Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Воронков А.В. 1 Поздняков Д.И. 1 Мамлеев А.В. 1

---

1 Пятигорский медико-фармацевтический институт-филиал ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет»

В исследовании отражена сравнительная оценка действия мексидола, тиоктовой кислоты и ATACL на антитромботическую функцию эндотелия и некоторые показатели состава периферической крови экспериментальных животных на фоне фокальной ишемии головного мозга. Антитромботическую функцию эндотелия оценивали по способности тромбоцитов к агрегации (определяли степень, скорость и показатель агрегации тромбоцитов), уровню фактора фон Виллебранда, продолжительности свертывания крови. Оценивали гематологические показатели: количество лейкоцитов, лейкоформула, количество эритроцитов, содержание гемоглобина, гематокрит, средний объем эритроцита, концентрация гемоглобина в одном эритроците, содержание тромбоцитов. Полученные в ходе исследования данные показывают, что на фоне фокальной ишемии головного мозга развивается дисфункция эндотелия мозговых сосудов, сопровождаемая повышением степени (в 1,97 раза (p<0,05) по сравнению с Л/О крысами), скорости и показателя агрегации тромбоцитов, уровня фактора фон Виллебранда (на 42,4% (p<0,001)), продолжительности свертывания крови, со снижением содержания гемоглобина и умеренным лейкоцитозом. Применение исследуемых соединений оказало положительное влияние на антитромботическую функцию эндотелия. Так, при применении мексидола, тиоктовой кислоты и ATACL степень агрегации тромбоцитов уменьшилась в 1,6, 1,44, 1,74 (p<0,05) раза соответственно, таким образом, у исследуемых соединений можно предполагать наличие эндотелиопротекторных свойств. Сопоставляя полученные экспериментальные данные по степени возрастания данного вида фармакологической активности, анализируемые вещества можно расположить в ряд: ATACL >тиоктовая кислота > мексидол.

Статья в формате PDF

165 KB

мексидол

тиоктовая кислота

антитроботическая функция эндотелия

ишемия головного мозга

1. Воронков А.В., Поздняков Д.И., Мамлеев А.В. Изучение вазодилатирующей и антитромботической функций эндотелия мозговых сосудов на различных моделях его ишемического повреждения // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 5. -URL: http://www.science-education.ru/128-22406.

2. Габбасов З.А., Попов Е.Г., Гаврилов И.Ю., Позин Е.Я., Маркосян Р.А. Новый высокочувствительный метод анализа агрегации тромбоцитов // Лабораторное дело. – 1989. - № 10. - С. 15-18.

3. Галиновская Н.В., Усова Н.Н., Лышенко О.В. и др. Лабораторные показатели воспалительного ответа у лиц с преходящими нарушениями мозгового кровообращения // Медико-биологические проблемы жизнедеятельности. - 2011. - № 2. - С. 53-58.

4. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Мартынов М.Ю. Церебральный инсульт: проблемы и решения // Вестник РАМН. - 2003. - № 11. - С. 44–48.

5. Ефимова О.С., Слободенюк А.В., Белкин А.А. и др. Эпидемиология инсультов: ведущие факторы риска и направления профилактики // Гигиена и эпидемиология. - 2008. - Т. 48, № 8. - С. 43-46.

6. Информационный бюллетень Всемирной организации здравоохранения. - 2014. - № 310. Окт. - С. 1-2.

7. Корокин М.В., Пашин Е.Н., Бобраков К.Е. и др. Изучение эндотелиопротективного и коронарного действия производных 3-оксопиридина // Кубанский научный медицинский вестник. - 2009. - Т. 109, № 4. - С. 104–109.

8. Кочкаров В.И., Молчанова О.В., Покровская Т.Г. и др. Эндотелиопротективное действие комбинации тиоктовой кислоты с розувастатином при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота // Научные ведомости. Сер.: Медицина. Фармация. - 2014. – Т. 182, № 11. - С. 192-193.

9. Супрун Э.В. Влияние ронколейкина на активность системы оксида азота в головном мозге крыс с экспериментальным геморрагическим инсультом // Украинский журнал экстремальной медицины имени Г.О. Можаева. - 2010. - Т. 11, № 4. - С. 117-120.

10. Суслина З.А., Танашян М.М., Домашенко М.А. Дисфункция эндотелия при ишемических нарушениях мозгового кровообращения // Неврология. - 2008. - Т. 1, № 2. - С. 4-11.

