Псориаз является хроническим гиперпролиферативным воспалительным заболеванием кожи. Поэтому существует повышенный риск возникновения злокачественных новообразований кожи у больных псориазом при длительном использовании иммуносупрессивной терапии [1, 2]. Псориаз и любые опухоли имеют общие проявления, такие как чрезмерная пролиферация клеток, неоангиогенез и наличие местной гипоксии [3, 4].
Несмотря на эпоху новых биологических агентов, у больных со среднетяжелым и тяжелым течением псориаза фототерапия и системная терапия метотрексатом являются не только наиболее доступными и эффективными методами лечения [2, 5], но и терапевтическими средствами первой линии в лечении пациентов с данным дерматозом [6].
Отдаленным побочным эффектом фототерапии является риск канцерогенеза, причиной которого служит воздействие ультрафиолетового облучения на генетический аппарат клетки. В результате могут нарушаться синтез нуклеиновых кислот и возникать мутации клеточной ДНК [2, 5].
Длительное применение системной терапии метотрексатом характеризуется кумулятивным токсическим воздействием на организм и сопряжено с подавлением иммунитета. Системная иммуносупрессия может способствовать росту кожного рака, индуцированного ультрафиолетовым облучением или другими канцерогенными агентами [2].
Эффективность и безопасность являются важными аспектами при выборе метода лечения у больных псориазом.
Для оценки эффективности и безопасности проводимой терапии мы выбрали универсальный маркер клеточной пролиферации Ki-67 и маркер повреждения ДНК P53 [7, 8].
Предыдущие исследования показали, что в опухолевых тканях при псориазе, а также при заживлении ран отмечается повышенная экспрессия GLUT-1 [4, 9, 10].
Повышенная экспрессия белка – транспортера GLUT-1 при онкологических процессах является прогностически неблагоприятным признаком, связана с прогрессированием опухоли, характеризуется наличием метастазов в лимфатических узлах, рецидивами, резистентностью к проводимой терапии и низкой выживаемостью больных [11, 12].
Повышение активности GLUT-1 облегчает метаболизм глюкозы, что необходимо для гиперпролиферирующих клеток, поддерживает воспаление и способствует ангиогенезу [13]. Оценка уровня синтеза в клетках этого белка может являться одним из критериев эффективности проводимой терапии. Все это послужило поводом для настоящего исследования.
Цель исследования: совершенствование методики оценки эффективности и безопасности фототерапии и системной терапии метотрексатом у больных псориазом на основе маркеров клеточного обновления и маркера белка – переносчика глюкозы в клетку GLUT-1.
Материал и методы исследования. Для достижения поставленной цели нами были изучены особенности клеточного обновления эпителия псориатической папулы, а также дана оценка эффективности и безопасности проводимой терапии (фототерапии и системной терапии метотрексатом) на основании клинико-морфологических сопоставлений.
Под наблюдением были 204 пациента, получавших фототерапию и системную терапию метотрексатом, со среднетяжелым и тяжелым течением псориаза, находящихся на стационарном лечении в БУЗ Омской области «ККВД».
Критерии включения: возраст старше 18 лет, добровольное информированное согласие на участие в исследовании, диагноз «Псориаз вульгарный, прогрессирующая стадия (L40.0)», индекс PASI более 10%. Протокол исследования был одобрен локальным научным этическим комитетом ОмГМУ.
Фотохимиотерапия проводилась с использованием ультрафиолетовой кабины Waldmann UV 7002K и ламп F79/120W-PUVA, генерирующих излучение в диапазоне волн 320–410 нм с максимальной эмиссией на длине 365 нм. За два часа до сеанса пациенты принимали аммифурин 1 мг/кг (производитель «Фармцентр ВИЛАР», регистрационное удостоверение ЛС-002598). Сеансы фототерапии проводили 4 раза в неделю. Начальная доза ультрафиолетового излучения составляла 0,5–1,0 Дж/см2 с последующим повышением дозы на 0,5–1,0 Дж/см2. На курс 15–20 процедур с достижением курсовой дозы облучения 76–84 Дж/см2.
