В настоящее время проблема заболеваемости множественной миеломой продолжает оставаться весьма актуальной и современной.
Множественная миелома (ММ) встречается в различных странах среди представителей разных рас и считается как «болезнь пожилого возраста». Средний возраст больных составляет 68 лет, однако, в последние годы отмечается тенденция к омоложению заболевания. Множественная миелома чаще распознается на поздних сроках, так как отсутствуют маркеры злокачественного заболевания, особенно на раннем этапе её развития.
Возникновение и развитие ММ - это сложный процесс, обусловленный сочетанным воздействием многообразных внешних и внутренних факторов. Изучение диагностического значения и роли системы «human leucocyte antigens» (HLA) при гемобластозах и лимфопролиферативных заболеваниях имеет достаточно длинную историю, но полученные ранее данные в распределении антигенов HLA-аллелей у больных с онкогематологической патологией весьма скудны и противоречивы.
В настоящее время практически отсутствуют работы, направленные на изучения генного полиморфизма HLA-генов локусов (А и В) и локуса DRB1* среди этнических групп и национальностей с множественной миеломой. Одни исследователи отмечают увеличение частоты следующих антигенов в группе больных с множественной миеломой среди смешанной популяции народов СССР-А28, В27[5],HLA-A11,HLA-B7 [2].
В работе [3] автор показал, что у больных ММ жителей Северо-западного региона Российской Федерации, антиген HLA-B7 является генетическим маркером ММ с низкой пролиферативной активностью у женщин и ассоциирован с дисрегуляцией в системе ИЛ-6, а антиген HLA-A11- характеризует ММ с изолированной продукцией легких цепей иммуноглобулина у мужчин.
Автором работы [4] обнаружены и охарактеризованы информативные признаки для каждого иммунохимического варианта миеломы, предрасполагающие HLA-специфичности: AI9 и В16 - для миеломы с секрецией Ig G; для варианта Ig A является HLA-A3, для Бенс-Джонса A10, В18, DRB1*09 и DQB 1*303. К заболеванию миеломой в молодом возрасте предрасполагает HLA-A28.
Авторами в работе Smith G. и соавт [6] выявлена повышенная встречаемость частоты антигенов HLA-А9 у белокожих жителей США, страдающих множественной миеломой c продукцией Ig A.
Все указанные работы проводились в популяциях разной национальной принадлежности (по смешанному населению).
Данные литературы о наличии ассоциаций между антигенами главного комплекса гистосовместимости и множественной миеломой, крайне противоречивы. Это может быть связано со сложившимся ранее представлением о том, что множественная миелома не является заболеванием, ассоциированным с какими-либо генами или антигенами системы HLA, а также из-за малоизученности этого заболевания среди этнических групп, национальностей, а также с техническими трудностями и высокой стоимостью проведения методов исследования.
Однако для сопоставления данных результатов нас привело использовать результаты данной работы [3], посвященной исследованиям больных с множественной миеломой, проживающих в одной географической местности Северо-западного региона РФ и провести собственное исследование антигенов главного комплекса гистосовместимости HLA-аллелей локуса DRB1* у больных множественной миеломой киргизской национальности.
Целью нашего исследования является изучение иммуногенетических характеристик в распределении по системе HLA-аллелей I и II классов у больных с множественной миеломой киргизской национальности.
Материалы и методы исследования
Общее количество больных множественной миеломой - 44 человек, наблюдавшиеся в Национальном госпитале МЗ Киргизской Республики, Евразийском центре онкогематологии, иммунологии и терапии, граждане Киргизской Республики, из них 22 больных киргизской национальности, типированные для изучения иммунологических и популяционных характеристик по системе HLA-аллелей II класса локуса DRB1* с 1996 года по 1998 год в лаборатории иммунологии Санкт-Петербургской клинической больницы № 31 и 2-ое больные типированы с 2006 по 20012 год в лаборатории «ИнтерМед». Больные разной стадией течения заболевания и возраст больных от 33 до 90 лет.
Данные результаты сопоставлялись с контрольной группой - 20-ю больными множественной миеломой киргизской национальности, типированные по системе-HLA -аллелей 1 класса локусов (А и В) в лаборатории иммунологии Санкт-Петербургской клинической больницы № 31 (Клинический центр передовых медицинских технологий) [1] и 98 больными множественной миеломой жителей Северо-западного региона Российской Федерации [3].
Типирование HLA- антигенов I-класса
Определение HLA-А и В фенотипа обследуемых лиц проводили серологическим методом с использованием панели гистотипирующих антилейкоцитарных сывороток Российского НИИ гематологии и трансфузиологии, позволяющих определить 17 антигенов локуса А и 27 антигенов локуса В.
