Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Златник Е.Ю. 1 Непомнящая Е.М. 1 Новикова И.А. 1 Алиев Т.А. 1 Закора Г.И. 1 Селютина О.Н. 1 Ващенко Л.Н. 1 Андрейко Е.А. 1 Аушева Т.В. 1 Бондаренко Е.С. 1

---

1 ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Изучали субпопуляционный состав лимфоцитов при первичных и рецидивных саркомах мягких тканей в гомогенатах ткани опухоли, перитуморальной области и линии резекции методом проточной цитофлюориметрии. При III стадии заболевания установлены различия, связанные с высоким содержанием Tregs и низким - CD3+CD8+ в ткани рецидивных опухолей по сравнению с первичными. Обнаружены высокие уровни Tregs и DN T-лимфоцитов и более низкие CD3+CD4+, CD3+CD8+ и NK в ткани линии резекции рецидивных сарком. Ткань недифференцированной опухоли (G4) характеризуется снижением содержания NK-лимфоцитов по сравнению с G3, а наиболее высокие уровни DN T-лимфоцитов отмечены в рецидивных недифференцированных саркомах. Различия состояния локального иммунитета объясняют развитие рецидивов сарком мягких тканей.

Статья в формате PDF

141 KB

опухоли мягких тканей

рецидивы

локальный иммунитет

1. Алиев М.Д. Введение в онкоортопедию. Саркомы костей, мягких тканей и опухоли кожи. – 2009. - № 1. – С. 14-17.

2. Каприна А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в России в 2013 году (заболеваемость и смертность) / под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. - М., 2015. - 250 с.

3. Кит О.И., Шапошников А.В., Златник Е.Ю., Никипелова Е.А., Новикова И.А. Местный клеточный иммунитет при аденокарциноме и полипах толстой кишки // Сиб. мед. обозрение. – 2012. - № 4 (76). – С. 11-16.

4. Самотыя Е. Двойное негативное (ДА) и двойное позитивное (ДП) Т-лимфоциты при раке и неопухолевых заболеваниях // Онкологический журнал. – 2011. - Т. 5, № 3 (19). – С. 145.

5. Селютин А.В., Сельков С.А. Методы определения Т-регуляторных клеток в периферической крови // Terra medica (Лаб. диагностика). – 2008. - № 4. – С. 19-21.

6. Fazekas St., Groth B., Zhu E., Asad S., Lee L. Flow cytometric detection of human regulatory T-cells // Methods Mol. Biol. – 2011. - V. 114. - № 9. – P. 1209-1217.

7. Fisher C. The comparative roles of electron microscopy and immunohistochemestry in the diagnosis of soft tissue tumors // Histopathology. – 2006. - V. 48. - Р. 32-41.

8. Fletcher C.D.M., Unni K.K., Mertens F. Eds. WHO Classification of tumors of soft tissue and bone. – 4-th edition by Fletcher C.D. Metal. – Lyon, 2013.

9. Goldberg Brynn R. et al. Soft Tissue Sarcoma: An Overview // Orthop. Nurs. – 2009 (Jan-Feb). - V. 26 (1). – Р. 4-11, quiz 12-3.

10. Jemal A. et al. Cancer statistics / Jemal A., Siegel R., Ward E. J. // Clin. – 2009. - V. 59. – P. 225.

Саркомы мягких тканей (СМТ) – сравнительно редкая группа злокачественных новообразований различной локализации и гистологической структуры [9]. Широкий гистологический спектр СМТ объясняется тем, что они происходят из эмбриональных мезенхимальных клеток, которые делятся на клетки поперечно-полосатой мускулатуры, жировую или соединительную ткань, кости и хрящи. Также к СМТ относятся опухоли периферических нервов [8]. По статистическим данным, в 2013 году в России зарегистрировано 3407 случаев СМТ: среди мужчин 1550 случаев, среди женщин – 1857. Абсолютное число умерших составило: у мужчин – 1465 случаев, у женщин - 1451, а их средний возраст - 58,9 у мужчин, 64,8 у женщин [2].

СМТ – агрессивные опухоли с высокой степенью рецидивирования. Радикальная резекция в пределах здоровых тканей позволяет снизить процент рецидивов до 25-30% без последующей терапии. После ампутаций и экзартикуляций рецидивы возникают в 10-15% случаев [1]. Раннее появление локального рецидива повышает риск метастазирования, преимущественно гематогенных [1]. В 70-80% случаев метастазы локализуются в легких, печени. Средняя выживаемость после развития отдаленных метастазов составляет 11-15 месяцев [2]. В настоящее время выделяют более 30 гистологических подтипов СМТ [7; 8]. Вследствие такого разнообразия в литературе не всегда удается определить сопоставимые группы больных.

Высокая частота рецидивирования СМТ побуждает к поиску ее причин. Возникает интерес к микроокружению опухолей, в частности иммунологическому. От того, насколько эффективна элиминация резидуальных опухолевых клеток после операции, зависит опасность развития локального рецидива. Возможность такой элиминации связана прежде всего с иммунокомпетентными клетками, присутствующими в опухоли и в прилежащей к ней области, их состав и характеристики функциональной активности представляют значительный интерес. Информации об особенностях локального иммунитета при СМТ в доступной нам литературе не обнаружено. Имеются немногочисленные публикации о местном иммунитете при опухолях других локализаций [3].

Цель работы: дать сравнительную оценку факторов локального иммунитета при первичных и рецидивных саркомах мягких тканей.

Материалы и методы

Под наблюдением находилось 22 больных с первичными и 16 с рецидивами сарком мягких тканей. Сроки развития рецидивов составляли от 2 месяцев до 7 лет, у ряда больных они были многократными. Средний возраст впервые зарегистрированных больных с СМТ составил 56 лет, с рецидивами СМТ – 55 лет. Среди первичных больных с СМТ было 12 женщин и 10 мужчин; при рецидивах СМТ – 8 мужчин и 8 женщин, т.е. распределение первичных и рецидивных больных по полу и возрасту было однотипным. СМТ локализовались во всех частях тела человека, но наиболее часто располагаются на конечностях и туловище. У больных с первичными СМТ опухоли распределялись следующим образом: у одного пациента на туловище, у 6 – на верхних конечностях, у 15 – на нижних конечностях.

Гистологическое строение первичных СМТ было следующим: по 5 случаев липосаркомы и плеоморфной саркомы, 4 случая лейомиосаркомы, 2 – ангиолейомиосаркомы, по 1 – синовиальной саркомы, рабдомиосаркомы, злокачественной шванномы, недифференцированной саркомы, злокачественной мезенхимомы и миксосаркомы. В группе с рецидивами СМТ диагностировано по 3 случая плеоморфной саркомы и липосаркомы, по 2 – лейомиосаркомы и фибросаркомы, по 1 - синовиальной саркомы, рабдомиосаркомы, злокачественной шванномы, злокачественной гиберномы, недифференцированной саркомы и миксосаркомы.

Распределение по стадиям больных с первичными саркомами мягких тканей было следующим: у 4 пациентов определялась IIа стадия, у 2 пациентов – IIс, у 14 – III, у 2 – IV стадия. Среди больных с рецидивами у одного пациента была IIв стадия, у 2 – IIа, у 11 – III, у 2 - IV стадия.

У 20 больных из 22 с первичными СМТ опухоли располагались глубоко в мягких тканях и имели диаметр больше 5 см. В 2 случаях опухоль была размерами более 5 см в диаметре и располагалась поверхностно, имела экзофитный рост.

У 15 больных из 16 с рецидивами СМТ опухоли имели размер более 5 см и локализовались в глубоко лежащих тканях. У одного пациента опухоль была менее 5 см и располагалась поверхностно, без признаков прорастания кожи.