Узкополосная терапия 311 нм проводилась 4 раза в неделю с использованием фотокабины Waldmann UV 7002K и ламп F79/120W-TL01, генерирующих излучение в диапазоне волн 310–315 нм с максимальной эмиссией на длине волны 311 нм. Начальная доза ультрафиолетового излучения составляла 0,05–0,1 Дж/см2 с последующим повышением дозы на 0,05–0,1 Дж/см2. На курс 15–20 процедур с достижением курсовой дозы облучения 7,2–8,45 Дж/см2.
Начальные дозы облучения устанавливали с учетом фототипа кожи, который определяли до начала проведения фототерапии (Владимиров В.В., 2009).
Метотрексат пациенты получали в дозе 7,5–25 мг в неделю. За период стационарного лечения суммарная доза метотрексата составила 22,5–75 мг. В соответствии с протоколом исследования все участники, получавшие метотрексат, через 24 часа принимали внутрь 5 мг фолиевой кислоты однократно.
Для проведения иммуногистохимического исследования произведен забор биоптатов кожи с пораженных участков у 45 пациентов до начала лечения и на 21-й день терапии, в каждой группе у 15.
Группу сравнения составили 18 добровольцев, не имеющих клинических признаков заболеваний кожи, обратившихся в клинику по поводу косметологической коррекции. После получения их письменного согласия от этих лиц были получены биоптаты кожи.
Клиническая эффективность проводимой терапии оценивалась на основании определения динамики дерматологического индекса охвата и тяжести псориаза PASI (Psoriasis Area and Severity Index). Изменение величины индекса PASI в процессе лечения (Δ PASI) рассчитывали в процентах, при этом выраженный терапевтический эффект констатировался при Δ PASI ≥ 75%, а при значениях Δ PASI < 75% терапевтический эффект расценивали как незначительный или частичный [5, 6].
Иммуногистохимическое исследование выполняли на парафиновых срезах с использованием предметных стекол с поли-L-лизиновым адгезивным покрытием (Thermo Scientific, США). Демаскировку антигенов проводили в цитратном буфере (рН=6,0) при кипячении на водяной бане в течение 1 часа. В качестве первичных антител (табл. 1) использовали готовые к применению не требующие разведения (RTU – ready to use) кроличьи моноклональные антитела (Spring Bioscience, США). Для визуализации результатов иммуногистохимической реакции применяли набор детекции REVEAL-Biotin-Free Polyvalent DAB (Spring Bioscience, США). В качестве хромогена использовался 3,3-диаминобензидина тетрахлорид, входящий в коммерческий набор детекции. Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера в течение 30 секунд – 2 минут.
Просмотр и фотографирование микропрепаратов осуществляли на микроскопе Axioskop 40 c использованием камеры AxioCam 503c и программного комплекса ZEN.
Таблица 1
Панель антител, использованных в работе
|
Антитела |
Клон |
Природа, биологическая роль, функции белка, интерпретация |
|
|
Ki-67 |
SP-6 |
Ядерный негистоновый белок, маркер пролиферации |
RTU |
|
P53 |
SPM 514 |
Продукт антионкогена p53, ядерный фактор транскрипции, маркер повреждения ДНК |
RTU |
|
GLUT-1 |
SP168 |
Белок – переносчик глюкозы в клетку, маркер метаболической активности клетки |
RTU |
При 400-кратном увеличении микроскопа определяли индекс пролиферации Ki-67 и индекс повреждения ДНК P53 как долю (в %) положительно окрашенных ядер эпидермоцитов в 10 случайно выбранных полях зрения (≥1000 клеток).
Любое количество клеток с мембранной или цитоплазматической картиной окраски клеточных структур антителами к GLUT-1 оценивалось как положительная экспрессия.
Для оценки экспрессии белка – переносчика глюкозы согласно рекомендациям учитывались локализация, интенсивность окрашивания, распространенность и вариант окраски клеточных структур [4, 9, 10]. Каждому показателю присваивался балл от 0 до 3. Для подсчета индекса экспрессии GLUT-1 полученные баллы суммировались. При этом максимальное значение индекса экспрессии составило 12 баллов, а минимальное – 0.