Типирование HLA-антигенов II-класса
Молекулярное типирование HLA- генов локуса DRB1 проводилось методом полимеразной цепной реакцией, с использованием набора отечественных праймеров фирмы «ДНК-технология» (Москва), позволяющего выделять 13 групп аллелей HLA-DRB*1(базовое разрешение). Геномная ДНК выделялась из мононуклеарных клеток периферической крови (свежей или замороженной при -20 оС), стабилизированной ЭДТА или цитратом натрия (конечная концентрация антикоагулянта 0,5 %), с помощью набора реагентов «НПФ ДНК-Технология» Москва или иммуномагнитным методом с использованием набора фирмы «Dynal». Все этапы амплификации проводились на амплификаторе «ТЕРЦИК» «ДНК-Технология», Москва). Продукт, полученный в ходе амплификации, определяли методом горизонтального электрофореза в 3,2 % агарном геле с визуализацией в ультрафиолетовом свете L=320 nm. Специфичность продукта амплификации сравнивали со стандартным маркером длин ДНК PUC-09.
Статистическая обработка полученных результатов включала в себя анализ стандартных критериев. X2-квадрат, использовался для оценки достоверности различий по встречаемости определенных признаков между контрольной группой и группой пациентов ММ. Определение величины "р", соответствующей найденному значению. X2-квадрат, проводили с учетом одной степени свободы.
Все математические расчеты и общий статистический анализ полученных исследований проводили с помощью персонального компьютера с использованием пакета прикладных программ для Электронных Таблиц - "Microsoft - ExcelM" Версия 7,0 для Windows 95, для Windows-2010, Statistica-5.
Результаты и их обсуждения
Проведённые нами исследования среди больных с множественной миеломой киргизской национальности по изучению главного комплекса гистосовместимости по системе HLA-аллелей 1-II классов, показал, что в результатах анализов частоты встречаемости имеются наиболее распространенные и весьма различающие ряда генов в сопоставлении с больными множественной миеломой жителей Северо-западного региона Российской Федерации [3].
Таблица 1
Частота встречаемости HLA-аллелей I класса больных множественной миеломой киргизской национальности и жителей Северо-западного региона Российской Федерации.
|
HLA локусы (A и B) |
Больные множественной миеломой Северо-западного региона РФ п=98 |
Больные множественной миеломой киргизской национальности п=22 |
|
А24 |
30% р< 0,05 |
10% |
|
А 25 |
42,4% р < 0,05 |
20% |
|
А28 |
8,1% |
20% р < 0,05 |
|
В13 |
6,9% |
30% р < 0,001 |
|
В17 |
7,6% |
20% р < 0,05 |
|
В35 |
23,3% р < 0,05 |
10% |
По результатам нашего исследования (табл. 1) при сравнительном анализе частоты встречаемости HLA-аллелей в локусах (АиВ), чаще встречаются антигены HLA-А28, HLA-В13, HLA-В17 и реже встречаются антигены HLA-А24, HLA-А 25, HLA-В35 у больных множественной миеломой киргизской национальности по сравнению с больными множественной миеломой Северо-западного региона Российской Федерации и имеют высоко статистически достоверные различия.
Таблица 2
Сопоставление HLA-антигенов II класса локуса DRB1* больных множественной миеломой киргизской национальности и жителей Северо-западного региона Российской Федерации.
|
HLA- локус DRB1* |
множественная миелома у больных жителей Северо- западного региона РФ п=98 |
множественная миелома у больных киргизской национальности п=22 |
|
0901 |
1,6% |
20% р < 0,003 |
|
1001 |
0,8% |
10% р < 0,04 |
|
1401 |
21,3% |
20% р < 0,04 |
|
1601 |
2,4% |
20% р < 0,005 |
При сопоставлении результатов анализа по распределению антигенов HLA-аллелей локуса DRB1*II класса больных множественной миеломой киргизской национальности и больных множественной миеломой Северо-западного региона Российской Федерации (табл. 2), показано, что чаще выявляются у больных ММ киргизской национальности гены HLA-DRB1*0901,HLA-DRB1*1001,HLA-DRB1*1601 и несколько реже встречается ген HLA-DRB1*1401.
По значимости отличий встречаемости между больными множественной миеломой киргизской национальности и контролем является ген HLA-DRB1* 1601, что достаточно статистически достоверно р<0,005.
Заключение
Таким образом, по результатам проведенных исследований в распределении HLA-аллелей 1 и II классов у больных ММ, показало, что наиболее характерные для больных множественной миеломой киргизской национальности в распределении HLA-аллелей 1 класса гены в локусе А - HLA-A 28, в локусе В - HLA-B13, B17, а в локусе HLA-DRB1* II класса, оказалось, что у больных множественной миеломой киргизской национальности, чаще выявляются гены HLA-DRB1*0901, HLA- DRB1*1001, HLA-DRB1* 1601 и несколько реже HLA-DRB1*1401.
Выявленные различия в распределении HLA-аллелей следует учитывать при планировании близкородственной и неродственной трансплантации костного мозга, у больных множественной миеломой и при других онкогематологических злокачественных заболеваниях.
Рецензенты:
Козина Л.С., д.б.н., профессор, ведущий научный сотрудник Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии, г. Санкт-Петербург.
Краева Л.А., д.м.н., ведущий научный сотрудник ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург.