Исходя из вышеизложенного, изучение влияния иммунотропных препаратов, в частности циклоферона, который обуславливает стимуляцию выработки эндогенного интерферона, модулирует уровень программмированной клеточной гибели [1; 6], в сочетании с антиоксидантом α-токоферол-ацетатом на проявление стрессорных реакций в онтогенезе является весьма актуальным.
Цель. Целью исследования явилось изучение динамики свободнорадикальных процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме крови: конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) при стрессогенном воздействии и при фармакологической коррекции (введение α-токоферол-ацетата, циклоферона) у половозрелых и старых крыс.
Материалы и методы
В эксперименте было использовано 128 белых беспородных крыс-самцов - половозрелых (10 мес.) и старых (30 мес.). Животных содержали в стандартных условиях вивария при естественном световом освещении и свободном доступе к воде и пище.
В опыте использованы следующие группы.
1. Интактные крысы (контроль): 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).
2. Крысы, получавшие масляный 10%-ный раствор α-токоферол-ацетата per os, в течение двух недель, в дозе 0,5 мг на 100 г массы тела; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).
3. Крысы, получавшие циклоферон (Полисан СПб) per os, в течение двух недель, в дозе 0,77 мг на 100 г массы тела - 10-месячным и 1,19 мг на 100 г массы тела - 30-месячным; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).
4. Крысы, получавшие совместно 10%-ный масляный раствор α-токоферол-ацетата (0,5 мг на 100 г) и циклоферон per os (0,77 мг на 100 г массы тела - 10-месячным и 1,19 мг на 100 г массы тела - 30-месячным) в течение двух недель; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).
5. Крысы, подвергшиеся иммобилизационному стрессу в пластиковых цилиндрах по 1 часу в день в течение двух недель; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).
6. Стрессированные крысы, получавшие предварительно 10%-ный масляный раствор α-токоферол-ацетата в тех же дозах в течение двух недель; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).
7. Стрессированные крысы, получавшие предварительно циклоферон в тех же дозах в течение двух недель; 10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).
8. Стрессированные крысы, получавшие предварительно раствор α-токоферол-ацетата и циклоферон тех же дозах в течение двух недель;10 мес. (n = 8), 30 мес. (n = 8).
Выведение животных из эксперимента проводили методом быстрой декапитации через сутки после окончания воздействия.
Определение уровня свободнорадикального окисления липидов в плазме крови
Для оценки уровня ПОЛ у животных контрольной и опытных
групп определяли исходную концентрацию вторичного продукта ПОЛ - МДА в плазме
крови тиобарбитуровым методом [3]. При декапитации животных кровь собирали и
центрифугировали при 3000 об/мин. в течение 15 минут, выделяли плазму. В
дальнейшем определяли уровень конечного продукта ПОЛ - МДА с помощью набора
реактивов для определения активных продуктов ТБК в плазме крови фирмы «Агат».
Оптическую плотность опытной пробы измеряли против холостой пробы при двух
длинах волн: 535 и 570 нм в кювете с толщиной слоя 1 см, на цифровом
спектрофотометре APEL PD-303 UV. Полученные данные рассчитывали по формуле: , где: С - содержание ТБК-активных продуктов в опытной
пробе мкмоль/л; D535 - оптическая
плотность опытной пробы при 535 нм; D570 - оптическая
плотность опытной пробы при 570 нм; 0,156 - коэффициент молярной экстинции
комплекса МДА - ТБК в л/мкмоль/см; 16 - коэффициент разведения сыворотки.
Высчитывали среднюю величину содержания ТБК - активных продуктов на одного животного и далее на группу.
Полученные экспериментальные данные обработаны с использованием пакета статистических программ Microsoft Excel. Сравнение средних показателей производили с помощью стандартных методов вариационной статистики. Различия в показателях считались статистически значимыми при уровне р < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Исследование процессов ПОЛ в плазме крови выявило изменения содержания МДА у экспериментальных половозрелых и старых крыс (табл. 1, 2).
Таблица 1
Показатели конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) в плазме крови половозрелых крыс
|
Группы животных |
Количество МДА, мкмоль/л |
1 |
Контроль |
1,21 +/- 0,11 |
2 |
Токоферол |
0,83 +/- 0,14** |
3 |
Циклоферон |
0,91 +/- 0,18** |
4 |
Токоферол + Циклоферон |
0,74 +/- 0,16** |
5 |
Стресс |
1,98 +/- 0,21*** |
6 |
Стресс + Токоферол |
0,98 +/- 0,021*000 |
7 |
Стресс + Циклоферон |
1,12 +/- 0,16000 |
8 |
Стресс + Токоферол + Циклоферон |
1,08+/- 0,18*000 |
Примечание. Статистическая значимость с группой «Контроль»: * - p < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p < 0,001.
Статистическая значимость с группой «Стресс»: 0-p < 0,05; 00 -p < 0,01; 000 - p < 0,001.