Статистическая обработка данных проводилась на основании современных методических подходов [14, 15, 16] с использованием пакета Statistica 6.1, Microsoft Office Excel 2007. Проверку нормальности распределения количественных параметров осуществляли с помощью критериев Колмогорова–Смирнова, Лиллиефорса и Шапиро–Уилка. Описательная статистика количественных признаков проводилась методом персентилей с использованием показателей медианы (Р50), минимума (Р0) и максимума (Р100) и среднеквадратических отклонений (в формате M±SD). Для оценки связей применялся метод ранговой корреляции Кендалла с расчетом коэффициента корреляции t и уровня статистической значимости р. Для сравнения количественных показателей двух независимых групп использован U-критерий Манна–Уитни, двух зависимых групп – Т-критерий Вилкоксона, трех независимых групп – Н-критерий Краскела–Уоллиса. В исследовании результаты считались статистически значимыми при р<0,05, значения уровня значимости приведены в виде р=0,000…
Результаты исследования и их обсуждение. Для оценки клинической эффективности проводимой терапии в открытом контролируемом проспективном когортном исследовании больные псориазом были разделены на три группы: первая (n=87) – больные в возрасте от 18 до 63 лет, получавшие фотохимиотерапию; из них 68 мужчин и 19 женщин с индексом PASI от 10,8 до 46,8% и давностью заболевания от 1 года до 42 лет; вторая (n=58) – больные в возрасте от 18 до 65 лет, получавшие узкополосную фототерапию 311 нм; из них 44 мужчины и 14 женщин с индексом PASI от 10,2 до 32% и давностью заболевания от 1 года до 47 лет; третья (n=59) – больные в возрасте от 18 до 65 лет, получавшие системную терапию метотрексатом; из них 14 женщин и 45 мужчин с индексом PASI от 10 до 44,4% и давностью заболевания от 1 года до 52 лет.
По фототипам кожи больные распределились следующим образом: в первой группе II фототип имели 51 (59%) больных, III фототип имели 36 (41%) больных; во второй группе II фототип имели 45 (78%) больных, III фототип имели 13 (22%) больных и в третьей группе II фототип имели 36 (61%) больных, III фототип имели 23 (39%) больных.
Все пациенты получали комплексное лечение, включающее: антигистаминные препараты, седативные, десенсибилизирующие средства, витамины и наружную терапию.
Установлено статистически значимое различие диагностического индекса PASI (%) до и после лечения: после курса фотохимиотерапии в среднем по медиане 20,5 и 2,4% (Т = 0,00, p=0,000); после проведенной узкополосной 311 нм фототерапии в среднем по медиане 11,9 и 1,2% (Т = 0,00, p=0,000); после системной терапии метотрексатом в среднем по медиане 15,8 и 3,0% (Т = 0,00, p=0,000).
Эффективность проводимой терапии во всех группах была высокой: после курса фотохимиотерапии у больных первой группы ΔPASI (М±SD) составило 88,5±13,6%, после проведенной узкополосной фототерапии 311 нм терапии у больных второй группы – 92,1±10,3%, после системной терапии метотрексатом – 81±9,6%. Выраженный клинический эффект ΔPASI ≥ 75 отмечался у 77 (88,5%) из 87 больных первой группы, у 54 (93%) из 58 больных второй группы и у 39 (66%) из 59 больных третьей группы. Недостаточный эффект от терапии ΔPASI < 75 наблюдался в первой группе у 11,5%, во второй – у 7% и в третьей – у 34% больных.
В начале нашего исследования были определены показатели уровня экспрессии Ki-67, P53 и GLUT-1 в биоптатах кожи больных контрольной группы (табл. 2).
Таблица 2
Показатели экспрессии Ki-67, P53 и GLUT-1 в группе контроля (n=18)
|
Показатели |
Min |
Р25 |
Р50 |
Р75 |
Max |
SD |
|
Ki-67 (%) |
3,3 |
3,6 |
5,3 |
6,3 |
8,5 |
1,61 |
|
P53 (%) |
0 |
0 |
0 |
0,2 |
0,2 |
0,10 |
|
GLUT-1 (балл) |
0 |
5 |
6 |
6 |
6 |
1,92 |
Как видно из таблицы 2, минимальные значения индекса пролиферации в коже здоровых людей составляют 3,3%, максимальные – 8,5%, в среднем по медиане – 5,3%. Обнаружение экспрессии Ki-67 в биоптатах контрольной группы свидетельствует об активности процессов обновления кератиноцитов в нормальной коже. По данным литературных источников уровень экспрессии маркера пролиферации Ki-67 варьирует от 0 до 10% [7, 8]. Следовательно, наши результаты совпадают с данными литературы. Ki-67 позитивные клетки наблюдалась преимущественно в базальном слое эпидермиса.
