Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Зборовский А.Б. 1 Бедина С.А. 1 Мозговая Е.Э. 1 Королик О.Д. 2 Мартемьянов В.Ф. 1

---

1 ФГБНУ «Научно-исследовательский институт клинической и экспериментальной ревматологии»

2 ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

В лизатах лимфоцитов 48 больных подагрическим артритом определена активность семи ферментов пуринового метаболизма (ПМ): аденозиндезаминазы (АДА), АМФ-дезаминазы (АМФДА), адениндезаминазы (АД), гуаниндезаминазы (ГДА), гуанозиндезамназы (ГЗДА), пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) и гуанозинфосфорилазы (ГФ). Проведенные исследования показали, что у больных ПА по сравнению со здоровымив лимфоцитах выше активность АМФДА, АД, ГДА и ПНФ, ниже активность АДА, ГФ и ГЗДА. Выявлены существенные изменения активности ферментов, зависящие от клинических особенностей заболевания: формы, тяжести течения, стадии поражения суставов, наличия тофусов и поражения почек. Чем тяжелее течение заболевания, тем в лимфоцитах выше активность АМФДА, АД, ГДА, ПНФ и ниже активность АДА, ГЗДА и ГФ. Предложена гипотеза участия ферментов ПМ в патогенезе подагрического артрита.

Статья в формате PDF

141 KB

подагрический артрит

аденозиндезаминаза

АМФ-дезаминаза

адениндезаминаза

гуаниндезаминаза

гуанозиндезамназа

гуанозинфосфорилаза пуриннуклеозидфосфорилаза

пуриновый метаболизм

1. Барскова В.Г., Елисеев М.С. Современные принципы диагностики и лечения подагры // Русский медицинский журнал. – 2007. – Т. 15, № 26. – С. 1984-1986.

2. Болезни суставов: руководство для врачей / под ред. В.И. Мазурова. – СПб.: Спецлит, 2008. – 397 с.

3. Девятаева Н.М. Клинико-диагностическое значение исследования активности 5'-нуклеотидазы, АМФ-дезаминазы, адениндезаминазы, аденозиндезаминазы в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных системной красной волчанкой: дис. ... канд. мед. наук. – Волгоград, 2005. – 226 с.

4. Кукушкина Е.В. Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимовгуаниловой ветви пуринового метаболизма в лизатах лимфоцитов, эритроцитов и плазме крови больных ревматоидным артритом: дис. ... канд. мед. наук. – Волгоград, 2010. – 236 с.

5. Мартемьянов В.Ф., Зборовский А.Б., Стажаров М.Ю., Бедина С.А., Мозговая Е.Э., Черных Т.П. Активность энзимов пуринового метаболизма при ревматоидном артрите, остеоартрозе и подагре // Вестник Волгоградской медицинской академии. – 2000. – Т. 56, № 6. – С. 104-107.

6. Стажаров М.Ю. Клинико-патогенетическое значение исследования активности энзимов пуринового метаболизма и антиоксидантной системы крови больных ревматоидным артритом, остеоартрозом и подагрой: дис. ... канд. мед. наук. – Волгоград, 1998. – 220 с.

7. Boyum A. Isolation of mononuclear cells and granulocytes from human blood // Scand.I. Clin. Lab. Invest. – 1968. – Vol. 21. – Suppl. 97 (Paper IV) — P. 77-89.

8. Kelley W.N. mechanisms of purine overproduction in man // Fortshr. Urol. und Nephrol. – 1980. – Vol. 16. – P. 19-24.

9. Postmatur R., Wang K.K., Nath R., Gildbertsen R.B. A purine nucleoside phosphorylase inhibitor induced apoptosis via caspase-3-like protease activity in MOLT-4 T-cells // Immunopharmacology. – 1997. – Vol. 37. – № 2-3 – P. 19-24.

10. Wallase S.L., Robinson H., Masi A.T. et al. Preliminary criteria for the classification of the acute arthritis of primary gout // Arthr. Reum. – 1977. – Vol. 20. – P. 895.

Цель исследования

Выявление особенностей активности АДА, АМФДА, АД, ГДА, ГЗДА, ПНФ и ГФ в лизатах лимфоцитов больных подагрическим артритом (ПА) в зависимости от клинических проявлений заболевания.

Материал и методы

Под наблюдением находились 48 больных ПА, из которых 46 (95,8 %) мужчин и 2 (4,2 %) женщины. Диагностика ПА проводилась на основе критериев, рекомендованных Всемирной организацией здравоохранения [10]. Средний возраст больных (M±m) - 47,5±0,95 лет. Длительность болезни составила 6,23±0,47 лет. Интермиттирующий ПА (интер. ПА) наблюдался у 19 (39,6 %) больных, хронический (хрон. ПА) - у 29 (60,4 %) больных. Легкое течение болезни у 18 (37,5 %), течение средней тяжести - у 30 (62,5 %) больных, наличие тофусов - у всех больных с хрон. ПА. I стадия поражения суставов выявлена у 19 (39,6 %), II стадия - у 29 (60,4 %) больных, моно-олигоартрит - у 20 (41,7 %) больных. Различные поражения почек наблюдались у 20 (41,7 %) больных, и только у больных с хрон. ПА.

