Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ПОРТУЛАКА ОГОРОДНОГО НА БИЛИРУБИНОВЫЕ ФРАКЦИИ В КРОВИ КРОЛИКОВ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ

Шейхова Р.Г. 1 Нурмагомедова П.М. 1 Гасанова З.У. 1
1 ФГБОУ ВПО «Дагестанский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федераци
Исследовали влияние водного экстракта портулака огородного на билирубиновые фракции в сыворотке крови кроликов при экспериментальном токсическом гепатите. Для сравнения и анализа параллельно исследовались группы кроликов, которые получали общепринятую медикаментозную витаминотерапию, а также комбинацию с водным экстрактом портулака. Полученные результаты сравнивали как с контролем, так и с показателями 1-й группы кроликов с модулированным токсическим гепатитом, без последующей терапии. Эксперимент проводился в течение 10 дней. Отмечается повышение в крови концентрации общего билирубина, преимущественно за счет прямого. Наивысший уровень билирубиновых фракций отмечен на 4-й день в 1-й группе животных без применения терапии. Самый низкий уровень общего и прямого билирубина наблюдается на 10-й день в 4-й группе с комбинированной терапией. Содержание билирубиновых фракций во 2, 3 и 4-й группах кроликов достоверно не отличается.
экстракта портулака огородного
острый токсический гепатит
билирубиновые фракции.
1. Западнюк И.П., Западнюк В.И., Западнюк Б.В., Захария Е.А. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте / И.П. Западнюк, В.И. Западнюк, Б.В. Западнюк, Е.А. Захария. – Киев : Воща школа, 1983. – 383 с.
2. Лавренов В.К., Лавренова Р.В. Полная энциклопедия лекарственных растений. В 2-х т. – СПб. : Нева ; М. : Олма пресс, 1999. – Т. 2. – 885 с.
3. Лакин А.И. Биометрия. – М. : Высшая школа, 1990. - 293 с.
4. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. – М. : Медицина, 1994. – 270 с.
5. Лужников Е.В. и др. Особенности лечения токсического поражения печени при острых экзогенных отравлениях // Сов. медицина. - 1980. - № 3. – С. 20-26.
6. Махлаюк В.П. Лекарственные растения в народной медицине. – Саратов : Приволжское книжное издательство, 1993. – 544 с.
7. Пастушенков Л.В. и др. Лекарственные растения. (Использование в народной медицине и в быту). – Лениздат : Социально-коммерческая фирма «Человек», 1990. – 170 с.
8. Проскурякова И.С. Морфофункциональные аспекты регенерации печени при экспериментальной коррекции токсического гепатита // Бюл. экспер. биологии и медицины. – 1995. - № 6. – С. 656-659.
9. Сальникова С.И., Дроговоз С.М. Гепатозащитная активность аналогов коричной кислоты // Фармакология и токсикология. – 1989. – Т. 52, № 3. – С. 77-80.
10. Самбуева З.Г., Лоншакова К.С Влияние растительных экстрактов на течение экспериментального гепатита // Фармация. - 1987. – Т. 36, № 2. – С. 40-45.
11. Саратиков А.С., Венгеровский А.И. // Бюл. экспер. биол. и медицины. – 1999. – Т. 127, № 4. – С. 392-394.
12. Скакун Н.П., Ковальчук С.Ф. Эффективность антиоксидантов при комбинированном поражении печени СС14 и этанолом // Фармакология и токсикология. – 1987. - № 3. – С. 97-99.
13. Chan K., Islam M.W., Kamil M. The analgenic and anti-inflammatory effect of portuleca oleracea L subsp. Sativa (haw) Celak // J Ethanopharmacol. – 2000. – 73. – P. 445-451.
14. Prashant K.L., Jadav H., Thakurdesai P., Nagappa A.N. The cosmetic potential of herbal extracts // Nat prod Radiat. - 2005. – 4. – P. 351.

Поражение печени при острых экзогенных интоксикациях является распространенной патологией, которая, по клиническим данным, встречается более чем у 30% больных [5].

Из-за ухудшения экологической обстановки различные промышленные и сельскохозяйственные яды попадают в организм человека как через воздух, так и вместе с пищей, тем самым вызывая интоксикацию организма. Токсическое поражение печени вызывают как различные химические вещества, в том числе и лекарственные, при их случайном попадании или введении в организм, так и промышленные яды при нарушении техники безопасности.

Четыреххлористый углерод широко используется в промышленности как растворитель масел, жиров, каучука и т.д., для экстрагирования жиров и алкалоидов, для очистки и обезжиривания одежды в быту и в производственных условиях. Метаболические превращения CCI4 являются основой его гепатотоксического действия [4]. Поэтому для исследования в качестве гепатотропного яда нами был выбран CCI4.