Изучение экспрессии маркера повреждения ДНК P53 в эпидермисе в процессе иммуногистохимического исследования выявило его низкий уровень, вариабельность показателей составляет от 0 до 0,2%, в среднем по медиане – 0%. Присутствие в коже здоровых пациентов белка Р53 свидетельствует о его защитной роли для сохранения гомеостаза в ответ на пролиферацию клеток. Известно, что дикий тип P53 подавляет экспрессию GLUT-1, что приводит к снижению метаболизма глюкозы и тормозит пролиферацию клеток [12, 17]. Р53 позитивные клетки наблюдались в базальном и шиповатом слоях эпидермиса. В литературе есть данные, что экспрессия белка P53 в эпидермисе здоровой кожи может достигать 10% [7].
Особый интерес представлял маркер метаболической активности GLUT-1, так как в литературных источниках есть сведения о том, что в коже здоровых людей его экспрессия или слабо выражена, или не наблюдается совсем [4, 10]. Однако мы предположили, что GLUT-1 должен присутствовать в здоровом эпидермисе, так как кератиноциты входят в число клеток, которые поглощают большое количество глюкозы для поддержания гомеостаза кожи [18]. Наша гипотеза подтвердилась, мы обнаружили слабую экспрессию GLUT-1 в базальном и шиповатом слоях эпидермиса. В коже здоровых людей экспрессия GLUT-1 варьирует от 0 до 6 баллов, в среднем по медиане составляет 6 баллов.
На рисунке 1 представлена экспрессия Ki-67, P53 и GLUT-1 в коже здоровых людей и у больных псориазом до лечения и на 21-й день терапии.
|
|
Контрольная группа |
Прогрессирующая стадия псориаза (до лечения) |
На 21-й день терапии |
|
Ki-67 |
а |
б |
в |
|
Р53 |
г |
д |
е |
|
GLUT-1 |
ж |
з |
и |
|
Рис. 1. Экспрессия Ki-67, P53, GLUT-1 в эпидермисе больных псориазом и в контрольной группе (а – экспрессия Ki-67 в эпидермисе контрольной группы; б – экспрессия Ki-67 у больных псориазом до терапии; в – экспрессия Ki-67 на 21-й день терапии; г – экспрессия P53 в эпидермисе контрольной группы; д – экспрессия P53 у больных псориазом до терапии; е – экспрессия P53 на 21-й день терапии; ж – экспрессия GLUT-1 в эпидермисе контрольной группы; з – экспрессия GLUT-1 у больных псориазом до терапии; и – экспрессия GLUT-1 на 21-й день терапии) |
|||
На следующем этапе нашего исследования мы изучили влияние фототерапии и системной терапии метотрексатом на динамику показателей экспрессии Ki-67, P53 и GLUT-1 в биоптатах кожи больных псориазом. Результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
Сравнительная оценка экспрессии Ki-67, P53 и GLUT-1 в коже больных псориазом в ходе проводимой терапии
|
Показатели |
Фотохимиотерапия |
Узкополосная 311 нм фототерапия |
Метотрексат |
||||||
|
До |
После |
Т, р |
До |
После |
Т, р |
До |
После |
Т, р |
|
|
Ki-67(%) Min-Max |
10,3–53,8 |
0,0–11,9 |
Т=0,0 р=0,000
|
15–51,8 |
9,4–28,8 |
Т=4,0 р=0,001
|
14,5–58,2 |
5,7–38,9 |
Т=0,00 р=0,000
|
|
Ki-67(%) Медиана |
26,0 |
4,8 |
34,5 |
18,3 |
41,9 |
13,6 |
|||
|
Р53(%) Min-Max |
0,2–1,6 |
0,0–87,5 |
Т=3,0 р=0,001
|
0,3–2,4 |
1,5–8,3 |
Т=0,00 р=0,000
|
0,8–4,5 |
1,1–8,2 |
Т=5,0 р=0,001
|
|
Р53(%) Медиана |
0,9 |
52,5 |
1,2 |
3,7 |
1,4 |
4,0 |
|||
|
GLUT-1 (балл) Min-Max |
10–11 |
4–10 |
Т=0,00 р=0,000 |
9–11 |
6–10 |
Т=0,00 р=0,000 |
9–11 |
8–10 |
Т=0,00 р=0,002 |
|
GLUT-1 (балл) Медиана |
11 |
8 |
10 |
8 |
10 |
9 |
|||
Примечание: Т-критерий Вилкоксона, р – уровень статистической значимости
Мы обнаружили повышенную экспрессию маркера пролиферации Ki-67 в базальном и супрабазальных слоях эпидермиса у больных псориазом в прогрессирующую стадию заболевания до лечения и на 21-й день терапии.