По степени дифференцировки опухоли распределялись следующим образом: у 2 больных с первичными опухолями выявлена высокодифференцированная опухоль (G1), у 3 – умереннодифференцированная опухоль (G2), у 15 – низкодифференцированная опухоль (G3), у 2 - недифференцированная опухоль (G4). В группе с рецидивами СМТ высокодифференцированная опухоль (G1) определялась у 2 больных, умереннодифференцированная опухоль (G2) – у 2, низкодифференцированная опухоль (G3) – у 9 больных, недифференцированная опухоль (G4) – в 3 случаях. У одного больного с первичной СМТ наблюдался метастаз в кости таза, а у 2 больных с рецидивами одновременно выявлены метастазы в легкие.

Больным выполняли объем операции от удаления опухоли мягких тканей с реконструктивно-пластическим компонентом до ампутаций конечностей.

Удаленные опухоли подвергали морфологическому исследованию; кроме того, фрагменты опухолевой ткани, перитуморальной зоны (визуально неизменной ткани, прилежащей к опухоли) и ткани, взятой по линии резекции, гомогенизировали с помощью дезагрегирующего устройства BD Medimachine. В гомогенатах определяли популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов на проточном цитометре FACSCantoII (BD) с панелью антител T-, B-, NK (CD45, CD3, CD4, CD8, CD19, CD16/56); дополнительно изучали количественное содержание Т-регуляторных (T-regs) клеток (CD4+CD25+CD127dim). Несмотря на то что наиболее распространенным методом определения последних является подсчет клеток с фенотипом CD4+CD25brightFoxP3+, в литературе есть данные о приемлемости для этой цели фенотипа CD4+CD25+CD127dim [5; 6].

Результаты выражали в процентах от общего количества лимфоцитов, а для T-regs в процентах от CD3+CD4+ клеток. Статистическую обработку данных выполняли с помощью параметрических и непараметрических методов (t-критерий Стьюдента, критерий Уилкоксона, метод непрямых разностей).

Результаты исследования и их обсуждение

В таблице приведено процентное содержание лимфоцитов, исследованных субпопуляций, в образцах тканей больных первичными и рецидивными СМТ. Представлены данные по опухолям наиболее часто встречающейся Ш стадии.

Сравнительная характеристика показателей клеточного локального иммунитета у больных саркомами мягких тканей III стадии

Примечание. * – статистически достоверные различия между показателями опухолевой ткани; ** – статистически достоверные различия между показателями ткани перитуморальных зон (ПЗ); *** – статистически достоверные различия между показателями ткани линии резекции (ЛР); ● – статистически достоверные отличия от показателей перитуморальной зоны ●● – статистически достоверные отличия от показателей линии резекции (р<0,05).

Сопоставление лимфоцитарного состава образцов тканей между первичными и рецидивными СМТ установило, что процентное содержание CD3+CD8+ лимфоцитов в ткани первичных опухолей статистически достоверно выше, чем в ткани рецидивных, а количество Тregs, напротив, в них ниже. Различия обнаружены также при сопоставлении показателей перитуморальной зоны первичных и рецидивных опухолей. Так, в ткани перитуморальной зоны первичных сарком ниже, чем при рецидивных, оказалось содержание CD19+ лимфоцитов, а также минорных Т-клеточных субпопуляций NКТ и DN. Кроме того, статистически достоверные различия исследуемых показателей найдены и в ткани линии резекции: уровни CD3+, CD3+CD8+, DN и Тregs в рецидивных опухолях были выше, а количество CD3+CD4+ и CD19+ клеток было ниже, чем в первичных.

Из таблицы также видно, что состав лимфоцитов в опухоли отличался от такового в образцах тканей, не пораженных опухолью. Так, в первичных опухолях уровни СD3+, СD3+CD8+ и Тregs были статистически значимо выше, а уровни СD19+, NK- и NКТ клеток – ниже, чем в перитуморальной области и в ткани линии резекции. Кроме того, в ткани линии резекции количество Тregs было ниже, а В-лимфоцитов (CD19+) – выше, чем в образцах перитуморальной зоны. Аналогичные различия наблюдались в ткани рецидивных СМТ с дополнительно выявленным превышением содержания СD3+CD4+ клеток в опухоли по сравнению с перитуморальной зоной.