Таблица 2
Показатели конечного продукта ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) в плазме крови старых крыс
|
Группы животных |
Количество МДА, мкмоль/л |
1 |
Контроль |
1,94 +/- 0,12 |
2 |
Токоферол |
1,43 +/- 0,08*** |
3 |
Циклоферон |
1,43 +/- 0,09*** |
4 |
Токоферол + Циклоферон |
1,44 +/- 0,06*** |
5 |
Стресс |
3,79 +/- 0,1*** |
6 |
Стресс + Токоферол |
1,64 +/- 0,09*000 |
7 |
Стресс + Циклоферон |
1,56 +/- 0,14*000 |
8 |
Стресс + Токоферол + Циклоферон |
1,61 +/- 0,12*000 |
Примечание. Статистическая значимость с группой «Контроль»: * - p < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p < 0,001.
Статистическая значимость с группой «Стресс»: 0-p < 0,05; 00 -p < 0,01; 000 - p < 0,001.
У половозрелых крыс, находящихся в покое, α-токоферол-ацетат снизил показатели МДА на 30,8%, а в сочетании с циклофероном на 38,3%. У старых же крыс фармакологическая коррекция в трех группах снизила МДА в среднем на 26%.
Выраженная активация ПОЛ наблюдалась у крыс, подвергнутых иммобилизационному стрессу: у половозрелых крыс количество МДА увеличилось на 65,1%, а у старых на 95,4%, что свидетельствует о снижении адаптационных процессов у животных данной группы, связанном с накоплением антиоксидантов (табл. 3).
Коррекция фармакологическими препаратами стрессированных животных показала значительное изменение количества МДА по сравнению с группой «Стресс» (табл. 4).
Таблица 3
Изменение содержания малонового диальдегида в плазме крови крыс по сравнению с группой «Контроль»
Опытные Группы
показатели |
α-токоферол (в покое) |
Циклоферон (в покое) |
α-токоферол + Циклоферон (в покое) |
Стресс |
||||
10 мес. |
30 мес. |
10 мес. |
30 мес. |
10 мес. |
30 мес. |
10 мес. |
30 мес. |
|
МДА |
↓ на 30,8% |
↓ на 26,3% |
↓ на 24,2% |
↓ на 26,3% |
↓ на 38,3% |
↓ на 26,1% |
↑ на 65,1% |
↑ на 95,4% |
Таблица 4
Изменение содержания малонового диальдегида в плазме крови крыс по сравнению с группой «Стресс» и по сравнению с группой «Контроль»
Опытные группы
показатели |
Стресс |
α-токоферол-ацетат |
Циклоферон |
α-токоферол-ацетат + Циклоферон |
||||
10 мес. |
30 мес. |
10 мес. |
30 мес. |
10 мес. |
30 мес. |
10 мес. |
30 мес. |
|
МДА по сравн. с гр. «Стресс» |
↑ на 51% |
↑ на 118,6% |
↓ на 24% |
↓ на 34% |
↓ на 25% |
↓ на 30% |
↓ на 32,5% |
↓ на 39,4% |
МДА по сравн. с гр. «Контроль» |
↑ на 32% |
↑ на 186% |
↓ на 20,5% |
↓ на 58% |
↓ на 22% |
↓ на 47% |
↓ на 33% |
↓ на 59,7% |
У 30-мес. крыс выраженный стресс-коррегирующий эффект был отмечен при введении циклоферона, а также при комплексном введении α-токоферол-ацетата с циклофероном - до 58%. У молодых крыс введение α-токоферол-ацетата оказало ожидаемое антиоксидантное действие и привело к достоверному снижению МДА на 50,5% по сравнению со стрессированной группой, и на 18% по сравнению с контролем. Комбинация препаратов (α-токоферол-ацетата с циклофероном) снизила МДА соответственно на 45,5% и на 10% (табл. 3, 4).
Заключение
Результаты наших исследований отражают уровень свободнорадикальных процессов, интенсивность которых увеличивается при старении и стрессовых воздействиях и коррегируется фармакологическими препаратами - антиоксидантами, иммуномодуляторами. Иммобилизационный стресс старых крыс привел к значительному увеличению количества МДА в плазме крови - на 95%, по сравнению с крысами, находящимися в покое, что на 31,7% превышает данный показатель у молодых крыс. Нивелирующая активность препаратов трех групп была отмечена у крыс всех изученных возрастов, но особенно выражена у старых животных.
Таким образом, сравнение показателей перекисного окисления липидов позволяет рекомендовать для коррекции отрицательного влияния стресса применять комбинацию иммуномодулятора и антиоксиданта.
Рецензенты:Зурнаджан С.А., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой оперативной хирургии и топографической анатомии ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Астрахань;
Горст В.Р., д.б.н., профессор кафедры нормальной физиологии ГБОУ ВПО «Астраханский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Астрахань.
Библиографическая ссылка
Хужахметова Л.К., Сентюрова Л.Г. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ У СТРЕССИРОВАННЫХ ПОЛОВОЗРЕЛЫХ И СТАРЫХ КРЫС // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 6. ;URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=23106 (дата обращения: 14.02.2025).