При иммуногистохимическом исследовании биоптатов пораженной кожи с использованием U-критерия Манна–Уитни было установлено статистически значимое повышение исходных показателей индекса пролиферации Ki-67 в среднем по медиане у всех больных псориазом в сравнении с контрольной группой: в первой группе – 26,0 и 5,3% соответственно (U=0,00; p=0,000), во второй – 34,5 и 5,3% соответственно (U=0,00; p=0,000), в третьей – 41,9% и 5,3% соответственно (U=0,00; p=0,000). Высокий уровень экспрессии Ki-67 указывает на повышенную пролиферативную активность кератиноцитов, характерную для прогрессирующей стадии псориаза. Полученные данные согласуются с результатами предыдущих исследований [1, 7, 8].
Как видно из таблицы 3, при сравнении количественных показателей двух зависимых групп с использованием Т-критерия Вилкоксона установлено достоверное снижение показателей индекса пролиферации Ki-67 в среднем по медиане в сравнении с исходными значениями: в первой группе 26,0% и 4,8% (Т=0,0; р=0,000), во второй 34,5% и 18,3% (Т=4,0; р=0,001), в третьей 41,9% и 13,6% (Т=0,00; р=0,000). Понижение индекса экспрессии Ki-67 указывает на снижение роста эпидермоцитов. Полученные результаты свидетельствуют об эффективности проводимой фототерапии и системной терапии метотрексатом и согласуются с данными других авторов [1, 7, 8].
С использованием Н-критерия Краскела–Уоллиса максимальные значения индекса пролиферации (58,2%) до лечения выявлены в группе больных, получавших системную терапию метотрексатом, а минимальные (10,3%) – в группе больных, получавших фотохимиотерапию (Н=5,46; р=0,065). Наименьшая вариабельность показателей индекса пролиферации Ki-67 отмечена в группе больных, получавших узкополосную фототерапию 311 нм (от 15,0 до 51,8%), наибольшая – в группах, получавших фотохимиотерапию (от 10,3 до 53,8%) и системную терапию метотрексатом (14,5–58,2%). В среднем по медиане экспрессия Ki-67 после лечения составляет в первой группе 4,8%, во второй 18,3% и в третьей 13,6% (Н=22,34; р=0,000). Максимальные значения отмечены в группе больных, получавших системную терапию метотрексатом (38,9%), минимальные – в группе больных, получавших фотохимиотерапию (0,00%). Наименьший размах показателей установлен в группе больных псориазом, получавших фотохимиотерапию (от 0,00 до 11,9%), наибольший – в группе больных, получавших системную терапию метотрексатом (от 5,7 до 38,9%). При этом значения индекса пролиферации Ki-67, приближающиеся к показателям контрольной группы, от 0 до 10% установлены в первой группе у 12 (80%) больных, во второй у 2 (13,3%) и в третьей у 3 больных (20%). Следовательно, к 21-му дню терапии наибольшим антипролиферативным эффектом обладает фотохимиотерапия.
Экспрессия маркера повреждения ДНК P53 обнаружена в базальном и супрабазальных слоях эпидермиса в исследуемых биоптатах кожи больных псориазом.
При сравнении исходных показателей маркера повреждения ДНК P53 в коже больных псориазом с контрольной группой в среднем по медиане получены статистически значимые различия: в первой группе 0,9% и 0% соответственно (U=0,00; p=0,000), во второй 1,2% и 0% соответственно (U=0,00; p=0,000), в третьей 1,4% и 0% соответственно (U=0,00; p=0,000). Полученные результаты согласуются с данными других авторов [1].
