Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Мондодоев А.Г. 1, 2 Николаев С.М. 2, 1 Болотов Г.Д. 3 Тармаев Ю.В. 3 Мануева Л.Б. 3

---

1 ГОУ ВО «Бурятский государственный университет», Медицинский институт

2 ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН

3 Республиканская клиническая больница им. Н.А. Семашко

Целью настоящей работы явилось исследование влияния «эксабола» сухого экстракта корней и корневищ сабельника болотного – Comarum palustre L. (СЭСБ) на функциональное состояние почек, липидный состав крови, активность свободнорадикальных процессов и выраженность иммунных нарушений в хронической фазе экспериментального нефрита Хеймана. Материалы и методы. Эксперименты проведены на крысах обоего пола линии Вистар массой 180–200 г. Экспериментальный гломерулонефрит вызывали по методу Reynolds и Pusey в модификации Мухина (2002). Результаты и обсуждение. Установлено, что хронический гломерулонефрит у животных сопровождается нарушением функционального состояния почек, активацией иммунных нарушений, свободнорадикальных процессов, дислипидемией, патоморфологическими изменениями. Курсовое интрагастральное введение сухого экстракта сабельника болотного лабораторным животным в экспериментально-терапевтической дозе оказывает выраженное нефропротекторное действие, о чем свидетельствует нормализация показателей морфофункционального состояния почек, липидного спектра крови, иммунного статуса и снижение активности свободнорадикальных процессов.

Статья в формате PDF

197 KB

свободнорадикальные процессы

дислипидемия

иммунные нарушения

нефрит хеймана

эксабол

гломерулонефрит

1. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меньщикова Е.Б. Окислительный стресс. – М., 2001. – 343 с.

2. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. – СПб., 1995. – 324 с.

3. Морозов Ю.А., Марченко Т.В. Патофизиологические аспекты острого почечного повреждения // Почки. – 2012. – № 2. – С. 72–77.

4. Мухин И.В. Коррекция дислипидопротеидемии посредством системной энзимотерапии при экспериментальном гломерулонефрите // Пат. физиолог. и эксп. терапия. – 2002. – № 4. – С. 27–28.

5. Настаушева Т.Л., Ситникова В.П., Стешинская Е.В., Стахурлова Л.И. Иммуносупрессивная терапия гломерулонефрита у детей цитостатическими препаратами алкилирующего действия // Нефрология и диализ. – 2000. – № 4. – С. 23–29.

6. Перов Ю.Л. Морфометрическое изучение почки в норме и при патологии: возможности и ограничения // Архив патологии. – 1984. – Т. 46. – № 7. – С. 78–83.

7. Рябов С.И. Нефрология: Руководство для врачей. – СПб., 2000. – 672 с.

8. Akerboom T. P. M., Sies H. Assay of glutathione, glutathione disulfide and glutathione mixed disulfides in biological samples // Methods Enzymol. 1981. V.77. P. 373–382.

9. Goth L. A simple method for determination of serum catalase activity and revision of reference range // Clinica Chimica Acta, 1991. Vol. 196, no. 2-3. P. 143–152.

10. Kaysen G.A. Lipid and Lipoprotein Metabolism in Chronic Kidney Disease // J. of Renal Nutricion. 2009. Vol. 19, no. 1. Р. 73-77.

Гломерулонефрит (ГН) – неуклонно прогрессирующее иммуноопосредованное воспалительное заболевание почек, приводящее к формированию хронической почечной недостаточности (ХПН). Накоплено достаточно фактов, свидетельствующих о существенной роли мембранодеструктивных процессов в патогенезе ХПН [7]. Нарушение структурно- функциональной организации мембранных образований клеток данного органа связано с дисбалансом в про- и антиоксидантных системах и происходит за счет активации перекисного окисления липидов (ПОЛ). Нарушения мембран клеток почек могут быть выражены в различной степени (от незначительной дезинтеграции с развитием их дисфункции до деструкции и гибели клетки), что зависит от состояния эндогенной антиоксидантной системы (АОС), роль которой заключается в защите клеток и тканей от влияния активных форм кислорода (АФК) и других токсических продуктов [1; 3].

В комплексе неиммунных факторов, влияющих на прогрессирование заболеваний почек, большое значение имеют метаболические нарушения липидного обмена – дис- и гиперлипидемии. Основное повреждающее действие липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) и липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) объясняется их способностью связываться с базальной мембраной клубочка и вызывать нарушение ее проницаемости. Атерогенные фракции липопротеидов способны проникать в мезангий клубочков и потенцировать пролиферацию мезангиальных клеток, что, в конечном итоге, приводит к формированию гломерулосклероза. Фактором, противодействующим отложению липидов, являются липопротеиды высокой плотности (ЛПВП), обладающие способностью связывать холестерин и удалять его из почечной ткани [2; 10].

Целью настоящей работы явилось исследование влияния «эксабола» сухого экстракта сабельника болотного – Comarum palustre L. (СЭСБ) на функциональное состояние почек, липидный состав крови, активность свободнорадикальных процессов и выраженность иммунных нарушений в хронической фазе экспериментального нефрита Хеймана.

