Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Платунова И.М. 1 Никулина С.Ю. 1 Чернова А.А. 1 Прокопенко С.В. 1 Никулин Д.А. 2

---

1 ФГБОУ ВО «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации

2 ФГБУЗ Сибирский клинический центр ФМБА России

С целью изучения прогностической роли ОНП-маркера rs1378942 гена CSК в развитии ишемического инсульта проведено обследование 194 пациентов с ишемическим инсультом (118 мужчин и 76 женщин, средний возраст 55,06±9,40 лет) и 157 здоровых лиц (106 мужчин и 51 женщина, средний возраст 58,2±7,09 лет). Диагноз острого нарушения мозгового кровообращения устанавливался на основании совокупности данных, полученных в ходе сбора анамнеза, данных физикального осмотра, исследования соматического и неврологического статуса, биохимических показателей крови и клинико-инструментальной диагностики, согласно национальному стандарту Российской Федерации. Группа контроля была сформирована НИИ СО РАМН в ходе международного проекта HAPIEE. В результате исследования установлено статистически значимое преобладание гетерозиготного генотипа АС rs1378942 гена CSK в группе больных с инсультом по сравнению с группой контроля. Носительство гомозиготного распространенного генотипа АА и аллеля А полиморфизма rs 1378942 гена CSK имеет протективное значение в генезе развития ишемического инсульта.

Статья в формате PDF

191 KB

ген csk

ишемический инсульт

атеротромботический инсульт

генетическая предрасположенность

однонуклеотидный полиморфизм

мультифакторное заболевание.

1. Евзельман М.А. Генетика инсульта / М.А. Евзельман, А.С. Климушкин, Е.В. Жучкова // Учен. записки Орлов. гос. ун-та. Сер. Естеств., техн. и мед. науки. – 2009. – № 4. – С. 50–53.

2. Исследование этиопатогенеза ишемического инсульта у пациентов молодого возраста / Н.Н. Чапаева, А.Б. Терехова, С.В. Шишкин [и др.] // Медицина и образование в Сибири. – 2013. – № 4. – С. 58.

3. Комплексный анализ генетической предрасположенности к ишемическому инсульту у русских / М.Г. Парфенов, Б.В. Титов, М.А. Судомоина [и др.] // Молекуляр. биология. – 2009. – Т. 43, № 5. – С. 937–945.

4. Кузнецова Т. Ю. Генетические особенности ишемического инсульта в различных этнических группах, проживающих на территории Республики Мордовия / Т.Ю. Кузнецова // Фундам. исслед. – 2014. – № 7-5. – С. 980–982.

5. Кузнецова Т.Ю. Роль генетической предрасположенности в инсульте / Т.Ю. Кузнецова, А.А. Фирсов // Мед. альм. – 2013. – № 1(25). – С. 109–110.

6. Статус метилирования гена CDNK2A (P16 INK4A и P14 ARF) в тканях сонных артерий у больных атеросклерозом / М.С. Назаренко, А.В Марков, А.А. Слепцов [и др.] // Мед. генетика. – 2012. – № 2. – С. 34–37.

7. Страмбовская Н.Н. Прогностическая роль полиморфных вариантов генов-кандидатов у больных ишемическим инсультом в Забайкалье // Фундаментальные исследования – 2015. – № 1-1. – С. 140–144.

8. Association of common variants in/near six genes (ATP2B1, CSK, MTHFR, CYP17A1, STK39 and FGF5) with blood pressure/hypertension risk in Chinese children / B. Xi, Y. Shen, X. Zhao [et al.] // J. Hum. Hypertens. – 2014. – Vol. 28, № 1. – P. 32–36.

9. C-terminal Src kinase (Csk)-mediated phosphorylation of eukaryotic elongation factor 2 (eEF2) promotes proteolytic cleavage and nuclear translocation of eEF2 / Q. Yao, B. Q. Liu, H. Li [et al.] // J. Biol. Chem. – 2014. – Vol. 289, № 18. – P. 12666–12678.

10. Combining X-ray crystallography and molecular modeling toward the optimization of pyrazolo[3,4-d]pyrimidines as potent c-Src inhibitors active in vivo against neuroblastoma / C. Tintori, A. L. Fallacara, M. Radi [et al.] // J. Med. Chem. – 2015. – Vol. 58, № 1. – P. 347–361.