С использованием Т-критерия Вилкоксона установлено достоверное повышение показателей индекса повреждения ДНК P53 (табл. 3) в среднем по медиане в сравнении с исходными значениями: в первой группе 0,9% и 52,5% (Т=3,0; р=0,001), во второй 1,2% и 3,7% (Т=0,00; р=0,001), в третьей 1,4% и 4,0% (Т=5,0; р=0,001). Однако используемый в нашем исследовании клон SPM 514 обнаруживает накопление и дикого, и мутантного белка P53. Поэтому накопление белка P53 может быть обусловлено физиологической реакцией дикого белка P53 на гиперпролиферацию или свидетельствовать о накоплении мутантного P53, связанного с повреждением ДНК [7].
Максимальные значения индекса повреждения ДНК P53 (4,5%) до лечения выявлены с использованием Н-критерия Краскела–Уолиса в группе больных, получавших системную терапию метотрексатом, а минимальные (0,2%) – в группе больных, получавших фотохимиотерапию (Н=10,16; р=0,006). Наименьшая вариабельность показателей маркера повреждения ДНК Р53 отмечена в группе больных, получавших фотохимиотерапию (от 0,2 до 1,6%), наибольшая – в группе больных, получавших системную терапию метотрексатом (от 0,8 до 4,5%). В среднем по медиане индекс повреждения ДНК P53 после лечения составляет в первой группе 52,5%, во второй 3,7% и в третьей 4,0% (Н=8,64; р=0,013). Максимальные и минимальные значения зарегистрированы в группе больных, получавших фотохимиотерапию: 87,5 и 0,0%. Наименьший размах показателей установлен в группе больных псориазом, получавших узкополосную 311 нм фототерапию (от 1,5 до 8,3%), наибольший – в группе больных, получавших фотохимиотерапию (от 0,0 до 87,5%). Такой размах показателей в группе больных, получавших фотохимиотерапию, связан, видимо, с комбинированным эффектом терапии. Уменьшение процента P53 позитивных клеток в эпидермисе может объясняться снижением пролиферативной активности и свидетельствовать о полном регрессе псориатических высыпаний. Увеличение уровня экспрессии маркера повреждения ДНК может являться индикатором эффективности фотохимиотерапии. Повышение уровня экспрессии белка Р53 связано с основным механизмом фотохимиотерапии, заключающимся во взаимодействии активированного фотосенсибилизатора с ДНК клеток, в результате чего формируются перекрестные сшивки между цепями ДНК, подавляется синтез нуклеиновых кислот и тормозится клеточная пролиферация [19]. Однако повышение экспрессии белка Р53 после фотохимиотерапии может быть обусловлено и повреждением клеточной ДНК. При этом значения индекса повреждения ДНК Р53 после терапии, приближающиеся к показателям контрольной группы, от 0 до 0,2% установлены в первой группе у 2 (13,3%) больных, во второй и в третьей группах не зарегистрированы. Таким образом, накопление Р53 на фоне проводимой терапии является защитной функцией белка для поддержания гомеостаза кожи путем влияния на процесс гликолиза и регуляции роста клеток, а при фотохимиотерапии связано с основным механизмом и может служить одним из критериев эффективности проводимой терапии. Эти данные свидетельствуют о безопасности фототерапии и системной терапии метотрексатом при соблюдении медицинской технологии.
Мембранная и цитоплазматическая экспрессия белка – транспортера глюкозы в клетку GLUT-1 обнаружена у больных псориазом преимущественно в базальном и шиповатом слоях эпидермиса.
Непараметрическим методом с использованием U-критерия Манна–Уитни выявлено статистически значимое повышение исходных значений маркера метаболической активности GLUT-1 в среднем по медиане у всех больных псориазом в сравнении с контрольной группой: в первой группе 11 и 6 баллов (U=00,0; p=0,000), во второй 10 и 6 баллов (U=0,00; p=0,000), в третьей 10 и 6 баллов (U=0,00; p=0,000). Повышение уровня экспрессии GLUT-1 указывает на высокую интенсивность метаболизма глюкозы, что способствует пролиферации кератиноцитов. Это свойственно быстро пролиферирующим клеткам, так как глюкоза для них является основным источником энергии [13, 18]. Таким образом, прогрессирующая стадия псориаза характеризуется повышением активности метаболизма глюкозы, а нормальному эпидермису свойственна низкая интенсивность процессов метаболизма глюкозы.