Материалы и методы. Эксперименты проведены на крысах обоего пола линии Вистар массой 180–200 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария при одинаковом уходе и питании, световом и температурном режиме, со свободным доступом к воде. Содержание животных соответствовало правилам лабораторной практики и приказу Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики». Экспериментальные исследования проводились в соответствии с Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.

Экспериментальный гломерулонефрит вызывали по методу Reynolds и Pusey в модификации И.В. Мухина (2002) [4]. Лабораторным животным в 2 точки у хвоста вводили полный адьювант Фрейнда, а также 50 % тканевый антиген коркового слоя почек здоровой крысы, через неделю после первого введения, инъекцию смеси повторяли в той же дозе. Животные первой опытной группы получали внутрижелудочно водный раствор СЭСБ в экспериментально-терапевтической дозе 100 мг/кг 1 раз в сутки, в течение 2 месяцев с момента последнего введения антигенного комплекса. В качестве референтного препарата использовали канефрон, в объеме 1,5 мл/кг, который вводили животным второй опытной группы по аналогичной схеме. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество воды дистиллированной. С целью оценки функционального состояния почек измеряли диурез и скорость клубочковой фильтрации (СКФ), проводили общий анализ мочи. В сыворотке крови определяли концентрацию креатинина, мочевины и липидный спектр на биохимическом анализаторе «DIANA» с использованием готовых наборов фирмы «Cormay» (Польша). Об интенсивности перекисного окисления липидов судили по концентрации малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови и гомогенате коркового слоя почек. Состояние эндогенной антиоксидантной системы организма оценивали по активности каталазы [9] и содержанию восстановленного глутатиона в крови [8]. Выраженность иммуновоспалительных процессов определяли по уровню циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови [5]. Для патоморфологических исследований гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином, а также по Массону и ШИК-реакцией. Морфометрические исследования проводили с использованием компьютерной программы «Motic Image 2000». Определяли количество клеток в клубочке, площадь почечного клубочка, капилляров клубочка и полости капсулы клубочка [6]. Результаты исследований подвергали статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента. Различие считали достоверным при Р≤ 0,05.

Результаты и их обсуждение. Результаты, представленные в таблице 1, свидетельствуют, что на фоне олигурии у крыс контрольной группы отмечается нарушение экскреторной функции почек и выраженная протеинурия. Так, диурез снижается на 47 %, СКФ в 4,0 раза, содержание белка в моче увеличивается в 3,8 раза по сравнению с таковыми показателями у интактных животных.

Таблица 1

Влияние СЭСБ на функциональное состояние почек у белых крыс при хроническом гломерулонефрите (60-е сутки наблюдения)

Примечание: * – здесь и далее, различие достоверно в группах контроль-опыт при Р ≤ 0,05

Курсовое введение животным СЭСБ и канефрона приводит к улучшению показателей функционального состояния почек: диурез увеличивается в 2,5 и 2,2 раза, СКФ – в 2,1 и 1,8 раза, протеинурия снижается на 55 % и 46 %, по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.

Результаты исследований азотистого обмена показали (табл. 2), что через 2 месяца от момента последнего введения антигенного комплекса у животных контрольной группы наблюдается повышение концентрации креатинина и мочевины в сыворотке крови в 2,0 и 3,0 раза соответственно, по сравнению с данными у животных интактной группы. На фоне курсового введения СЭСБ и канефрона, у животных опытных групп содержание креатинина и мочевины в сыворотке крови снижается в среднем на 35 % и 44 % соответственно по сравнению с данными у животных контрольной группы.

Таблица 2

Влияние СЭСБ на показатели азотистого обмена у белых крыс при хроническом гломерулонефрите (60-е сутки наблюдения)

Развитие хронической стадии экспериментального нефрита сопровождается гипер- и дислипидемией (табл. 3). Так, у животных контрольной группы в сыворотке крови содержание общего холестерина (ОХ) увеличивается на 33 %, триацилглицеридов (ТГ) – на 95 %, липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) – на 65 %, липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) – в 3,0 раз, и содержание липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) снижается на 47 %, а коэффициент атерогенности увеличивается в 3,8 раза по сравнению с данными у крыс интактной группы.

Таблица 3

Влияние СЭСБ на липидный состав крови у белых крыс при хроническом гломерулонефрите (60-е сутки наблюдения)

Курсовое введение СЭСБ и препарата сравнения приводит к снижению содержания ОХ на 21 и 24 %, ТГ 25 и 34% и ЛПНП 53 и 48 %, ЛПОНП снижаются на 23 и 31% соответственно, повышается содержания ЛПВП в среднем на 46% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. У животных, получавших испытуемый фитоэкстракт, коэффициент атерогенности был ниже, чем в контрольной группе, на 56 %. Гиполипидемическое действие СЭСБ сопоставимо с таковым препарата сравнения, хотя СЭСБ в большей степени снижает уровень ЛПНП, а канефрон более выражено снижает содержание ТГ и связанные с ним ЛПОНП.

