Множественная миелома (ММ) – β-клеточное лимфопролиферативное заболевание, основным морфологическим субстратом которого являются клональные плазматические клетки, продуцирующие моноклональные иммуноглобулины (Ig A,IgМ,IgG,Ig D,IgЕ) и (kl) легкие цепи.
Согласно иммунохимической классификации выделяют варианты ММ: IgA, IgМ, IgG, IgD, IgE, болезнь легких цепей (миелома Бенс-Джонса), диклоновые миеломы и несекретирующая миелома [1].
Общеизвестно, что парапротеинемии обычно сопровождаются выраженным снижением продукции нормальных иммуноглобулинов и повышенным восприимчивости к инфекциям.
Моноклональная секреция обуславливает такие проявления заболевания, как синдром повышенной вязкости крови и хроническая почечная недостаточность.
При ММ считаются достоверными классическими диагностическими признаками: наличие плазматических клеток в костномозговом пунктате более 10 %, остеолитические деструктивные изменения в костной ткани и парапротеинемии и /или протеинурии Бенс-Джонса [5;6].
По данным исследователей наиболее часто встречающиеся ММ: Ig G (>65 % случаев), Ig A(20-26 % случаев), Ig D и Ig М (1 % и 0,5 % случаев соответственно). Белок Бенс-Джонса (легкие цепи иммуноглобулинов чаще k-цепи) выявляется у 10 % больных, страдающих ММ [3].
Класс и тип секретируемых миеломными клетками иммуноглобулинов определяет иммунохимический вариант заболевания.
Целью нашего исследования явилось определение изотипов тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов с помощью моноклональных антител в сыворотке крови у больных множественной миеломой и потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток киргизской национальности.
Материалы и методы исследования
Больные ММ в количестве 108 человек типированы в лаборатории иммунологии на иммуноглобулины IgA, IgМ,IgG,IgD, IgE (22 больных киргизской национальности и 86 больных русскоязычного населения Киргизии). Больные наблюдались в Национальном госпитале МЗ Киргизской Республики (граждане Киргизской Республики). Больные разных стадий течения заболевания [2] и в возрасте от 33–90 лет. Из них 44 больных (20 больных киргизской национальности и 24 больных из русскоязычного населения Киргизии) с сентября 1995 года по ноябрь 1999 года исследованы на парапротеины с помощью моноклональных антител в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ (г. Санкт- Петербург). С 2005 г. по 2013 г. исследован материал от 78 добровольных потенциальных доноров костного мозга киргизской национальности в возрасте от 18–45 лет, (женщин – 25, мужчин – 53) из Национального Регистра гемопоэтических стволовых клеток Киргизии в Санкт-Петербурге, а также от 7 больных ММ (2 больных киргизской национальности и 5 больных русскоязычного населения Киргизии) исследованы в Санкт-Петербургском НИИЭиМ имени Пастера, Национальном госпитале МЗ Киргизской Республики, Евразийском центре онкогематологии, иммунологии и терапии, на содержание изитипов тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов с помощью моноклональных антител типированы в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ ФАЗСР и в лаборатории «ИнтерМед».
Диагноз ММ устанавливали на основании стандартных критериев, включающих классическую триаду: плазмацитоз костного мозга не менее 10 %, костные повреждения различной степени – от остеопороза до остеолизиса, моноклональный белок в крови и/или моче.
У каждого больного учитывались клинические и лабораторные показатели, стадия заболевания, возраст, пол с последующей их прогностической значимостью. Определены иммунологические варианты [1] продукции иммуноглобулинов типов тяжелых и легких цепей. Больные ММ типированы в лаборатории иммунологии КНИИК на иммуноглобулины Ig А, Ig M ,IgG, IgD, IgE - всего108 больных. Из них 22 больные ММ киргизской национальности типированы с помощью моноклональных антител в лаборатории гибридомной технологии. При этом выявлены гиммуноглобулины IgG1к-цепи в I-ой стадии у 1-го больного, во II-ой стадии у 1-ой больной и в III-ей стадии у 1-го больного, IgG1λ-цепи во II-ой стадии у 1-ой больной и в III-ей стадии у 1-ой- больной, IgG2k-цепи во II-ой стадии у 1- го больного, IgG2λ-цепи во II-ой стадии у 1-го больного и в III-ей стадии у 1 больной, Ig A k-цепи в I-ой стадии у 1-го больного, во II-ой стадии у 6-х больных и в III-ей стадии у 3-х больных. Дополнительно 4-х больных исследовали на иммуноглобулин Ig D и Ig E. При этом выявлено в I-ой стадии у 1-го больного Ig Dλ-цепи, во II стадии у 2-х больных -Ig Dλ-цепи и во II-ой стадии у 1-го больного (биклональная опухоль Ig Ак и Ig Ек-цепи).
