Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

Введение

Изучение деградации клеточных белков (протеолиз) является одним из важных направлений биологии. Протеолиз позволяет поддерживать постоянство внутренней среды в клетке, контролировать физиологическое состояние и представляет собой один из универсальных механизмов гомеостаза живой клетки [1].

В организме позвоночных содержится целый набор протеолитических ферментов, кодируемых до 5 % генома, основными из которых являются протеазы, в частности кальпаиновая система. Наличие хотя бы незначительных изменений в нуклеотидной последовательности способствует появлению дополнительных функций измененной системы [2,3]. Так, ген кальпаина - CAPN1, кальций-зависимой протеазы, изменяющей мышечную ткань в процессе автолитического созревания мяса - член широкого семейства цитозольных Са2+-активируемых цистеиновых протеаз, обладающих структурой EF-hand. В кодирующей части этого гена ранее были обнаружены две несинонимические замены, которые приводили к изменениям в аминокислотной последовательности в положениях 316 (глицин на аланин) и 530 (валин на изолейцин). Выявлено, что данная замена сопряжена с повышением интенсивности посмертных автолитических процессов в тканях. Однако не описано влияние данного полиморфизма на общее содержание аминокислот, а также на количественную динамику заменимых и незаменимых аминокислот в отдельности [4,5].

Материалы и методы исследования

Оценка взаимосвязи различных аллельных вариантов гена CAPN1и аминокислотного состава мышечной ткани проведены на модели молодняка калмыцкой породы крупного рогатого скота (КРС). На основе предварительного генетического анализа из 70 бычков месячного возраста было сформировано 3 группы животных (n=15): I - без мутационной аллели (GG); II - гетерозиготное ее проявление (GC); III - с наличием полиморфизма в гене CAPN1 (CC). В последующем, все животные выращивались в одних условиях. Убой проводился в возрасте 14 месяцев.

Генетический анализ для выявления полиморфизма гена CAPN1 проводился с использованием метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (АНК-32, Синтол, Россия). В качестве исследуемого биологического материала в работе использовались образцы крови для выделения ДНК. Выделение ДНК для постановки ПЦР в реальном времени проводилось с использованием набора «ДНК-экстран» (Синтол, Россия). Праймеры синтезированы на основе нуклеотидной последовательности ДНК гена CAPN1 крупного рогатого скота (Синтол, Россия):

5'-AGCAGCCCACCATCAGAGAAA - 3'

5'- TCAGCTGGTTCGGCAGAT - 3'

Исследования проведены на базе Испытательного Центра Всероссийского научно-исследовательского института мясного скотоводства (аккредитация Госстандарта России - № РОСС RU 0001 21 ПФ 59 от 29.08.2008 г.).

Аминокислотный состав длиннейшей мышцы был определен методом капиллярного электрофореза с использованием системы «Капель» путем измерения массовой доли аминокислот.

Статистическая обработка полученного материала проводилась при помощи приложения «Excel» из программного пакета «Office XP» и «Statistica 6.0», включая определение средней арифметической величины (М), стандартной ошибки средней (m).

Результаты исследований

Анализ полученных данных позволил выявить определенные изменения в содержании аминокислот в мышечной ткани животных в связи с наличием мутационной аллели гена CAPN1 в разных исследуемых группах (табл. 1).

Таблица 1. Содержание незаменимых аминокислот в образцах мышечной ткани исследуемых животных

В частности, при относительных незначительных расхождениях по общему уровню незаменимых аминокислот 2,23-3,65 %, по содержанию валина, фенилаланина, в мышечной ткани различия оказались значительными. Так, в образцах, полученных от особей II группы, содержание этих аминокислот оказалось выше аналогичного уровня в I и III группах на 11,7 %, 12,8 % и 1,7 % и 18,8 %. Максимальная динамика замечена в количестве фенилаланина при сравнении с I и III группой, в процентном отношении разница составила 12,8 % и 18,8 % соответственно. В отношении метионина и треонина разница между группами не превышала 3-5 % в пользу II.

Наименее биологически полноценные белки в мышцах были характерны для I группы. Так, по содержанию заменимых аминокислот разница составила со II группой - 0,6 %; с III - 5.2 %. II группа превалировала по значениям серина и гистидина. Разница по серину составила: I-II - 13,5 %, II-III - 3,3 %. Количество гистидина во II группе было выше на 3,4 % и 10,5 % относительно I и III групп соответственно (табл. 2).

Таблица 2. Содержание заменимых аминокислот в образцах мышечной ткани исследуемых животных

С уменьшением содержания аминокислот в мясе понижается энергетическая ценность его белков, а утрата в том числе и незаменимых аминокислот существенно понижает биологическую ценность этих белков, поэтому данный критерий является важным для оценки параметра питательности мясной продукции (табл. 3).

Таблица 3. Содержание незаменимых аминокислот, в 1 г белка длиннейшей мышцы спины бычков, мг/г

В ходе экспериментальных исследований было выявлено, что в исследуемом мясе содержится пониженный уровень валина, метионина и фенилаланина. Несмотря на пониженное содержание относительно эталона (на 30,6 % ниже нормы), различия наблюдаются внутри групп. Так, содержание валина преобладает во II и III группах в сравнении с I на 3,6 %.

Таким образом, можно сделать вывод, что наличие полиморфизма в гене CAPN1 способствует изменению в белковом синтезе, особенно это проявляется на примере валина. Поскольку данная аминокислота является основным звеном в метаболиме в мышцах и восстановлении поврежденных тканей, то можно предположить, что животные, имеющие данную мутацию, будут характеризоваться более ускоренными темпами синтеза мышц и, соответственно, ростом.

Рецензенты:

Лебедев С.В., д.б.н., заведующий экспериментально-биологической клиникой (виварий) ФГБОУ ВПО ОГУ, г. Оренбург.

Дускаев Г.К., д.б.н., заведующий отделом кормления сельскохозяйственных животных и технологии кормов ГНУ ВНИИМС Россельхозакадемии, г. Оренбург.