Таблица 4

Влияние СЭСБ на перекисное окисление липидов и антиоксидантную систему организма белых крыс при хроническом гломерулонефрите (60-е сутки наблюдения)

Представленные в таблице 4 данные показывают, что хронический гломерулонефрит сопровождается индукцией свободнорадикальных процессов и снижением активности антиоксидантной системы организма. Так, у животных контрольной группы концентрация МДА в сыворотке крови и гомогенате ткани почек повышается в 3,5 и 2,0 раза, активность каталазы и содержание восстановленного глутатиона в крови снижаются в 5,3 и 2,2 раза соответственно, по сравнению с аналогичными показателями у животных интактной группы. Курсовое введение СЭСБ и канефрона животным опытных групп оказывает выраженное антиоксидантное действие (табл. 4), на что указывает снижение концентрации МДА в сыворотке крови (в 2,4 и 2,2 раза) и гомогенате ткани почек  (в 1,6 и 1,2 раза), а также повышение активности каталазы в сыворотке крови (в 4,9 и 4,0 раза) и содержания восстановленного глутатиона в крови (в 3,3 и 3,0 раза соответственно), по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом СЭСБ обладает более выраженным антиоксидантным действием, чем канефрон.

Таблица 5

Влияние СЭСБ и канефрона на уровень циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови белых крыс с хроническим гломерулонефритом (60–е сутки наблюдения)

На фоне введения СЭСБ и канефрона у животных опытных групп отмечается снижение уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) на 34 % и 30 % соответственно по сравнению с таковым у животных контрольной группы (табл.5).

Результаты патоморфологических исследований показали, что при экспериментальном хроническом гломерулонефрите у животных контрольной группы наблюдаются выраженные нарушения микроциркуляции в виде полнокровия сосудов коркового и мозгового слоев почки и стаза эритроцитов в капиллярах. Выявляются диффузные изменения в клубочках в виде увеличения площади и гиперклеточности. Гиперклеточность в большинстве случаев связана с пролиферацией мезангиальных клеток, при этом отмечается увеличение количества эндотелиальных клеток и инфильтрация почечных клубочков лейкоцитами. В клубочках наблюдается очаговое расширение мезангия и накопления мезангиального матрикса. Капиллярные петли у большинства клубочков полнокровны и тесно прилегают друг к другу. Выявляются единичные клубочки, имеющие дольчатый (лобулярный) вид из-за пролиферации мезангиальных клеток и увеличения мезангиального матрикса. Гломерулярные базальные мембраны диффузно утолщены и часто имеют двухконтурный вид, что обусловлено проникновением отростков мезангиальных клеток на периферию капиллярных петель (интерпозиция мезангия) под эндотелием  и синтезом  ими компонентов внеклеточного матрикса. В результате между мезангиальными клетками и эндотелием формируется как бы дополнительная мембрана. У животных контрольной группы отмечаются выраженные дистрофические и некротические изменения клеток канальцев почек в виде гиалиново-капельной дистрофии, кариопикноза и кариолизиса. Наблюдается слущивание нефроцитов в просвет канальцев. Просветы канальцев сужены и заполнены гиалиновыми цилиндрами.

Таблица 6

Влияние СЭСБ на морфометрические показатели почек у белых крыс при хроническом гломерулонефрите (60-е сутки наблюдения)

На фоне введения СЭСБ количество увеличенных в размере клубочков снижается на 15 % по сравнению с таковым у животных контрольной группы (табл. 6). Отмечается сегментарная пролиферация мезангиальных клеток, умеренное накопление мезангиального матрикса, что ведет к сегментарному расширению мезангия. Наблюдается пролиферация эндотелиоцитов и инфильтрация капилляров лейкоцитами. Встречаются единичные гломерулы с очаговым некрозом капиллярных петель. В сохранившихся капиллярах наблюдается стаз эритроцитов.

Таблица 7

Влияние СЭСБ на морфометрические показатели почечного клубочка  у белых крыс при хроническом гломерулонефрите (60-е сутки наблюдения)

Результаты морфометрических исследований показали (табл. 7), что на фоне введения СЭСБ площадь капилляров клубочка снижается на 11 %, общее количество клеток в клубочке – на 12 % по сравнению с таковыми показателями у животных контрольной группы. Площадь полости почечного клубочка у животных опытной группы не имеет значительных отличий от таковой у животных интактной группы.

Заключение. Таким образом, курсовое введение СЭСБ при хроническом гломерулонефрите оказывает выраженное нефропротекторное действие, о чем свидетельствует нормализация показателей морфофункционального состояния почек, липидного спектра крови, иммунного статуса и снижение активности свободнорадикальных процессов. Фармакотерапевтическая эффективность СЭСБ сопоставима, а в большинстве случаях превосходит таковую референтного препарата – канефрона.

Библиографическая ссылка