Типированы в лаборатории иммунологии КНИИК на иммунохимический вариант иммуноглобулинов 86 больных ММ русскоязычного населения Киргизии, из них у 29 больных определены парапротеины с помощью моноклональных антител в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ ФАЗСР и выявлены иммуноглобулины.IgG1k-цепи в I-ой стадии у 1-ой больной, во II стадии – у 2-х больных и в III стадии у 2-х больных,Ig G1λ-цепи в I-ой стадии у 1-ой больной, во II стадии – у 2-х больных и в III стадии у 1-го больного, Ig G2λ -цепи во II стадии – у 2-х больных и в III стадии у 1-го больного и Ig G2k- цепи во II стадии – у 2-х больных и в III стадии у 3-х больных, иммуноглобулин Ig Ak-цепи – в I-ой стадии у 1-ой больной, во II стадии – у 1-ой больной и в III стадии у 3-х больных, Ig Е – в I-ой стадии у 1-ой больной и Ig М – у 3-х больных в III стадии, нет М-пика у 1-ой больной в I-ой стадии и у 1-ой больной в III-ей стадии.
Из 78 добровольных потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток киргизской национальности, которые себя считали практически здоровыми людьми, с профилактической целью исследованы на содержание свободных цепей иммуноглобулинов с помощью моноклональных антител и выявлены у 4-х доноров мужчин в возрасте от 29–45 лет повышенные уровни иммуноглобулинов IgAk -цепи у 1-го донора, IgGk-цепи – у 1-го донора, IgAλ-цепи у 1-го донора и IgGλ-цепи у 1-го донора.
Доставка и транспортировка анализов проводилось в минихолодильных контейнерах при -10 оС.
Все моноклональные антитела (МкАТ) получены и описаны в лаборатории гибридомной технологии ФГУ ЦНИРРИ ФАЗСР, г.Санкт- Петербурга.
Типирование иммуноглобулинов: выполнено методом прямого твердофазного иммуноферментного анализа. Парапротеины были иммобилизованы на твердой фазе из сывороток, разведенных 1:105 и 1:106 на 0,1 М карбонат-бикарбонатном буфере pH-9,5. Изотипы тяжелых цепей и типы легких цепей иммуноглобулинов определяли при помощи конъюгатов моноклональных антител МкАТ с пероксидазой хрена [4].
Статистическая обработка полученных результатов включала в себя анализ стандартных критериев. X2-квадрат использовался для оценки достоверности различий по встречаемости определенных признаков между контрольной группой и группой пациентов ММ. Определение величины "р", соответствующей найденному значению. X2-квадрат проводили с учетом одной степени свободы. Все математические расчеты и общий статистический анализ полученных исследований проводили с помощью персонального компьютера с использованием пакета прикладных программ для Электронных Таблиц – Microsoft -ExcelM Версия 7,0 для Windows 95, для Windows-2010, Statistica -5.
Результаты и их обсуждение
Содержание иммунохимических вариантов иммуноглобулинов у больных ММ среди жителей Киргизии при первичной постановке диагноза представлено в таблице 1.
