Е.В.Уварова и соавт. (2006) считают, что характерным отличием вагинальной микрофлоры здоровой девочки препубертатного возраста от таковой пубертатного являются: отсутствие лактобактерий, преобладание бифидобактерий – до 84% [1], низкая обсемененность влагалищного содержимого микробами – в среднем 104-105 КОЕ/мл, большее содержание кокковой флоры – стафило- и стрептококки до 78%. При микробиологическом и бактериологическом исследовании во влагалище определяются более 20 видов микроорганизмов при низкой общей микробной обсемененности (103-105 КОЕ/мл). Притом микроорганизмы сосуществуют в виде ассоциаций из 4-5 видов. В составе микроорганизмов доминируют бифидобактерии (84,2%). Лактобациллы в умеренном количестве появляются в возрасте после 8 лет. Среди факультативных анаэробов превалируют коагулазоотрицательные стафилококки (78,9%), стрептококки (78,9%) и коринебактерии (63,2%). Авторы отмечают низкое содержание строгих анаэробов (26,3% бактероидов и пептострептококков), других факультативных анаэробов (по 10,5% энтерококков и кишечной палочки), гарднерелл (10,5%) и микоплазм (5,3%).
Противоречивый характер исследований, проведенных по изучению влагалищной микробиоты у девочек препубертатного возраста связан как в норме, так и при дисбиозе в связи со сложностями диагностики [17].
Квалифицированное комплексное лабораторное обследование, полное выявление этиологической структуры заболевания позволяет своевременно устанавливать топический клинический диагноз, выявлять осложненные формы течения заболевания, и, соответственно, проводить направленную адекватную этиотропную терапию, в соответствии с принципом «необходимости и достаточности». В этой связи, в качестве скринингового метода диагностики состава биоты урогенитального тракта женщин предложена комплексная количественная оценка биоты методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с проведением сравнительного анализа конкретных представителей нормо- и условно-патогенной биоты с общим количеством микроорганизмов с целью выявления дисбаланса биоты, степени его выраженности и определения этиологической роли конкретных микроорганизмов в его развитии при условии контроля качества получения клинического образца для исследования [3]. Нами предложено использование этой методики оценки вагинальной микробиоты у девочек. Данный метод позволяет количественное определение такого условно-патогенного организма вагинальной микробиоты как Atopobium vaginae.
Слово «Atopobium», означающее по-гречески "странно живущее существо", был использован M.D. Collins, S. Wallbanks для описания нового бактериального рода в 1992 г., который переквалифицировал Lactobacillus Minutum, Lactobacillus rimae и Streptococcus parvulus на основе их филогенетического родства, установленного при секвенировании гена 16S рРНК [7]. Виды Atopobium – грамположительные, анаэробные, неподвижные, неспорообразующие, эллиптические кокки или палочки, которые производят большое количество молочной кислоты [9, 15]. Бактерии этого рода встречаются в десневых щелях человека и были описаны при различных инфекционных поражениях, в том числе при стоматологических абсцессах, брюшных раневых инфекциях, абсцессах малого таза и бактериемии, а также как причина преждевременных родов и спонтанной родовой бактериемии [5, 10, 13, 14, 16].
В настоящее время установлено, что род состоит из пяти видов: A. rimae, А. parvulus, А. minutum, А. fossor, А. vaginae [5, 7, 18]. А. vaginae впервые был выделен из вагинальной флоры здоровой женщины в 1999 году [9]. Впоследствии бактерию также обнаруживали у пациентов с бактериальным вагинозом, как правило, сосуществующую с другими анаэробными бактериями, такими как G. vaginalis [8, 10, 19] и считают одной из основных бактерий, ассоциированных с бактериальным вагинозом у женщин. Интересно, что среди бактерий, ассоциированных с бактериальным вагинозом у женщин, только G. vaginalis и А. vaginae были широко обнаружены у сексуально-неэкспонированных женщин [4]. Считается, что количественное определение А. vaginae особенно полезно при наиболее тяжелых случаях бактериального вагиноза [11], так как этот микроорганизм не отвечает на традиционную антианаэробную терапию метронидазолом.
Процесс, который изменяет относительно редкую вагинальную микрофлору здоровых женщин в плотную биопленку патогенных и условно-патогенных бактерий, мало изучен. Однако, проведенные экспериментальные исследования показали, что уропатогенные кишечные палочки формируют относительно тонкие биопленки в течение пяти дней (высостой 6 мкм), в то время как А. vaginae и G. vaginalis формируют биопленки толщиной 12 мкм в высоту в течение двух дней. Применение метронидазола приводит к формипррванию отверстий во влагалищных биопленках с А. vaginae и G. vaginalis, но не искореняет эти микроорганизмы [12].
В связи с тем, что процесс идентификации А. vaginae затруднен при проведении традиционных методик выявления вагинальных бактерий, особенно в присутствии сосуществующих колонизирующих организмов, частота колонизации и инфицирование женских половых органов А. vaginae была, вероятно, недооценена в прошлом. В доступной литературе мы не нашли сведений о А. vaginae в микробиоте девочек, в том числе препубертатного возраста.