В лечении больных ПА с острым приступом боли применялись внутримышечные инъекции вольтарена (75 мг.), метипреда 4 % - 2,0 мл., дипроспана - 1 мл. В лечении хронического ПА использовались: аллопуринол 100-300 мг., антуран - 0,3-0,4 г., бензобромарон 0,05-0,1 г., алломарон - 1-3 таб. в сутки, мази с нестероидными противовоспалительными средствами, компрессы с 50 % димексидом  и анальгином,         стол №6.

Лимфоциты из венозной крови выделяли по методике, предложенной Boyum [7] с использованием лимфосепа с плотностью 1,077-1,079 г/мл. Лизаты лимфоцитов готовили путем трехкратного замораживания-оттаивания. Активность ферментов определяли по оригинальным методикам, описанным в работах Девятаевой Н.М. [3] и Кукушкиной Е.В. [4]. Активность ферментов выражали в нмоль/мин/мл., содержащим 1×10⁷ клеток (до лизиса). Статистическая обработка данных проводилась с использованием программы «STATISTICA 6.0» с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (m), стандартного отклонения средней (σ). Достоверность различий считалась при р <0,05.

Результаты исследований и их обсуждение

По сравнению со здоровыми у больных ПА в лизатах лимфоцитов при поступлении на лечение (табл. 1) выше активность АМФДА, АД, ГДА иПНФ, ниже активность АДА, ГФ и ГЗДА (все р<0,001). Если же учитывать не среднестатистические величины активности ферментов, а индивидуальные энзимные показатели, выходящие за пределы условной нормы, рассчитанной по формуле: M±2σ, то оказалось, что в лимфоцитах за верхние пределы нормы активность АМФДА выходила в 62,5 % случаев, АД - в 72,9 %, ГДА - в 68,8 %, ПНФ - в 64,6 % случаев, за нижние границы - активность АДА - в 85,4 %, ГЗДА - в 20,8 % и ГФ - в 58,3 % случаев.  У этих же больных за пределы нормы показатели СОЭ и СРБ выходили в 58,3 % случаев, сиаловых кислот - в 60,4 % случаев.

Через 7-8 дней на фоне некоторого улучшения клинического состояния больных в лизатах лимфоцитов снизилась активность ПНФ (р<0,01), АМФДА, АД, ГДА (все р<0,05), повысились ранее сниженные активности ГФ (р<0,001), АДА и ГЗДА (р<0,01).

По окончании курса стационарного лечения по сравнению с начальным этапом в лимфоцитах снизилась активность АМФДА, АД, ГДА, ПНФ, повысились ранее сниженные активности АДА, ГЗДА и ГФ (все р<0,001). Если же сравнивать энзимные показатели больных перед выпиской из стационара с аналогичными показателями здоровых лиц, то оказалось, что показатели активности АД, ГЗДА и ГФ не имели отличий от здоровых,  но активность АДА так и осталась сниженной (р<0,001), а активность ПНФ (р<0,001), ГДА  (р<0,01) повышенной. Содержание МК в плазме крови за период стационарного лечения снизилось (р<0,001), но так и осталось повышенным (р<0,001).

У больных с интер. ПА по сравнению с хрон. ПА в лимфоцитах (табл. 1) выше активность АДА, ГЗДА, ГФ, ниже активность АМФДА, АД, ГДА, ПНФ и содержание МК (все р<0,001). И если у больных с интер. ПА за верхние границы нормы выходят показатели активности АМФДА в 10,5 % случаев, АД - в 36,8 %, ГДА и ПНФ - в 21,1 % случаев, а за нижние пределы - активность АДА в 63,2 %, ГФ - в 15,8 % случаев, то у больных с хрон. ПА за верхние границы нормы выходят показатели активности ПНФ в 93,1 % случаев, АМФДА и АД - в 96,6 %, ГДА - в 100 % случаев, за нижние границы - показатели активности ГЗДА в 34,5 %, ГФ - в 86,2% и АДА - в 100 % случаев. Из приведенных данных видно, что изменения активности всех ферментов у больных с хрон. ПА значительно более выражены в количественном аспекте, чем у больных с интер. ПА. Кроме того, можно отметить, что ни у одного больного с интер. ПА активность ГЗДА не выходит за границы нормы, а у больных с хрон. ПА в 34,5 % случаев активность ГЗДА выходит за нижние пределы нормы, и данный ферментный тест может служить маркером хронизации процесса при подагре.

У больных с моно-олигоартритом по сравнению с больными с полиартритом (табл. 1) выше активность АДА, ГЗДА, ГФ, больше МК, ниже активность АМФДА, АД, ГДА и ПНФ (все р<0,001).

У больных с I стадией поражения суставов по сравнению с больными с II стадией (табл. 1) ниже активность АМФДА, АД, ГДА, ПНФ, содержание МК, выше активность АДА, ГЗДА и ГФ (все р<0,001).