11. Черток В.М., Коцюба А.Е. Эндотелиальный (интимальный) механизм регуляции мозговой гемодинамики: трансформация взглядов // Тихоокеанский медицинский журнал. - 2012. - № 2. - С. 17-26.

12. Шмырев В.И., Васильев А.С., Рудас М.С. Дисциркуляторная энцефалопатия – вопросы патогенеза, диагностики, дифференциальной диагностики и лечения на современном этапе // Кремлевская медицина. - 2009. - № 4. - С. 31-36.

13. Щербак Н.С., Галагудза М.М. Экспериментальные модели ишемического инсульта // Бюллетень Федерального центра сердца, крови и эндокринологии им. В.А. Алмазова. – 2011. - Июнь. - С. 39-46.

14. Chen H., Li G., Zhan P., Liu X. Ligustrazine derivatives. Part 5: design, synthesis and biological evaluation of novel ligustrazinyloxy-cinnamic acid derivatives as potent cardiovascular agents // Eur J Med Chem. - 2011. - Vol. 46 (11). - P. 5609-15.

15. Kim S.Y., Koo Y.K., Koo Jy et al. Platelet anti-aggregation activities of compounds from Cinnamomum cassia // J Med Food. – 2010. - Oct; 13 (5). - 1069-74.

16. Olsen F.J., Jørgensen P.G., Møgelvang R. Predicting Paroxysmal Atrial Fibrillation in Cerebrovascular Ischemia Using Tissue Doppler Imaging and Speckle Tracking Echocardiography // J Stroke Cerebrovasc Dis. – 2015. - Nov 2.

В последнее время в работах как отечественных, так и зарубежных ученых все более пристальное внимание стало уделяться нарушениям мозгового кровообращения (НМК) ишемического генеза. По всей видимости, это связано с высокой частотой развития данных патологий, а также с повышенным риском летального исхода и первичной инвалидизации. Кроме того, ишемические повреждения головного мозга имеют тенденцию к «омоложению» [4-6,16]. Все это делает НМК объектом пристального изучения фармакологов и клиницистов.

Повреждение головного мозга при его ишемии носит, как правило, многофакторный характер. Сюда можно отнести и снижение биоэнергетики головного мозга, развитие ацидоза, нарушение функции эксайтотоксических медиаторов, оксидативный стресс, гиперкоагуляцию, тромбообразование, воспаление и т.д. [12].

Многими авторами выделяется также и эдотелиальная дисфункция как одно из возможных патогенетических звеньев в развитии ишемии головного мозга [10,11]. Известно, что сосудистый эндотелий посредством секреции биологически активных веществ способен регуляторно воздействовать на процессы адгезии и агрегации тромбоцитов, про- и антикоагулянтное равновесие (антитромботическая функция эндотелия). При нарушении нормального функционального состояния сосудистого эндотелия происходит сдвиг в системе анти/проагреганты в сторону последних, что может повысить риск тромбообразования и усугубить течение заболевания [10,11,13]. Напротив, сохранение состояния сосудистого эндотелия в его физиологическом состоянии способно снизить число неблагоприятных последствий как в ишемическом, так и в постишемическом периоде [1]. Таким образом, актуальной становится проблема целенаправленного поиска биологически активных соединений, способных нормализовать функцию эндотелия мозговых сосудов на фоне его ишемии.

Целью данного исследования явилась сравнительная оценка действия мексидола, тиоктовой кислоты и ATACL на антитромботическую функцию эндотелия и некоторые показатели состава периферической крови экспериментальных животных на фоне фокальной ишемии головного мозга.

Материалы и методы. Данное исследование выполнено на 50 крысах-самцах линии Wistar массой 220-240 г, разделенных на 5 равных экспериментальных групп по 10 особей в каждой. Первую экспериментальную группу составили ложнооперированные животные. У четырех оставшихся групп животных воспроизводили ишемическое повреждение головного мозга (ГМ). Ишемию ГМ моделировали правосторонней окклюзией средней мозговой артерии (СМА) путем ее коагуляции под местом пересечения СМА с обонятельным трактом [1]. Исследуемые соединения вводились per os непосредственно после оперативного вмешательства и на протяжении 3 дней ишемического периода в дозах: мексидол («Фармасофт», Россия) – 30 мг/кг, тиоктовая кислота (октолипен, «Фармстандарт – Лексредства», Россия) – 50 мг/кг, ATACL - 100 мг/кг [7,8]. Группа крыс негативного контроля (НК, ОСМА) получала 0,9%-ный раствор хлористого натрия в эквиобъемном количестве. По истечении указанного временного периода проводили оценку состояния тромбоцитарного звена гемостаза, регистрацию процесса свертывания и некоторые показатели состава периферической крови.