Установлено статистически значимое снижение показателей экспрессии белка – переносчика глюкозы GLUT-1 непараметрическим методом с использованием Т-критерия Вилкоксона (табл. 3) в среднем по медиане в сравнении с исходными значениями: в первой группе 11 и 8 баллов (Т=0,00; р=0,000), во второй 10 и 8 баллов (Т=0,00; р=0,000), в третьей 10 и 9 баллов (Т=0,00; р=0,002). Понижение экспрессии GLUT-1 обусловлено снижением интенсивности метаболизма глюкозы и пролиферативной активности клеток эпидермиса. Максимальный уровень экспрессии GLUT-1 (11 баллов) до начала терапии установлен во всех трех группах больных, а минимальный (9 баллов) – в группах больных, получавших узкополосную 311 нм фототерапию и системную терапию метотрексатом (Н=7,48; р=0,024). Наименьшая вариабельность уровня экспрессии маркера метаболической активности представлена в группе больных, получавших фотохимиотерапию (от 10 до 11 баллов), наибольшая – в группе больных, получавших узкополосную 311 нм фототерапию и системную терапию метотрексатом (от 9 до 11 баллов). В среднем по медиане индекс экспрессии GLUT-1 после терапии составляет в первой и второй группах 8 баллов, в третьей 9 баллов (Н=4,07; р=0,131). Максимальные значения зарегистрированы во всех трех группах (10 баллов), минимальные – в группе больных, получавших фотохимиотерапию (4 балла). Наименьший размах показателей установлен в группах больных, получавших системную терапию метотрексатом (от 8 до 10 баллов) и узкополосную фототерапию 311 нм (от 9 до 11 баллов), наибольший – в группе больных, получавших фотохимиотерапию (от 4 до 10 баллов). Значения индекса GLUT-1, соответствующие показателям интенсивности метаболизма глюкозы нормального эпидермиса от 0 до 6 баллов, установлены в первой группе у 3 (20%) больных, во второй у 1 (6,7%), а третьей не зарегистрированы. На основании полученных результатов можно сделать вывод, что снижение экспрессии GLUT-1 является благоприятным признаком и свидетельствует об эффективности проводимой терапии.
Установлена статистически значимая прямая связь показателей индекса экспрессии GLUT-1 с количеством клеток в эпидермисе и степенью акантоза методом корреляционного анализа Кендалла.
Рис. 2. Корреляционная связь показателей индекса экспрессии GLUT-1 с количеством клеток в эпидермисе (t = 0,6; р = 0,000)
Чем больше количество клеток в эпидермисе, тем больше индекс экспрессии GLUT-1 (связь положительная, средней силы, коэффициент Кендалла равен 0,6; р = 0,000). Следовательно, чем толще эпидермис, тем выше пролиферативная активность клеток, тем больше потребность в глюкозе, тем выше уровень экспрессии GLUT-1. Выявлена статистически значимая сильная положительная связь (t = 0,7; р = 0,000): с повышением степени акантоза увеличивается индекс метаболической активности. Таким образом, изучение уровня экспрессии GLUT-1, отражающего метаболическую активность пролиферирующего эпидермиса, может использоваться в качестве дополнительного критерия определения тяжести патологического процесса и эффективности проводимой терапии.
Выводы
1. Фототерапия и системная терапия метотрексатом являются безопасными методами лечения и обладают высокой терапевтической эффективностью.
2. Уровень экспрессии маркера GLUT-1 при псориазе отражает возрастающую энергетическую потребность кератиноцитов с наличием прямых корреляционных связей средней силы с количеством клеток в эпидермисе и сильную связь со степенью акантоза, его оценка может рассматриваться в качестве дополнительного критерия определения тяжести патологического процесса и эффективности проводимой терапии.
3. Использованная методика оценки эффективности проводимой терапии при псориазе с помощью маркеров клеточного обновления (Ki-67, Р53, GLUT-1) является удобной и может использоваться в практике.
Библиографическая ссылка
Новиков Ю.А., Охлопков В.А., Полещук Е.И., Мозговой С.И., Трошина Д.С., Зыкова Е.А. ВЛИЯНИЕ ФОТОТЕРАПИИ И СИСТЕМНОЙ ТЕРАПИИ МЕТОТРЕКСАТОМ НА ЭКСПРЕССИЮ KI-67, Р53 И GLUT-1 ПРИ ПСОРИАЗЕ // Современные проблемы науки и образования. – 2019. – № 6. ;URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=29288 (дата обращения: 19.09.2024).