11. Lee H. Y. Aging and arterial stiffness / H. Y. Lee, B. H. Oh // Circ. J. – 2010 – Vol. 74, № 11. – P. 2257–2262.

12. CYP17 polymorphism (rs743572) is associated with increased risk of gallbladder cancer in tobacco users / R. Rai, K. L. Sharma, S Misra [et al.] // Tumour. Biol. – 2014. – Vol. 35, № 7. – P. 6531–6537.

13. Meng Y. Locking the active conformation of c-Src kinase through the phosphorylation of the activation loop / Y. Meng, B Roux // J. Mol. Biol. – 2014. – Vol. 426, № 2. – P. 423–435.

14. Naik M. U. Junctional adhesion molecule-A suppresses platelet integrin αIIbβ3 signaling by recruiting Csk to the integrin-c-Src complex / M. U. Naik, J. L. Caplan, U. P. Naik // Blood. – 2014. – Vol. 123, № 9. – P. 1393–1402.

15. Polymorphisms on chromosome 9p21 confer a risk for acute coronary syndrome in a Chinese Han population / Q. Zeng, Y. Yuan, S. Wang [et al.] // Can. J. Cardiol. – 2013. – Vol. 29, № 8. – P. 940–944.

Заболеваемость инсультом и смертность от него в Сибири являются одними из самых высоких в мире [2]. Тенденция роста заболеваемости направлена с запада на восток и с юга на север [3, 7].

Понятие «инсульт» невозможно определить как самостоятельное заболевание, так как в основе его лежит множество причин, влияющих на его развитие. К ним относятся как внешние (средовые) факторы, так и индивидуальные генетические особенности. Сложность патогенеза инсульта обусловлена его многофакторной природой [1, 6].

Поиск генетических предикторов развития инсультов в настоящее время ведется активно во всех развитых странах, и данное направление признано приоритетным, о чем свидетельствуют многочисленные исследования, направленные на выявление генетических факторов риска развития мультифакторных заболеваний [5, 4, 11, 15].

В качестве генетического предиктора развития ишемического инсульта (ИИ) у больных ГБ был изучен однонуклеотидный полиморфизм (ОНП) rs1378942 гена CSK. Этот ген расположен на 15-й хромосоме в локусе 15q24.1. ОНП маркер rs 1378942 гена CSK локализован в интроне. Данный ген кодирует различные семейства тирозинкиназ [14]. Ферменты тирозинкиназ играют важную роль в регуляции клеточного роста и дифференцировке нормальных клеток. Нарушение экспрессии гена CSK влечет за собой увеличение активности sck-тирозинкиназы. Тирозинкиназы представляют собой семейство протеинкиназ — натрийуретических пептидов, катализирующих перенос концевого фосфата с молекулы АТР на гидроксильную группу остатка тирозина в молекулах клеток-мишеней, которые представлены клетками сердечно-сосудистой системы, почек, эндокринных органов и центральной нервной системы [10, 13].

В нескольких крупных исследованиях изучалось влияние полиморфизма rs1378942 гена CSK на развитие различных патологических процессов [9]. Исследования, проведенные на популяциях Японии, Восточной Азии и Европы, выявили взаимосвязь полиморфизма rs1378942 гена CSK с развитием ГБ [12]. В Российской Федерации также подтверждена роль данного полиморфизма гена CSK в формировании ГБ [8].

Однако изучение влияния указанного полиморфизма на развитие ишемического инсульта в России ранее не проводилось.

Цель исследования: изучить прогностическую роль ОНП-маркера rs1378942 гена CSК в развитии ишемического инсульта.

Материал и методы исследования

С целью изучения прогностической роли ОНП-маркера rs1378942 гена CSК в исследование были включены 194 пациента с ишемическим инсультом (основная группа) и 157 пациентов без артериальной гипертензии (контрольная группа). Все пациенты основной группы были взяты в исследование в остром периоде инсульта – до 20 суток от момента начала сосудистого события. Основную группу составили представители европеоидной расы, жители города Красноярска, госпитализированные в первичный территориальный сосудистый центр «КГБУЗ КМКБ № 20 им. И.С. Берзона» за период 2010–2011 гг. В исследование были включены 194 больных с инсультом (118 мужчин, средний возраст 54,56±9,52 лет, и 76 женщин, средний возраст 55,84±9,23 лет) в возрасте от 21 до 70 лет (средний возраст 55,06±9,40 лет). Диагноз «острый инсульт» устанавливался на основании совокупности данных, полученных в ходе сбора анамнеза, данных физикального осмотра, исследования соматического и неврологического статуса, биохимических показателей крови и клинико-инструментальной диагностики, согласно национальному стандарту Российской Федерации (протокол ведения больных с инсультом от 01.09.2009 г.).

Группа контроля была сформирована НИИ СО РАМН в ходе международного проекта HAPIEE (Health, Alcohol and Psychosocial factors In Eastern Europe). Программа исследования включала: измерение артериального давления, антропометрию (рост, вес, объем талии, бедер), социально-демографические характеристики, опрос о курении, употреблении алкоголя (частота приема и типичная доза), уровень физической активности, оценку липидного профиля (общий холестерин, триглицериды, холестерин липопротеидов высокой плотности), опрос на выявление стенокардии напряжения согласно опроснику (ROSE), ЭКГ-покоя в 12 отведениях. Группа контроля представлена в количестве 157 человек без артериальной гипертензии (АГ) (106 мужчин и 51 женщина). В этой группе каждые 6 месяцев по данным двух и более исследований в течение нескольких лет с интервалом не менее 6 месяцев зафиксировано артериальное давление (АД) не выше «нормального». Половозрастные показатели группы контроля были сопоставимы с показателями основной группы.

Молекулярно-генетическое исследование проводили в ФГБУ «НИИ терапии и профилактической медицины» СО РАМН г. Новосибирска. Геномную ДНК выделяли из 5–10 мл периферической крови по стандартной методике с использованием протеиназы с последующей экстракцией фенол-хлороформом.  Полиморфизм гена тестировали с помощью ПЦР в реальном времени в соответствии с протоколом фирмы-производителя (зонды TaqMan, Applied Biosystems, США) на приборе AB 7900HT.

Статистическая обработка полученных данных выполнялась в программе SPSS, версии 20.0. Описательная статистика результатов исследования представлена для качественных признаков в виде процентных долей и их стандартных ошибок доли, для количественных – в виде средних арифметических и стандартных отклонений. Проверка нормальности распределения значений переменных в группах наблюдения проводилась с использованием критерия Колмогорова—Смирнова. Значимость различий качественных признаков в группах наблюдения оценивали при помощи непараметрического критерия χ² Пирсона с поправкой на непрерывность. При частоте встречаемости признака 5 и менее использовался точный критерий Фишера. Различия во всех случаях оценивали как статистически значимые при р<0,05.

Результаты и обсуждение

Результаты анализа rs1378942 гена CSK среди больных с инсультом и в контрольной группе представлены в таблице 1. Частота гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю у больных с инсультом составила 28,4%±3,3, гетерозиготного генотипа — AС –52,5%±3,7 и гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю – 19,1%±2,9. В контрольной группе 40,1%±3,9 являлись носителями гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю, 39,5%±3,9 – носителями гетерозиготного генотипа AС и 20,4%±3,2 – носителями гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена CSK.

Как следует из представленных данных, доказано статистически значимое снижение количества носителей гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю у больных с инсультом (28,4%±3,3) по сравнению с контролем (40,1%±3,9). Также выявлено статистически значимое преобладание гетерозиготного генотипа АС в группе больных с инсультом (52,5%±3,7) в сравнении с контрольной группой (39,5%±3,9) (табл. 1).

Вероятно, носительство гомозиготного распространенного генотипа АА и аллеля А полиморфизма rs 1378942 гена CSK имеет протективное значение в генезе развития ишемического инсульта.

Таблица 1

Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs1378942 гена CSK среди больных с инсультом и группы контроля

Примечание: р — уровень значимости при сравнении распределения генотипов с контрольной группой

Проведен анализ распределения генотипов гена CSK среди женщин, имеющих инсульт. По результатам исследования установлено, что различия в носительстве гетерозиготного генотипа AС гена CSK среди женщин с инсультом (47,2%±5,9) по сравнению с контрольной группой (29,4%±6,4) статистически незначимы.

Проведено сравнение распределения генотипов гена CSK среди 111 мужчин, имеющих инсульт, и 106 мужчин из группы контроля. Так, частота гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю у мужчин с инсультом составила 26,1%±4,2, гетерозиготного генотипа AС – 55,9%±4,7 и гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю – 18,0%±3,6. При исследовании частоты встречаемости генотипов и аллелей статистически значимых различий не выявлено.

При выделении в отдельную группу больных с атеротромботическим подтипом ишемического инсульта (n=130) частота носителей гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю составила 28,5±4,0, а гетерозиготного генотипа АС — 52,3±4,4, по гомозиготному редкому генотипу — 19,2±3,5. В сравнении с группой контроля, где эти же генотипы были распределены следующим образом:  АА (40,1±3,9), АС (40,1±3,9) и СС (19,7±3,2), статистически значимых различий при сравнении в этих группа выявлено не было.