Влияние исследуемых соединений на сосудисто-тромбоцитарный гемостаз оценивали регистрацией параметров процесса АДФ-индуцированной (5 мкМ) агрегации тромбоцитов. При этом определяли степень, скорость и показатель агрегации тромбоцитов. Процесс агрегации тромбоцитов регистрировали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации АЛАТ – 2 «БИОЛА» (НПФ «БИОЛА», Россия) методом определения относительного среднего размера агрегатов [2]. Также определяли уровень первичного предиктора нарушения нормального функционирования антитромботического потенциала сосудистого эндотелия - фактора фон Виллебранда, агглютинационным методом, с использованием реактивов НПО «РЕНАМ». Исследование процесса свертываемости крови проводили на коагулографе Н-334. По полученным коагулограммам определяли продолжительность процесса свертывания крови в секундах. Гематологические показатели (количество лейкоцитов - WBC, лейкоформула (Lymph#, Mon#, Gran#), количество эритроцитов – RBC, содержание гемоглобина – HGB, гематокрит – HCT, средний объем эритроцита – MCH, концентрация гемоглобина в одном эритроците – MCHC, содержание тромбоцитов – PLT) определяли на автоматическом гематологическом анализаторе ветеринарного использования BC 2800vet (Mindray).

Результаты опытов обрабатывали методом вариационной статистики с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 6.0 (StatSoft, Inc., США для операционной системы Windows). Вычисляли среднее значение и стандартную ошибку среднего значения (M±m). Полученные данные проверяли на нормальность распределения с использованием критерия Шапиро - Уилка. В случае нормального распределения данных для сравнения средних использовали t-критерий Стьюдента. При ненормальном распределении результатов эксперимента дальнейшую статистическую обработку данных проводили с использованием U-критерия Манна-Уитни.

Результаты и их обсуждение

У ложнооперированных животных степень агрегации тромбоцитов составляла 1,463±0,127 у.е. (рис. 1). В результате правосторонней окклюзии средней мозговой артерии у группы НК данный показатель увеличился на 97,9% (p<0,05). Применение мексидола и тиоктовой кислоты привело к снижению степени агрегации, относительно группы крыс негативного контроля, в 1,6 и 1,44 раза, тогда как на фоне введения ATACL данный параметр процесса агрегации тромбоцитов снизился, по сравнению с группой животных негативного контроля, в 1,74 (p<0,05) раза.

Рис. 1. Влияние исследуемых соединений на параметры процесса агрегации тромбоцитов: * - достоверно, относительно группы Л/О (p<0,05),

# - достоверно, относительно группы НК (p<0,05)

Аналогичная тенденция наблюдалась и при анализе скорости агрегации тромбоцитов. У крыс группы негативного контроля данный показатель составлял 3,806±0,694 у.е., в то время как у ложнооперированных животных значение скорости агрегации было 1,159±0,236 у.е. Таким образом, скорость агрегации при фокальной ишемии головного мозга возрастает в 3,3 раза (p<0,05) по сравнению с Л/О крысами. Из изучаемых соединений наиболее выраженное влияние на скорость агрегации тромбоцитов оказал мексидол (относительно группы животных негативного контроля данный показатель уменьшился на 147,9% (p<0,05)). Тиоктовая кислота и ATACL также способствовали снижению скорости агрегации, однако изменения (снижение относительно НК группы) данного параметра процесса агрегации были меньше, чем при применении мексидола, и составили 104,7% и 98% (p<0,05) соответственно. Следует также отметить следующее: у группы НК показатель агрегации тромбоцитов, по сравнению с ложнооперированными крысами, несколько увеличился, а именно на 6,6%, и при применении исследуемых соединений практически не претерпел существенных изменений (рис. 1).

При оценке влияния исследуемых соединений на уровень фактора фон Виллебранда (FW) установлено, что у группы НК данный показатель увеличился, по сравнению с Л/О группой, на 42,4% (p<0,001): с 82,6 до 117.8 у.е. В то же время пероральное введение мексидола и ATACL способствовало снижению уровня FW на 10 и 15% (p<0,02) соответственно. На фоне приема тиоктовой кислоты уровень фактора фон Виллебранда практически не отличался от такового у группы крыс негативного контроля (рис. 2).