При токсическом и инфекционном поражении печени наблюдается изменение пигментного, углеводного, белкового обмена и т.д.

Недостаточная эффективность современных лекарственных средств, рекомендованных для лечения поражений печени, определяет необходимость поиска новых препаратов, в том числе среди природных соединений [6].

За последние 20 лет выявлены гепатопротекторные свойства препаратов многих лекарственных растений, таких как арника горная, арника облиственная, ромашка аптечная и т.д. [8; 11]. Встречаются литературные данные о том, что экстракт портулака огородного (Portulaca Oleracea) используется в тибетской медицине для лечения гепатита [2]. Широкий спектр действия веществ, входящих в состав портулака огородного (флавоноиды, коричные кислоты, слизистые и смолистые вещества, органические кислоты, витамины С, РР, Е и т.д.), способствовал нашему выбору этого растения в качестве модели протекторного вещества при токсическом поражении печени.

Цель и задачи исследования

Целью нашего эксперимента явилось исследование влияния водного экстракта портулака огородного (Portulaca olepacca) на содержание билирубиновых фракций при экспериментальном токсическом гепатите, с последующим сравнительным анализом результатов, полученных после стандартного метода лечения.

Научная новизна

Сравнительный анализ содержания билирубиновых фракций в сыворотке крови кроликов при использовании водного экстракта портулака огородного и стандартного метода лечения при остром токсическом гепатите проведен впервые.

В качестве объекта исследования были взяты кролики породы шиншилла, которые широко используются в длительных экспериментах из-за удобства многократного взятия крови.

В эксперименте были использованы половозрелые самцы в возрасте 5-6 месяцев и массой 2,5-3 кг. У них вызывали токсический гепатит однократным подкожным введением четыреххлористого углерода в дозе 0,2 мл на 1 кг массы тела. В указанной дозе четыреххлористый углерод вызывает токсический гепатит у кроликов [1].

Постановка эксперимента

Животные были разбиты на 4 группы:

1-я группа – интактные животные (контроль), которых после интоксикации СС14 не лечили;

2-я группа – животные, которые через 3 часа после введения ССI4 получали водный экстракт портулака огородного (ЭПО) 3 раза в день перорально через зонд, в дозе 2 мл на 1 кг массы тела;

3-я группа – животные, которые через 3 часа после введения ССI4 проходили курс лечения витаминами (В1, В2, В6, В12, РР, Е, С) ежедневно в одно и то же время;

4-я группа – животные, которые через 3 часа после введения ССI4 проходили курс витаминотерапии в комплексе с водным экстрактом портулака огородного.

Кровь брали ежедневно из краевой вены уха кролика по методу, описанному у Западнюка [1], для определения в ней содержания билирубиновых фракций. Сыворотку получали без использования противосвертывающих средств.

Для этого кровь держали в холодильнике в течение 20 мин и центрифугировали в течение 15 минут при 3000 об/мин. Сыворотку хранили в холодильнике.

Ежедневно животным внутримышечно вводили витамины в терапевтических дозах по методике Западнюка И.О. [1]. Дозы: В1 – 0,1 мл 5% раствора на 1 кг массы (5 мг/кг); В2 – 0,2 мл 1% р-ра на 1 кг массы (2 мг/кг); В6 – 0,1 мл 5% р-ра на 1 кг массы (5 мг/кг); В12 – 0,1 мл (2 мг/кг); РР – 0,2 мл 1% р-ра на 1 кг массы (3 мг/кг); С – 0,2 мл 5% р-ра на 1 кг массы (10 мг/кг).

По схеме витамины В1, В12 и С – назначают с утра в 9 ч, а витамины В2, В6, РР – назначают после 15 ч.

Биохимические методы исследования

Определение содержания билирубина тест-методом «Лахема».

Принцип метода

Билирубин вступает в реакцию азосочетания с диазтированной сульфаниловой кислотой с образованием раствора азокрасителя, который фотометрируют.

Определение общего (неконъюгированного и прямого) билирубина проводят в растворе акцелератора, определение прямого (конъюгированного) билирубина – без акцелератора.

Статистическую обработку проводили по t-критерию Стьюдента, методом малой выборки [3]. Резко отклоняющиеся наблюдения отбрасывали с использованием критерия Шовенэ. Различия считали достоверными при значениях Р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Токсическое поражение печени, вызванное однократным введением ССI4, приводит к изменению интенсивности желчеобразования и химического состава желчи, что сопровождалось глубоким нарушением пигментного обмена, о чем свидетельствовало повышение содержания билирубиновых фракций в сыворотке крови кроликов. Однако это повышение не однозначно для общего и прямого билирубина.