При дальнейшем разделении групп больных с ишемическим атеротромботическим инсультом, учитывая гендерные различия, получены следующие данные. Установлено статистически значимое преобладание носителей гетерозиготного генотипа АС в группе женщин с ишемическим атеротромботическим инсультом — 51,9±6,9 по сравнению с женщинами группы контроля — 28,0±6,3 (табл. 2).

Обращая на это внимание, можно предположить, что носительство гетерозиготного генотипа АС полиморфизма rs1378942 гена CSK является генетическим фактором риска развития атеротромботического подтипа ишемического инсульта у женщин.

Таблица 2

Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs1378942 гена CSK среди женщин с ишемическим атеротромботическим инсультом и группы контроля

Примечание: р — уровень значимости при сравнении распределения генотипов с контрольной группой; р* — уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера

В выделенной группе мужчин с ишемическим атеротромботическим инсультом не установлено статистически значимых различий ни по одному генотипу.

При анализе полиморфизма rs1378942 гена CSK среди больных с ишемическим лакунарным инсультом и контрольной группы получены следующе результаты. Частота гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю у больных с лакунарным ишемическим инсультом составила 30,8%±7,4, гетерозиготного генотипа AС – 56,4%±7,9 и гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена CSK – 12,8% ±5,4. В контрольной группе 40,1%±3,9 являлись носителями гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю, 40,1%±3,9 – носителями гетерозиготного генотипа AС и 19,7%±3,2 – носителями гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена CSK. По результатам нашего исследования статистически значимых различий не выявлено.

Частота носителей аллеля А гена CSK среди женщин с лакунарным ишемическим инсультом составила 56,7±9,0, у группы контроля – 62,0±4,9. Частоты носителей аллеля С гена CSK распределились следующим образом: женщины с лакунарным ишемическим инсультом – 43,3±9,0 и контрольная группа – 38,0±4,9. Не выявлено статистически значимых отличий ни по одному генотипу между женщинами с лакунарным инсультом и женщинами группы контроля.

Частота носителей аллеля А гена CSK среди мужчин с лакунарным ишемическим инсультом составила 60,4±7,1, у группы контроля – 59,3±3,4. Частоты носителей аллеля С гена CSK распределились следующим образом: мужчины с лакунарным ишемическим инсультом – 39,6±7,1 и контрольная группа – 40,7±3,4. Не выявлено статистически значимых отличий ни по одному генотипу между мужчинами с лакунарным инсультом и мужчинами группы контроля.

В нескольких крупных исследованиях изучалось влияние полиморфизма rs1378942 гена CSK на развитие различных патологических процессов. Исследования, проведенные на популяциях Японии и Восточной Азии, показали взаимосвязь полиморфизма rs1378942 гена CSK с ГБ. Была установлена ассоциация носительства гомозиготного генотипа АА распространенного аллеля А с риском ГБ (ОШ=1,09 95%ДИ 0,98–1,22), одномоментно на этой же популяции изучался уже упомянутый полиморфизм rs1004467 гена CYP17A1, у которого также была выявлена ассоциативная связь носительства гомозиготного генотипа АА с риском ГБ (ОШ 1,30 95% ДИ 1,07–1,25). Российские исследования установили ассоциативную связь гетерозиготного генотипа АС rs1378942 гена CSR c повышением риска артериальной гипертензии.

Полученные в нашей работе результаты перекликаются с данными российских исследований, так как нами установлено, что гетерозиготный генотип АС rs1378942 гена CSK значимо преобладает в группе больных с инсультом (52,5%±3,7) по сравнению с группой контроля (39,5%±3,7) (ОШ 1,688 95% ДИ 1,074–2,655).

Заключение

Установлено статистически значимое преобладание гетерозиготного генотипа АС rs1378942 гена CSK в группе больных с инсультом (52,2%±3,7) по сравнению с группой контроля (39,5%±3,9), (р=0,023), (ОШ; 95% ДИ ОШ 0,807; 0,595–1,096). Статистически значимые различия по гетерозиготному генотипу АС rs1378942 гена CSK получены при сравнении женщин основной группы с атеротромботическим подтипом ишемического инсульта (51,9%±6,9) по сравнению с женщинами группы контроля (28,0%±6,3),(р=0,024); (ОШ; 95% ДИ ОШ 0,804; 0,459–1,407).

Библиографическая ссылка