Проведенное исследование локального иммунологического статуса первичных и рецидивных опухолей СМТ III стадии показало достоверное различие из восьми исследованных параметров: в ткани опухоли – по двум, в ткани перитуморальной зоны – по трем, в ткани линии резекции – по семи показателям. Ткань линии резекции отличалась от ткани первичной опухоли по шести иммунологическим показателям, а от рецидивной – по трем. Таким образом, линия резекции рецидивной опухоли была иммунологически близка к ткани опухоли.

Особое значение для прогноза имеет степень дифференцировки опухоли, в связи с этим был проведен сравнительный анализ изученных иммунологических показателей при G3 и G4. Результаты представлены на рисунках А и Б.

Рис. А. Уровни различных лимфоцитов в ткани первичных СМТ различной степени дифференцировки

Рис. Б. Уровни различных лимфоцитов в ткани рецидивных (Б) СМТ различной степени дифференцировки

Как видно из рисунков А и Б, уровни NК-клеток как в первичных, так и в рецидивных СМТ снижаются по мере уменьшения степени дифференцировки опухолей. В ткани первичных и рецидивных СМТ при G4 обнаружено больше Т-лимфоцитов (СD3+), чем в G3 опухолях. Однако в первичных СМТ это достигается за счет более значительного присутствия СD3+СD8+ клеток (49,5±1,5 и 42,7±2,1% соответственно), а в рецидивных – за счет высокого содержания в ткани G4 опухолей DN Т-клеток (СD3+СD4-СD8-), составляющего 18,5±1,7 при G4 и 6,7±1,2% при G3; для всех показателей р<0,05. Кроме того, в рецидивных G4 СМТ в опухоли снижается по сравнению с G3 процент NKT-клеток, составляя 3,6±0,6 против 6,5±1,1% (р<0,05).

Заключение

Проведенное исследование выявило ряд различий показателей локального клеточного иммунитета при саркомах мягких тканей между образцами опухоли, перитуморальной зоны и линии резекции, а также между первичными и рецидивными опухолями. Некоторые из найденных различий были связаны со степенью дифференцировки опухоли.

Более низкое содержание в ткани рецидивных по сравнению с первичными СМТ СD3+СD8+ Т-лимфоцитов и более высокое – Тregs характеризует иммуносупрессию. Последняя связана с угнетением цитотоксического звена адаптивного иммунитета при рецидивах. В рецидивных опухолях СМТ показатели локального иммунитета по сравнению с первичными в тканях по линии резекции незначительно отличаются от таковых в самой опухоли. Данное положение обусловлено преимущественным подавлением цитотоксических лимфоцитов (СD3+СD8+ и СD16/56+).

Обнаружение в ткани недифференцированных СМТ, особенно рецидивных, высоких уровней DN T-лимфоцитов, не экспрессирующих рецепторов основных субпопуляций, по-видимому, отражает нарушения процессов дифференцировки Т-клеток, находящихся в микроокружении этих опухолей. Эти лимфоциты считаются принадлежащими к субпопуляции Т-клеток с TCRγΔ, которые могут обладать свойствами Тregs [10]. В норме они содержатся в тимусе и в желудочно-кишечном тракте [6]. Однако описано повышение их уровня в крови при некоторых злокачественных опухолях [4], что предполагает негативные изменения иммунного статуса.

Ткань линии резекции рецидивных сарком является иммунологически неполноценной по сравнению с первичными опухолями. Это положение обусловлено увеличенным содержанием количества Т-лимфоцитов, принадлежащих к Тregs и DN, и уменьшенным NK и CD3+CD8+, которые являются предшественниками цитотоксических Т-лимфоцитов. Вероятно, с описанными особенностями связано и многократное рецидивирование, наблюдаемое в данной группе больных.

Библиографическая ссылка