Из полученных данных видно, что содержание общего билирубина относительно контроля (интактных животных) уже через 3 часа после введения ССI4 во всех исследуемых группах достоверно повышается в среднем на 50%, а содержание прямого билирубина - более чем на 280%. Таким образом, отмечается повышение концентрации общего билирубина в крови, преимущественно за счет прямого [12].

Повышение уровня конъюгированного билирубина в крови указывает на нарушение выделения клеткой билирубина в желчные ходы и затруднение оттока желчи по внутрипеченочным протокам [9]. Через 24 часа после введения ССI4 содержание общего билирубина в 1-й контрольной группе без лечения, во 2-й группе с применением водного экстракта портулака огородного, в 3-й с витаминотерапией и в 4-й с комбинированным вариантом в среднем достоверно превышало норму в 1,8 раза, а содержание прямого билирубина в 3 раза (Р<0,001) (таблица; рис. 1 и 2).

На 2-й день эксперимента, независимо от терапии, во всех группах кроликов содержание общего и прямого билирубина достоверно повысилось относительно контроля примерно на 180 и 460% соответственно, а относительно предыдущего дня в среднем оба показателя выше на 50%. На 3-й день исследования во всех 4 группах кроликов содержание общего и прямого билирубина продолжает достоверно повышаться (Р<0,001) в среднем на 100 и 80% относительно 2-го дня и на 370 и 1000% относительно показателей интактных животных. Следует отметить, что на третьи сутки во 2, 3 и 4-й группах кроликов наблюдается наивысшее содержание концентрации билирубиновых фракций с момента введения ССI4. На 4-й день исследования в 1-й контрольной группе кроликов, без терапии, отмечается наиболее высокий уровень концентрации билирубиновых фракций, превышая норму соответственно в 6 и 12 раз. При статистическом анализе полученных данных на 4-й день исследования и сравнении результатов в группах между собой по концентрации общего и прямого билирубина видно, что достоверно отличаются только показатели 1-й группы от остальных (Р<0,05). Между 2, 3 и 4-й группами достоверных различий не наблюдается, значения общего и прямого билирубина по-прежнему стойко держатся на прежнем уровне. Переломный этап наступает после 5-го дня исследования. В дальнейшем от 5-го до 10-го дня наблюдается во всех четырёх группах постепенное снижение билирубиновых фракций (рис. 1 и 2). С 5-го по 10-й дни исследования показатели билирубиновых фракций крови кроликов во 2, 3 и 4-й группах достоверно (Р<0,05) ниже показателей 1-й группы без терапии.

Содержание общего и прямого билирубина в сыворотке крови (в мкмоль/л) кроликов при экспериментальном токсическом поражении печени (М ± m : n = 6)

Время

Контроль без лечения после введения ССI4

1группа

Экстракт портулака,

2-я группа

Витаминотерапия,

3-я группа

Комбинированное лечение, 4-я группа

Показатели

Общий бил.

Прямой бил.

Общий бил.

Прямой бил.

Общий бил.

Прямой бил.

Общий бил.

Прямой бил.