У больных ПА с наличием тофусов по сравнению с больными без тофусов (табл. 1) выше активность АМФДА, АД, ГДА, ПНФ, содержание МК, ниже активность АДА, ГЗДА и ГФ (все р<0,001).

У больных ПА с поражением почек по сравнению с больными без поражения почек (табл. 1) ниже активность АДА, ГЗДА, ГФ, выше активность АМФДА, АД, ГДА, ПНФ  и содержание МК (все р<0,001).

У больных ПА с легким течение болезни по сравнению с больными с течением болезни средней тяжести (табл. 1) выше активность АДА, ГЗДА, ГФ, ниже активность ГДА, ПНФ, АМФДА, АД и содержание МК (все р<0,001).

Проведенные исследования показали, что активность изученных ферментов существенно зависит от клинических особенностей заболевания, и по результатам исследований можно выявить некоторые закономерности: наиболее высокие активности АМФДА, АД, ГДА и ПНФ и наиболее низкие активности АДА, ГЗДА и ГФ наблюдаются у больных ПА с хроническим течением, наличием тофусов и поражением почек. Кроме того, анализ индивидуальных энзимных показателей свидетельствует, что величины активности некоторых ферментов могут иметь прогностическое значение: сниженная активность ГЗДА может свидетельствовать о хронизации ПА, а активность (в нмоль/мин/мл) АДА<30, АД>2,9, ГДА>14,4 и ПНФ>47,5 о наличии поражения почек даже при отсутствии клинических проявлений. Период начинающейся клинической ремиссии ассоциируется с нормализацией активности АД, ГЗДА и ГФ.

Таблица 1

Активность ферментов в лизатах лимфоцитов и содержание МК в плазме крови у больных подагрой

С биохимических позиций АДА и ПНФ являются ключевыми ферментами ПМ, обеспечивающими катаболизм пуриновых нуклеозидов: аденозина и гуанозина до конечного продукта - мочевой кислоты, уровень которой повышен в крови больных подагрой[6]. Результаты наших исследований показывают, что у больных ПА в лимфоцитах активность АДА снижена, а ПНФ - повышена, из чего следует, что при катаболизме пуриновых производных преобладает гуанозиновый путь на фоне сниженного аденозинового направления. При дефиците АДА возможно накопление в лимфоцитах его естественного субстрата - аденозина, что по данным литературы может существенно повлиять на функциональные свойства лимфоцитов, нарушить процессы их пролиферации, дифференциации, синтез ДНК, стимулировать активность аденилатциклазы, вести к накоплению циклического аденозинмонофосфата, гиперпродукции опухолевого некротизирующего фактора-альфа и других провоспалительных цитокинов, оказывать цитотоксический эффект на Т-лимфоциты и нарушать процессы иммунной регуляции [8, 9].

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют, что в патогенетических механизмах, помимо общепризнанных генетических факторов, принимают участие как метаболические, так и иммунологические факторы.

В лечении подагры используются ингибиторы КО, препятствующие повышенному образованию МК из ксантина и гипоксантина. Положительный эффект от этих препаратов несомненен, но в случаях их передозировки возможно накопление субстратов КО-реакции: ксантина и гипоксантина и инициировать новую патологию, связанную с накоплением в крови ксантина. Результаты наших исследований свидетельствуют о наличии у больных ПА повышенной активности ГДА и АД и вследствие этого гиперпродукции ксантина и гипоксантина. Исходя из этого, логично предположить новые подходы в лечении ПА, основанные на ингибиции активности АД и ГДА, что предотвратит избыточную продукцию ксантина и гипоксантина, и ингибирование активности КО не станет необходимым. Возможны и другие подходы в лечении больных ПА, основанные на снижении скорости катаболических реакций ПМ и ингибиции активности ферментов на более ранних этапах пуринового цикла.

Таким образом, результаты проведенных исследований активности ферментов пуринового метаболизма в лизатах лимфоцитов больных ПА расширяют и углубляют наши познания о патогенетических механизмах заболевания и способствуют выработке новых патогенетических подходов в лечении больных ПА.

Выводы

1. В лизатах лимфоцитов больных ПА выявлены существенные изменения активности ферментов ПМ, зависящие от клинических особенностей заболевания.
2. Чем тяжелее течение заболевания, тем в лимфоцитах выше активность АМФДА, АД, ГДА, ПНФ и ниже активность АДА, ГЗДА и ГФ.
3. Исследования активности ферментов в процессе лечения способствуют объективизации оценки эффективности проводимой терапии.
4. Выявленные нарушения энзимной регуляции ПМ способствуют выработке новых альтернативных патогенетических подходов в лечении больных подагрой.

Рецензенты:

Александров А.В., д.м.н., зав. лабораторией функциональных методов исследования, ультразвуковой диагностики и восстановительной терапии ФГБУ «НИИ КиЭР»  РАМН, г. Волгоград;

Заводовский Б.В., д.м.н., профессор, зав. лабораторией методов лечения и профилактики заболеваний суставов ФГБУ «НИИ КиЭР»  РАМН,  г. Волгоград.

Библиографическая ссылка