Целью исследования стало изучение места и роли А. vaginae в составе микробиоты влагалища у девочек препубертатного возраста как в норме, так и при наличии вагинального дисбиоза на современном этапе.
Материал методы исследования
Под наблюдением находилось 174 девочки в препубертатном периоде, которые были поразделены на две группы : основную группу О (n=134) с наличием дисбиоза влагалища различной степени, и контрольную группу К, представленную 40 девочками с нормальным влагалищным микробиоценозом и отсутствием каких-либо клинических проявлений вагинита. Критериями отбора были: возраст от 5 до 13 лет; отсутствие менструаций; отсутствие хламидиоза, трихомониаза, гонореи, сифилиса, ВИЧ, гепатита В, эндокринных заболеваний.
Исследование спектра влагалищной микробиоты проводили при помощи комплексной количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени при помощи тест-системы «Фемофлор-16» (ДНК-технологии, Россия) в сертифицированной лаборатории ООО «Надия» (Украина).
Материалом для исследования методом комплексной количественной ПЦР был соскоб эпителиальных клеток, который забирался одноразовыми стерильными инструментами типа «Cytobrush» из заднего свода влагалища через гименальные кольца. С помощью комплексной количественной ПЦР оценивали: общую бактериальную массу (ОБМ), количество Lactobacterium spp. (ЛБ), количество условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) (факультативных и облигатных аэробов), Candida spp., а также патогенного возбудителя Mycoplasma genitalium. Результаты микробиологического исследования оценивались по референсным нормам для тест-системы «Фемофлор-16» [4]. Рассчитывали абсолютные (в логарифмах полученных показателей ОБМ и УПМ (Lg10ОБМ и Lg10УПМ) показатели и частоту встречаемости микроорганизмов.
Статистическая обработка данных проводилась при помощи компьютерного программного пакета Excel.
Результаты исследования и их обсуждение
Средний возраст девочек в группе О составил 8,93±0,24 лет, в группе К – 8,75±0.34 лет, p>0,05. В основной группе избыточные или патологические выделения из половых путей наблюдались у 56,72% пациенток, а в контроле только 6,15% девочек имели выделения из половых путей в виде незначительных белей, p<0,01.
При анализе вагинальной микробиоты было установлено, что в основной группе ОБМ была больше по сравнению с контролем в 1,22 раза (Lg10ОБМ: 4,86±0,10 против 3,98±0,07, p<0,01) (рис.1). ЛБ определялись у 7,50% девочек группы К (рис.2), при этом количественный показатель варьировал от 102,2 до 104,1 КОЕ и в среднем Lg10ЛБ составил 0,23±0,13. В группе О лактобактерии были обнаружены у 8,96%, при этом Lg10ЛБ в среднем был 0,28±0,08 (p>0,05).
Рис. 1 Абсолютное содержание ОБМ, ЛБ, Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., А. vaginae в вагинальной микробиоте обследованных девочек препубертатного возраста, M±m (в Lg10).
Примечание. к – достоверная разница с показателем группы К (p<0,05).
Рис. 2 Частота встречаемости ЛБ, Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., А. vaginae и сочетания Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp. и А. vaginae в вагинальной микробиоте обследованных девочек препубертатного возраста (в %).
Примечание. к – достоверная разница с показателем группы К (p<0,05).
Среди девочек с вагинальным дисбиозом по сравнению с пациентками контрольной группы А. vaginae в вагинальной микробиоте регистрировался чаще в 5,47 (р<0,01) раза (см. рис. 2), а количественное его содержание было выше в 6,73 (p<0,01) (см. рис. 1).
Среди девочек с наличием А. vaginae в вагинальной микробиоте в группе О он в 96,37% сосуществовал с Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., в группе К – в 100%.
Выводы
Во влагалищной микробиоте девочек препубертатного возраста условно-патогенный микроорганизм А. vaginae встречается в норме в 7,50% случаев, при вагинальном дисбиозе – в 41,04%. В подавляющем числе случаев А. vaginae сосуществует с Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., и является бактерией, ассоциированной с вагинальным дисбиозом у девочек препубертатного возраста.
Рецензенты:Яковлева Э.Б., д.м.н., профессор, профессор кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии, Донецкий национальный медицинский университет, г. Донецк;
Говоруха И.Т., д.м.н., профессор, профессор кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии, Донецкий национальный медицинский университет, г. Донецк.
Библиографическая ссылка
Рутинская А.В., Чайка А.В., Носенко Е.Н. ATOPOBIUM VAGINAE ВО ВЛАГАЛИЩНОЙ МИКРОБИОТЕ ДЕВОЧЕК ПРЕПУБЕРТАТНОГО ВОЗРАСТА // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 6. ;URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=17022 (дата обращения: 19.09.2024).