Рис. 2. Влияние исследуемых соединений на уровень фактора фон Виллебранда:

* - достоверно, относительно группы Л/О (p<0,001),

# - достоверно, относительно группы НК (p<0,02)

В результате анализа продолжительности свертывания крови установлено, что у группы Л/О она составляла 109,7±9,195 сек. У группы ОСМА данный показатель уменьшился в 1,52 (p<0,02) раза. Применение мексидола и тиоктовой кислоты значимого влияния на процесс свертывания крови не оказало, и как результат данный показатель практически не отличался от значения группы НК. Пероральное введение ATACL оказало положительное влияние на продолжительность свертывания крови, что отразилось в увеличении данного показателя на 32,9 сек (относительно группы НК) до значения 105±12,349 сек, т.о., при приеме 4-гидрокси-3,5-дитретбутил коричной кислоты продолжительность свертывания крови практически достигла значения ложнооперированной группы крыс.

Рассматривая некоторые показатели состава периферической крови экспериментальных животных, следует отметить повышение содержания лейкоцитов у группы крыс негативного контроля на 35,1% (p<0,05) по сравнению с Л/О группой животных. При этом наблюдалось значительное увеличение отдельных фракций лейкоцитов: содержание лимфоцитов - на 32,6% (p<0,05), гранулоцитов – на 41,7%, моноцитов – на 23,1% (таблица). Также у группы НК относительно ложнооперированных крыс отмечено снижение гемоглобина на 8,5% (p<0,05) [3]. Остальные анализируемые показатели состава периферической крови экспериментальных животных существенных изменений не претерпели.

На фоне приема исследуемых соединений как общий уровень лейкоцитов, так и уровень их отдельных фракций существенно снизился (по сравнению с НК группой). При введении мескидола и тиоктовой кислоты содержание лейкоцитов снизилось на 62,2% и 35,4%, по сравнению с группой крыс негативного контроля, в то время как введение ATACL способствовало снижению данного показателя на 61,3%. Кроме того, применение ATACL нормализовало содержание гемоглобина (статистически значимых отличий между группами животных, получавших ATACL, и ложнооперированными крысами не наблюдалось), в то время как при применении мексидола и тиоктовой кислоты, относительно Л/О животных, данный показатель существенно снизился (таблица). Также необходимо отметить снижение количества тромбоцитов при пероральном введении мексидола и тиоктовой кислоты на 15,9 и 16% соответственно (относительно Л/О группы крыс), чего не наблюдалось при применении 4-гидрокси-3,5-дитретбутил коричной кислоты.

Изменение состава периферической крови на фоне фокальной ишемии ГМ и при применении исследуемых соединений

Примечание: * - достоверно относительно группы Л/О (p<0,05).

Подобные изменения, наблюдаемые при фокальной ишемии головного мозга, вероятно, связаны со сниженной продукцией сосудистым эндотелием антиагрегантных факторов, в частности простациклина, снижением биодоступности эндогенного оксида азота, повышенным выбросом тромбоксана А2 и тканевого тромбопластина, повышается также уровень FW, в результате чего происходит активация тромбоцитов, что влечет за собой повышение тромбогенного потенциала крови и, как следствие, может привести к развитию синдрома гиперкоагуляции. Повышение количества лейкоцитов в периферической крови, по всей видимости, связано с развитием воспалительной реакции с повышенной продукцией провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8) [9,12].

Исследуемые соединения: мексидол, тиоктовая кислота и ATACL, по всей видимости, способны в условиях ишемии ГМ снижать биодеградацию оксида азота и повышать экспрессию эндотелиальной изоформы NO-синтазы; также, вероятно, имеет место снижение неблагоприятных отсроченных эффектов iNOS за счет инактивации образующегося пероксонитрита [7,8,14,15]. В результате может происходит нормализация функционального состояния эндотелиоцитов мозговых сосудов с восстановлением продукции эндотелиальных антитромбогенных факторов и снижением выброса проагрегантных соединений, что предполагает наличие у изучаемых веществ эндотелиопротекторной активности.

Выводы:

1. Правосторонняя окклюзия средней мозговой артерии приводит к нарушению антитромботической функции эндотелия мозговых сосудов, сопровождаемому повышением степени (в 3,3 раза (p<0,05) по сравнению с Л/О крысами), скорости и показателя агрегации тромбоцитов, уровня фактора фон Виллебранда (на 42,4% (p<0,001)), продолжительности свертывания крови, содержанием гемоглобина и умеренным лейкоцитозом.

2. Применение исследуемых соединений способствовало нормализации антитромботической функции эндотелия и состава периферической крови. При этом наиболее выраженный эффект наблюдается на фоне введения 4-гидрокси-3,5-дитретбутилкоричной кислоты.

Библиографическая ссылка