Введение. Поиск потенциальных антитромботических средств ведется исследователями на протяжении длительного времени. Найдены перспективные вещества среди активаторов фибринолиза, ингибиторов тромбина, ферментов и комплексных препаратов, субстратов растительного происхождения, пептидных ингибиторов тромбинзависимого превращения фибриногена [9]. Несмотря на успех исследователей селективных антитромботических средств, имеющих широкое практическое применение, не существует [1]. Применяемые на практике лекарственные препараты, помимо гемостаза, изменяют многие другие параметры систем организма [2].

Одним из современных направлений в разработке новых лекарственных средств является синтез аналогов и производных применяемых препаратов. Предыдущие исследования подтвердили наличие у ряда производных 3-метилксантина выраженной антиагрегационной активности [3, 6]. Полученные данные способствуют дальнейшим исследованиям по изучению влияния производных ксантина на систему гемостаза и являются основой для поиска селективных ингибиторов функциональной активности тромбоцитов среди впервые синтезированных N7-замещенных производных ксантина, содержащих этильный радикал в положении N1, для создания на их основе избирательно действующих, высокоэффективных лекарственных препаратов.

Цель. Оценить влияние 8 синтезированных производных 1-этилксантина на систему гемостаза in vitro и сравнить с применяемыми в медицине лекарственными препаратами.

Материал и методы исследования. Исследование влияния на функциональную активность тромбоцитов проводили in vitro по методу Born на агрегометре “Thromlite-1006A” на донорской крови человека [8]. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов. В качестве индуктора агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл и коллаген в концентрации 5 мг/мл, производства “Технология-Стандарт”, г. Барнаул (рис. 1). Определение активности исследуемых производных проводили в концентрации 2×10-3 М/л. При анализе агрегатограмм обращали внимание на спонтанную агрегацию тромбоцитов, вызванную введением исследуемого вещества в плазму, рассчитывали степень подавления или усиления агрегации под действием производных ксантина, оценивали дезагрегационный эффект соединений [1].

Исследование антикоагуляционной активности проводили in vitro стандартными коагуляционными методами на турбометрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 на донорской крови человека. Проводилось определение активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A. Clauss [5]. Определение антикоагуляционной активности исследуемых производных проводили в конечной концентрации 10-3 г/мл.

Объекты исследования – лекарственные препараты: пентоксифиллин, кофеин бензоат натрия, эуфиллин, а также производные ксантина, впервые синтезированные на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета [7].

Препараты сравнения: в качестве антикоагулянта использовали «Гепарин натрия» (производства ОАО «Синтез», Россия), в качестве антиагрегантов – пентоксифиллин, кофеин-бензоат натрия, эуфиллин (ОАО «Дальхимфарм», Россия), ацетилсалициловая кислота (2-ацетилоксибензойная кислота, Фармацевтическая фабрика Шандонг Ксинхуа Фармасьютикал Ко., ЛТД, Китай). Определение влияния на функциональную активность тромбоцитов и плазменный компонент гемостаза проводили на 6 пробах крови разных доноров для каждого соединения. Данные показателей статистически обрабатывали с применением t-критерия Стьюдента.

Обсуждение результатов. Результаты исследования влияния производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов представлены в таблице 1.

По результатам проведенного исследования установлено, что среди препаратов сравнения наибольшую активность проявил пентоксифиллин. При предварительной инкубации пентоксифиллина в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 минут происходило снижение АДФ-индуцированной агрегации в среднем на 50 % относительно контроля. На коллаген-индуцированную агрегацию тромбоцитов влияния пентоксифиллина не регистрировалось. Выраженную антиагрегационную активность проявил кофеин-бензоат натрия. Агрегация тромбоцитов, индуцированная АДФ и коллагеном, снижалась соответственно на 16 % и 6 %.

Таблица 1. Влияние производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов, n=7

Примечание: Уровень статистической значимости различий в сравнении с эуфиллином (P1), кофеин-бензоат натрием (P2), аспирином (P3), пентоксифиллином (P4).

АБ

Рисунок 1: