SSClow, CD45low, CD16-, CD2 и CRTH2-, CD19+) |
|
Предшественники Т-лимфоцитов |
Xt (SSClow, CD45low, CD16-, CD2+ или CRTH2+) |
|
Предшественники моноцитов |
Xm |
|
Базофилы |
Baso Total (SSCint, CD45int, CD16-, CD2+ или CRTH2+) |
Для определения числа Т-хелперов была использована дополнительная панель моноклональных антител CD45-FITC/CD4-RD1/CD3-PC5. Анализ проводился на том же проточном цитометре FC500 Cytomics.
Определение вирусной нагрузки ВИЧ проводилось методом ПЦР на автоматизированной системе для анализа нуклеиновых кислот Abbott m2000rt.
Результаты и обсуждение
Среди ВИЧ-инфицированных пациентов с III стадией заболевания в группе 2 относительно группы 1 наблюдается снижение относительного и абсолютного числа Т-хелперов (таблица 2).
Таблица 2
Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с III стадией заболевания с учетом сопутствующегозаболевания ХВГС и приема наркотиков, (M±m)
|
Показатели |
Группа 1 (ПИН-, ХВГС-) |
Группа 2 (ПИН+, ХВГС+) |
|
n=25 |
n=17 |
|
|
Т-хелперы, % |
27,75±1,63 |
20,37±1,77 |
|
Т-хелперы, клеток/мкл |
536,45±31,39 |
405,43±47,84 |
Примечание: в таблицах 2 и 3 указаны только статистически значимые показатели, р<0,05.
Среди ВИЧ-инфицированных пациентов с IVА стадией заболевания в группе 2 относительно группы 1 наблюдается снижение относительного числа лимфоцитов, T- и NK-клеток, в том числе CD16-негативных. В группе 2 также зафиксировано снижение абсолютного количества Т-хелперов и CD16-негативных T- и NK-клеток (таблица 3).
Таблица 3
Сравнительный анализ показателей иммунной системы у ВИЧ-инфицированных лиц с IVА стадией заболевания с учетом сопутствующего заболевания ХВГС и приема наркотиков, (M±m)
|
Показатели |
Группа 1 (ПИН-, ХВГС-) |
Группа 2 (ПИН+, ХВГС+) |
|
n=5 |
n=15 |
|
|
Т- и NK-клетки CD16-, % |
39,60±4,09 |
22,29±3,12 |
|
Т- и NK-клетки CD16-, клеток/мкл |
2327,21±793,33 |
1146,21±158,68 |
|
Т- и NK-клетки, % |
42,56±4,31 |
25,15±3,23 |
|
Общее количество лимфоцитов, % |
45,89±4,87 |
28,13±3,33 |
|
Т-хелперы, клеток/мкл |
543,00±150,71 |
246,50±50,67 |
Достоверных различий по уровню вирусной нагрузки ВИЧ не выявлено.
К настоящему времени вопрос о влиянии ВГС на течение ВИЧ-инфекции изучен недостаточно. Результаты нашего исследования показывают, что сопутствующее заболевание ХВГС усугубляет состояние иммунной системы ВИЧ-инфицированных лиц, что выражается в более низком уровне Т-хелперов. По данным ряда ученых, уже при моноинфекции ВГС фиксируется снижение CD4+ клеток [4]. В контексте же ВИЧ-инфекции у ВГС может быть особая роль. ВГС активирует клетки иммунной системы, а активация клеток является обязательным условием для репликации ВИЧ.
Нельзя также исключить воздействия наркотических средств на иммунную систему ПИН. У опиатных наркоманов более высокий уровень инфекционной заболеваемости, что может быть непосредственно связано с ослаблением функций иммунной системы. Морфин и героин усиливают апоптоз лимфоцитов, активируя клетки через их μ-опиоидные рецепторы [5]. В контексте ВИЧ-инфекции активация клеток может играть дополнительную роль - активация необходима для репликации вируса.
Возможны и другие причины. Согласно литературным данным, у ВИЧ-инфицированных ПИН наблюдается повышенный уровень кортизола [1]. При этом известно, что кортикостероиды оказывают негативное влияние на лимфоциты: индуцируют апоптоз и эмиграцию тимоцитов, вызывают апоптоз и подавляют пролиферацию зрелых лимфоцитов.
Таким образом, мы отмечаем негативное влияние коморбидной патологии в виде наркотической зависимости и ХВГС на течение ВИЧ-инфекции, что проявляется в более выраженном дефиците лимфоцитов CD4+. При этом наличие ХВГС не влияет на концентрацию РНК ВИЧ в периферической крови пациентов.
Выводы
Вопрос о влиянии ХВГС на течение ВИЧ-инфекции у ВИЧ-инфицированных ПИН до сих пор изучен недостаточно. Полученные в нашей работе данные показывают, что сопутствующее заболевание ХВГС и внутривенное употребление наркотиков приводят к более выраженному дефициту Т-хелперов у ВИЧ-инфицированных лиц. Такие пациенты требуют более пристального внимания врачей-клиницистов при прогнозировании развития ВИЧ-инфекции и назначении антиретровирусной терапии.
Рецензенты:
Абрамовских О.С., д.м.н., начальник отдела аспирантуры и докторантуры, профессор кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики, ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г.Челябинск.
Савочкина А.Ю., д.м.н., заведующая Центральной научно-исследовательской лабораторией, профессор кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии и клинической лабораторной диагностики, ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Челябинск.