Через 3 часа

7,8 ±0,80

6,4 ±0,76

7,5 ±0,85

6,4 ±0,67

7,6 ±0,73

6,2 ±0,73

7,9 ±0,67

6,1 ±0,58

9,4+ 1,2

8,7 ±1,09

9,7 ±0,92

7,8 ±0,87

10,0±0,98

8,4 ±0,96

10,6 ±0,97

7,9 ±0,89

14,1 ±1,17

11,9+1,32

12,5 ±1,27

11,1 ±1,21

14,8 ±1,76

13,1 ±1,46

14,8 ±1,76

12,7±1,80

Зд

23,6±2,13

21,1±2,38

24,0 ±1,93

22,7±1,78

25,9±1,54

22,3 ±1,36

23,3 ±1,43

18,6 ±1,29

31,4 ±2,54

29,1 ±2,41

20,9 ±2,13

18,2 ±2,08

22,0±2,14

20,1 ±2,05

23,8±2,17

21,4±2,12

26,0 ±2,31

24,3 ± 2,33

16,9±2,18

14,1 ±2,13

21,4±2,19

17,6±2,17

24,3 ±2,21

17,2 + 2,10

25,3 ±2,1

23,1± 2,12

15,1±1,91

12,3±2,2

18,6±1,48

15,8±2.1

17,6±1,82

13,2±1,91

23,3 ±2,10

22,1 ±2,18

12,7 ±2,01

10,8+1,92

16,8 ±2,01

12,1 ±2,14

13,8 ±2,03

11,2 ±1,93

21,8 ± 1,93

20,0±2,12

7,5 ±1,87

6,1 ±1,87

13,1 ±1,69

8,3 ±1,96

8,9 ±1,93

6,8 ±1,87

20,4 ±1,87

18,3 ±2,27

5,6±1,34*

4,3 ±1,63

9,0± 1,34

6,8±1,89

5,4±1,84*

4,3+1,82

10д

17,1 ±1,74

15,2 ±2,82

5,2+ 1,91*

4,1 ±1,58

5,2 ±1,23*

4,1 ±1,78

5,1 ±1,73*

4,0+ 1,78

Контроль (интактные животные): общий билирубин - 5,1±0,98 прямой билирубин - 2,14±0

* - Р >0,05 - относительно контроля (интактных животных)

Рис. 1. Динамика содержания общего билирубина в сыворотке крови кроликов при токсическом поражении печени при различных вариантах исследования

Рис. 2. Динамика содержания прямого билирубина в сыворотке крови кроликов при токсическом поражении печени при различных вариантах исследования

Следует отметить, что содержание общего билирубина во 2-й группе с применением портулака и в 4-й группе с комбинацией экстракта портулка + витаминотерапия уже на 9-й день исследования снижается до нормальных значений интактных животных. На 10-е сутки нашего исследования в 1-й группе животных общий билирубин ещё превышает норму на 235%, а прямой на 600%.

А показатели 2, 3 и 4-й групп по содержанию общего и прямого билирубина находятся примерно на одинаковом уровне, достоверно не отличаясь между собой. Общий билирубин на 10-й день при всех вариантах исследования варьирует уже в пределах нормы, а прямой снизился от максимального его значения на 440% и выше нормальных значений ещё примерно на 90%.

Конечно, полученные значения прямого билирубина еще далеки от нормальных. Но уже наблюдаемое снижение билирубиновых фракций в 3 группах с терапией относительно 1-й контрольной группы без терапии указывает на эффективное воздействие водного экстракта портулака огородного и витаминов на концентрацию билирубиновых фракций при экспериментальном токсическом гепатите.

Из полученных данных видно, что водный экстракт портулака огородного, в отличие от инъекций витаминов, использованных в терапии токсического поражения печени, обладает более выраженным гепатопротекторным действием [9; 12-14].

На это указывает показатель общего билирубина, который на 9-й день исследования, в 3-й группе с витаминотерапией находится на достоверно высоком уровне относительно нормальных значений, в то время как вариант с экстрактом портулака самостоятельно во 2-й группе, так и в комплексе с витаминами способствует достоверному снижению общего билирубина до нормальных значений.

Комбинированное использование витаминов и портулака в дозе 2 мл на 1 кг массы тела не оказывает достоверного изменения в концентрации исследуемых фракций билирубина относительно витаминотерапии. По рис. 1 и 2 на 10-й день исследования видно, что каждый из вариантов терапии для восстановления уровня билирубиновых фракций можно использовать как самостоятельный метод.

В виду проявленной высокой активности, возможно, целесообразно кратное увеличение дозировки применяемого водного экстракта портулака огородного для дальнейшего исследования его действия на билирубиновые фракции крови при токсическом гепатите.

Выводы:

1. Однократное введение подкожно четыреххлористого углерода в дозе 0,2 мл на 1 кг массы тела вызывает токсический гепатит, вызывающий достоверное повышение билирубиновых фракций в сыворотке крови.

2. Как совместное использование витаминотерапии и водного экстракта портулака огородного, так и их монотерапия при экспериментальном токсическом поражении печени достоверно снижает уровень билирубиновых фракций в одинаковой степени.

3. В течение 10 исследуемых дней в сравниваемых 2, 3 и 4-й группах кроликов с применяемой терапией достоверной разницы в уровне концентрации билирубиновых фракций не обнаружено.

4. На 10-й день исследования наблюдается достоверная разница (Р<0,05) в концентрации билирубиновых фракций 1-й контрольной группы без терапии и 2, 3 и 4-й групп кроликов с применяемой терапией.

5. На 10-й день исследования во 2, 3 и 4-й группах кроликов, в отличие от 1-й контрольной группы без терапии, наблюдается достоверное (Р<0,05) снижение общего билирубина до уровня нормальных значений.


Библиографическая ссылка

Шейхова Р.Г., Нурмагомедова П.М., Гасанова З.У. ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТА ПОРТУЛАКА ОГОРОДНОГО НА БИЛИРУБИНОВЫЕ ФРАКЦИИ В КРОВИ КРОЛИКОВ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ // Современные проблемы науки и образования. – 2016. – № 6. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=25989 (дата обращения: 21.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074