Таблица 1
Сравнительная характеристика содержания иммунохимических вариантов
иммуноглобулинов у больных ММ жителей Киргизии
|
иммунохимические варианты исследуемой группы больных п=108 |
больные множественной миеломой русскоязычного населения Киргизии п= 86 |
больные множественной миеломой киргизской национальности п=22 |
|
Ig А |
32% |
68% |
|
Ig M |
100% |
- |
|
Ig G |
69% |
31% |
|
Ig E |
100% |
- |
|
Ig D |
- |
100% |
|
нет М-пика |
100% |
- |
|
биклональная опухоль (IgE,Ig А) |
- |
100% |
Примечание: р<0,05.
Показано, что наиболее чаще встречаются Ig A, IgD,(IgE,IgA) и несколько реже IgG у больных ММ киргизской национальности, выявляется Ig A-миелома в 68 % случаев, Ig D-миелома (в 100 % случаев), продуцируется два моноклональных белка – биклональная опухоль Ig А и Ig Е-миелома (в 100 %) и Ig G -миелома в 31 % случаев, в то же время как вариант Ig М-миеломы (в 100 % случаев) не выявлялся среди больных множественной миеломой киргизской национальности. В отличие у больных ММ русскоязычного населения Киргизии Ig A-миелома встречается в 32 % случаев, Ig Е-миелома в 100 %, Ig G-миелома в 69 % случаев, практически (в 100 % случаев) встречается Ig М-миелома и с отсутствием М-пика и не выявлялся Ig D-миелома среди больных ММ русскоязычного населения.
Рис. 1. Тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов у больных с множественной миеломой жителей Киргизии
По результатам проведённого исследования частоты встречаемости тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов среди больных ММ жителей Киргизии, показано, что иммуноглобулин Ig G1λ-цепи выявляются в 32 % случаев, Ig G2k-цепи в 20 % случаев, Ig G1k-цепи в 38 % случаев, Ig G2λ-цепи в 40 % случаев, IgА k-цепи в 68 % случаев среди больных множественной миеломой киргизской национальности.
У больных ММ среди русскоязычного населения Киргизии выявляются следующие иммуноглобулины Ig G1λ -цепи в 68 % случаев, Ig G2k-цепи в 80 % случаев, Ig G1k-цепи в 62 % случаев, Ig G2λ-цепи в 60 % случаев и Ig А k-цепи в 32 % случаев. Иммунохимический вариант Ig А λ-цепи не выявлялся среди больных ММ киргизской национальности и среди больных ММ русскоязычного населения Киргизии (рис.1).
Рис. 2. Изотипы тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов у больных ММ и доноров гемопоэтических стволовых клеток киргизской национальности
При сопоставлении встречаемости формы иммунохимического варианта иммуноглобулинов и (k,λ) легких цепей показано, что у больных множественной миеломой киргизской национальности встречаются вариант IgAk-цепи в 95 % случаев, Ig Gk-цепи в 80 % случаев, IgGλ-цепи в 85 % случаев и не встречаются IgAλ-цепи. У потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток киргизской национальности выявляются IgAk-цепи в 5 % случаев, Ig Gk-цепи в 20 % случаев, IgGλ-цепи в 15 % случаев и IgAλ-цепи практически в 100 % случаев (рис. 2).
Заключение
Таким образом, при исследовании иммунохимических вариантов иммуноглобулинов с помощью моноклональных антител у больных ММ киргизской национальности чаще выявляются IgAk-цепи, IgGλ-цепи, несколько реже IgGk-цепи, практически не выявляется IgAλ-цепи и среди потенциальных доноров гемопоэтических стволовых клеток выявляются повышенные титры иммуноглобулинов IgA-k, IgA-λ, Ig G-k, IgG-λ легкие цепи.
Поскольку среди здоровых потенциальных доноров костного мозга при профилактических исследованиях могут выявляться высокие титры иммуноглобулинов с повышенными (k,l) цепями, при планировании высокотехнологичного метода терапии близкородственной, неродственной трансплантации и подборе доноров костного мозга при множественной миеломе и при других онкогематологических заболеваниях необходимо – улучшить алгоритм безопасности костного мозга и качественный отбор донора.
Рецензенты:
Ценёва Г.Я., д.м.н., профессор ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г.Санкт-Петербург.
Краева Л.А., д.м.н., ведущий научный сотрудник, ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург.