В патогенезе хронического миелолейкоза (ХМЛ) определяющую роль играет патологическая Ph-хромосома и её молекулярный эквивалент - химерный ген BCR-ABL, обладающий тирозинкиназной активностью. Основными патологическими эффектами этого гена являются: нарушение межклеточных взаимодействий, усиленная пролиферация и подавление апоптоза [2]. Одним из центральных звеньев в регуляции клеточного цикла и процесса апоптоза является ген р53 и его продукт - белок р53 [4; 5; 9].
Прогноз больных хроническим миелолейкозом до применения гливека был всегда пессимистичным [2]. Анализ применения ингибитора тирозинкиназ I поколения - гливека продемонстрировал возможности современной таргетной терапии [6; 8]. Однако, несмотря на «целевой» характер терапии, у части больных ХМЛ не удается достичь плановых генетических и молекулярных ответов, заболевание прогрессирует до стадий акселерации и бластного криза [3; 7]. Это обстоятельство указывает на особый интерес и значимость поиска дополнительных прогностических критериев исхода ХМЛ.
Цель исследования: изучить взаимосвязь развития цитогенетических и молекулярных ответов у больных хроническим миелолейкозом и концентрации в сыворотке крови маркера индукции апоптоза белка р53.
Материалы и методы: исследование проводилось на основе собственных наблюдений и данных медицинской документации. Были изучены 72 амбулаторные карты больных ХМЛ. Длительность лечения гливеком составила от 18 до 36 месяцев. Продолжительность заболевания до начала терапии гливеком была от 0 до 87 месяцев. Наблюдение за больными ХМЛ было проведено в гематологическом отделении консультативной поликлиники Государственного учреждения здравоохранения «Александро-Мариинская областная клиническая больница» г. Астрахани и в поликлинике Государственного учреждения здравоохранения «Волгоградский областной клинический онкологический диспансер № 1» в период с 2007 по 2010 г.
На каждого больного заполнялась индивидуальная карта обследования, включающая паспортную часть, развернутый клинический диагноз, результаты первичного осмотра, данные анамнеза, статус на момент диагностики и начала лечения гливеком, а также в динамике, данные лабораторных исследований на момент диагностики заболевания и в динамике. Все больные имели клинико-морфологическое и цитогенетическое подтверждение диагноза хронического миелолейкоза. Характер ответа на лечение определялся согласно критериям Европейского общества по изучению хронического миелолейкоза European Leukemia Net (ELN-2009) [10].
В группу наблюдения включены 60 больных ХМЛ (23 мужчины и 37 женщин). Средний возраст составил 52,57 ± 1,59 лет. Критерии включения больных в исследование: хроническая фаза хронического миелолейкоза (определялась согласно критериям ELN 2009) [10]; терапия ингибитором тирозинкиназ первого поколения - иматинибом мезилатом (гливек). Критерии исключения: больные ХМЛ, имеющие сопутствующую патологию, при которой возможно изменение концентрации белка р53 (сахарный диабет, ишемическая болезнь сердца, хронические заболевания желудочно-кишечного тракта, хронические заболеваниями органов дыхательной системы, перенесенный инсульт, трансплантация костного мозга).
В контрольную группу были отобраны здоровые доноры - 25 человек (10 мужчин и 15 женщин). Средний возраст доноров составил 49,20 ± 1,27 лет, сопоставимый с основной группой.
В процессе работы проводились молекулярно-генетические исследования крови методом ПЦР в реальном времени (количественная оценка экспрессии химерного гена BCR-ABL типа р210), исследования костного мозга: цитологические (миелограмма), цитогенетические - определение транслокации t(9;22)(q34;q11), молекулярно-цитогенетические - флуоресцентная in situ гибридизация хромосом (FISH) с ДНК зондом к слитному гену BCR- ABL.
Иммуноферментное исследование сыворотки крови проводилось с использованием наборов для количественного определения белка р53. Были использованы тест-системы фирмы Bender MedSystems (Австрия).
При статистической обработке полученных нами данных была использована статистическая программа SPSS Statistics (Version 17.0). Анализ данных включал в себя среднее значение, ошибку средней арифметической. Для определения достоверности показателей использовали двусторонний критерий Student. Если t был больше соответствующих значений по таблице Стьюдента, различия между показателями сравниваемых величин считали достоверными. Проверка выборки на нормальность распределения проводилась по критериям Колмогорова-Смирнова с поправкой по Лилли-Фору.
Результаты исследования и их обсуждение: концентрация индуктора апоптоза - белка р53 в сыворотке крови в контрольной группе здоровых лиц составила 1,16 ± 0,18 Е/мл. Полученные нами показатели уровня концентрации р53 оказались сопоставимыми с приведенными данными сопроводительной аннотации к набору реагентов.
Нами определена концентрация р53 у больных ХМЛ, начиная с 18 месяцев терапии, затем в динамике каждые полгода - на 24, 30, 36 месяцев лечения гливеком.
Все больные ХМЛ были распределены по следующим критериям: наличие и отсутствие полного цитогенетического, молекулярного ответов - через 18-36 месяцев от начала терапии гливеком (таблица 1).
Таблица 1 - Средние значения концентрации р53 у больных ХМЛ с наличием и отсутствием полного цитогенетического ответа (M±m)
|
Средние значения концентрации р53 (Е/мл) |
||
Сроки терапии гливеком (мес.)
|
Контрольная группа |
Пациенты с полным цитогенетическим ответом
|
Пациенты с отсутствием полного цитогенетического ответа |
18 |
1,16 ± 0,18 (n = 25) |
1,19 ± 0,06 (n = 36) (p>0,05) |
1,81 ± 0,14 (n = 24) (p<0,005) (p1<0,005)
|
24
|
1,16 ± 0,18 (n = 25) |
1,44 ± 0,08 (n = 29) (p>0,05) |
1,72 ± 0,17 (n = 31) (p<0,05) (p1>0,05)
|
30
|
1,16 ± 0,18 (n = 25)
|
2,42 ± 0,20 (n = 36) (p<0,001)
|
1,54 ± 0,13 (n = 23) (p>0,05) (p1<0,001) |
36
|
1,16 ± 0,18 (n = 25) |
2,54 ± 0,18 (n = 37) (p<0,001) |
1,70 ± 0,13 (n = 20) (p<0,05) (p1<0,001) |
P - достоверность различия показателей по сравнению с контрольной группой.
Р1 - достоверность между группами по изучаемому показателю.
Из представленной таблицы следует, что у больных ХМЛ с ПЦО на 18 и 24 месяца от начала терапии гливеком концентрация р53 практически равна концентрации р53 контрольной группы. К 30 и 36 месяцам данный показатель повышен вдвое, при этом отмечается достоверность различий по отношению к контрольной группе.
У пациентов с отсутствием ПЦО с 18 до 36 месяцев лечения гливеком наблюдается умеренное повышение концентрации р53. Результаты на 18, 24, 36 месяцев достоверно различны по отношению к контрольной группе и к группе больных с наличием ПЦО.
У больных ХМЛ с наличием полного молекулярного, большого молекулярного ответов (ПМО/БМО) и отсутствием ПМО/БМО наблюдается аналогичное распределение средних значений концентрации р53 (таблица 2), как и у пациентов с наличием и отсутствием ПЦО.
Таблица 2 - Средние значения концентрации р53 у больных ХМЛ с наличием ПМО/БМО и отсутствием молекулярного ответа (M±m)
|
Средние значения концентрации р53 (Е/мл) |
||
Сроки терапии гливеком (мес.) |
Контрольная группа |
Пациенты с наличием ПМО/БМО |
Пациенты с отсутствием ПМО/БМО |
18
|
1,16 ± 0,18 (n = 25)
|
1,32 ± 0,09 (n = 21) (p>0,05)
|
1,51 ± 0,09 (n = 39) (p>0,05) (p1>0,05) |
24
|
1,16 ± 0,18 (n = 25)
|
1,29 ± 0,08 (n = 25) (p>0,05)
|
1,78 ± 0,15 (n = 35) (p<0,01) (p1<0,005) |
30
|
1,16 ± 0,18 (n = 25)
|
2,61 ± 0,24 (n = 30) (p<0,001)
|
1,58 ± 0,11 (n = 29) (p>0,05) (p1<0,001) |
36
|
1,16 ± 0,18 (n = 25)
|
2,81 ± 0,21 (n = 30) (p<0,001)
|
1,55 ± 0,10 (n = 27) (p>0,05) (p1<0,001) |
P - достоверность различия показателей по сравнению с контрольной группой.
Р1 - достоверность между группами по изучаемому показателю.
Повышение концентрации р53 в сыворотке крови у больных ХМЛ с отсутствием ПЦО и МО на всех сроках терапии гливеком направлено на поддержку программы апоптоза через индуктор апоптоза р53 для удаления патологического клона.
Среднестатистические показатели концентрации р53 у пациентов, достигших ПЦО, ПМО/БМО на 18 и 24 месяца терапии гливеком близки к цифрам контрольной группы и подтверждают элиминацию патологических клеток. Однако через 30 и 36 месяцев терапии значения р53 повышены. Увеличение концентрации р53 связано с тем, что количество пациентов на 30 и 36 месяцев терапии гливеком с ПЦО 36 и 37 соответственно, но при этом больных с ПМО/БМО к данному сроку 30, т.е. 6 и 7 больных через 30 и соответственно 36 месяцев терапии гливеком не имеют ПМО/БМО. С другой стороны, данный факт может расцениваться как присутствие в организме больного ХМЛ минимального количества Ph-позитивных клеток, не определяемых при цитогенетических и молекулярных исследованиях.
Заключение: определение концентрации р53 в сыворотке крови больных ХМЛ может быть использовано в качестве дополнительного метода прогнозирования исхода ХМЛ. Определение концентрации р53 необходимо проводить в динамике каждые 6 месяцев терапии гливеком.
Рецензенты:
- Ларина Н.Н., д.м.н., заместитель главного врача по медицинской части ГУЗ «Александро-Мариинская областная клиническая больница», г. Астрахань.
- Эсаулова Т.А., д.м.н., профессор, заведующая терапевтической службой НУЗ «Медико-санитарная часть», г. Астрахань.
Библиографическая ссылка
Лунёв Д.А., Овсянникова Е.Г., Заклякова Л.В., Левитан Б.Н. ДОСТИЖЕНИЕ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКОГО И МОЛЕКУЛЯРНОГО ОТВЕТОВ У БОЛЬНЫХ ХМЛ: ПРОГНОЗИРОВАНИЕ С ПОМОЩЬЮ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ БЕЛКА Р53 // Современные проблемы науки и образования. 2011. № 6. ;URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=5199 (дата обращения: 11.05.2025).