Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Новиков О.О. 1 Писарев Д.И. 1 Жилякова Е.Т. 1 Левченко В.Е. 1 Казакова В.С. 1 Попов Н.Н. 1 Фадеева Д.А. 1

---

1 ФГАОУ ВПО Белгородский государственный национальный исследовательский университет

В статье приводятся результаты химического анализа плодов винограда культурного. Известно, что ви-ноград одно из древнейших растений, используемых человеком. Одной из наиболее важных групп со-единений винограда являются антоцианы, представляющие собой природные красители с широким спектром фармакологической активности. Сведения о составе антоцианов плодов виноградав литера-турных источников разнятся. Поэтому настоящее исследование посвящено изучению состава этой груп-пы соединений в выбранном объекте. Состав антоцианов изучен с привлечением одних из наиболее объ-ективных методов анализа – высокоэффективной хроматографии и масс-спектрометрии в варианте MALDI/TOF/MS. С использованием указанных методов удалось расшифровать структуру антоцианов, входящих в состав плодов винограда. Установлено, что всего в плодах содержится 9 соединений антоци-ановой структуры, причём наибольшое процентное содержание приходится на гликозиды мальвидина. Использование метода ОФ ВЭЖХ при анализе антоцианов оказалось полезным для индивидуальной характеристики и количественной оценки компонентов в изученном объекте. Использование MAL-DI/TOF/MSоказалосьважным для групповой характеристики антоцианов, когда необходимо подтвердить присутствие искомых компонентов в объекте.

Статья в формате PDF

163 KB

масс-спектрометрический профиль.

масс-спектрометрия

градиентное элюирование

ОФ ВЭЖХ

антоцианы

виноград культурный

1. Кишковский З. Н. Химия вина: учеб. пособие для вузов пищ. пром-сти / З. Н. Кишковский, И. М. Скурихин. – М. : Пищ. пром-сть, 1976. – 312 с.

2. Соколов С. Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей / С. Я. Соколов – М. : Медицинское информационное агентство, 2000. – 976 с.

3. Способ выделения биологически активных антоцианов : пат. 2302423 Рос. Федерация : МПК C 07 H 17/065, C 07 H 1/08, C 09 B 61/00 / А. В. Птицын, Э. И. Мухтаров, А. П. Каплун [и др.] ; заявитель НПО «Техкон». – № 2005117999/04 ; заявл. 10.06.2005 ; опубл. 10.07.2007, Бюл. 19. – 7 с.

4. Anthocyanins in medicine / E. Kowalczyk, P. Krzesiński, M. Kura [et al.] // Pol. J. Pharmacol. – 2003. – Vol. 55, № 5. – P. 699-702.

5. European Pharmacopoeia [Text] : 2 vol. – 5th ed. – Strasbourg : Council of Europe. cop, 2005. – 2 v.

Виноград культурный (VitisviniferaL.) – одно из древнейших растений, используемых человеком. Лечение виноградом (ампелометрия) известно с глубокой древности. V. viniferaL. оказывает тонизирующее, бактерицидное, мочегонное, слабительное, повышает мышечный тонус, особенно сердечной мышцы. V. viniferaL. эффективен при хронических заболеваниях желудка, кишечника, печени, желчного пузыря и желчевыводящих путей, лёгких, анемии, гипертонии, подагре [1, 2].

Одной из наиболее ценных групп действующих веществ плодов V. viniferaL. являются антоцианы, обладающие широким спектром фармакологической активности [4]. Сведения о составе антоцианов V. viniferaL. встречающиеся в литературе достаточно противоречивы. Поэтому целью настоящего исследования явилось изучение антоцианов V. viniferaL. с помощью методов ОФ ВЭЖХ и MALDI/TOF/MS, как одних из наиболее объективных методов анализа.

Для выделения суммы антоцианов из плодов V. viniferaL. использовали способ выделения антоцианов с помощью сорбции на тальке [3].

Хроматографические исследования проводили на хроматографическом приборе фирмы «AgilentTechnologies 1200 Infinity» производства США cавтоматическим пробоотборником Agilent 1200, вакуумным микродегазатором, градиентным насосом и термостатом той же серии. Электронные спектры поглощения регистрировали с помощью спектрофотометрического детектора с диодной матрицей серии Agilent 1200 (диапазон длин волн от 190 до 950 нм, кювета с длиной оптического пути 10 мм; объемом 13 мкл), шаг сканирования - 2 нм.

Для регистрации и обработки спектральных данных и хроматограмм использовали программное обеспечение «AgilentChemStation».

Для испытаний использовали стальную хроматографическую колонку, AscentisexpressC182,7μм × 100 мм × 4,6 мм.

Антоцианы подвергали хроматографическому разделению в следующих условиях: подвижная фаза: (А) – водный раствор кислоты ортофосфорной (рН ~ 2), (Б) – ацетонитрил или 0,5%-ный водный раствор кислоты уксусной (А) – ацетонитрил (Б) в градиентном режиме элюирования; скорость подвижной фазы – 0,5 мл/мин; температура колонки +35 оС; объём вводимой пробы 1 μl.

Состав подвижной фазы программировали в условиях, указанных в таблице 1.

Таблица 1 - Условия градиентного элюирования антоцианов

Детектирование осуществляли при 520 нм.

Результатом хроматографического разделения суммы антоцианов V. viniferaL.методом ОФ ВЭЖХ явилось установление наличия 8 компонентов антоциановой структуры (рисунок 1).

Рисунок 1 - Хроматограмма суммы антоцианов плодов V. viniferaL.

(детекция диодно-матричная, λ = 510 нм)

Показатели пригодности хроматографической системы, рассчитанные по результатам хроматографирования, представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Показатели пригодности хроматографической системы для определения антоцианов V. viniferaL.

tR- абсолютное время удерживания, S - площадь пика, N - число теоретических тарелок, HETP - высота, эквивалентная теоретической тарелке, Rs- коэффициент разделения пиков, Tf - коэффициент асимметрии, Wb - ширина пика на базовой линии

Результаты расчёта критериев эффективности (N>5000, Rs>1,5, Tf<2) [5] свидетельствуют о пригодности использованной системы для анализа антоцианов V. viniferaL.

Регистрацию масс-спектров проводили на приборе масс – спектрометр «AutoflexII» (модификация Microflex) «MALDITOF/TOF» (приборная ошибка - не более 0,5 Da) фирмы BrukerDaltonicsGmbH производства Германии.

Анализируемую пробу в количестве 0,5 μl с помощью дозатора наносили на мишень «MTP 384 targetplatemattsteelTF», высушивали и сверху наносили каплю матрицы. В качестве матрицы использовали α-цианокоричную кислоту (НССА), регистрацию спектров вели с помощью программы «FlexControl», обработку данных осуществляли в программе «FlexAnalis», в отражённом режиме при положительной полярности (ReflexPositive).

Масс-спектрометрический профиль антоцианов плодов V. viniferaL.показал присутствие пиков молекулярных ионов с зарядами m/z = 463,187, m/z = 479,161, m/z = 493,201, m/z = 609,158, m/z = 625,143, m/z = 639,158, соответствующих монозидным и дигликозидным формам антоцианов. При фрагментации образуются агликоны, молекулярные пики ионов которых имеют заряды m/z = 301,306, m/z = 317,313 и m/z = 331,544, соответствующие пеонидину, петунидину и мальвидину. Для мальвидина и его гликозида можно выделить характерный признак присутствия в спектре в деметилированном состоянии: m/z = 345[C17H15O6]-14[СН2] = 331, та же картина наблюдается в случае гликозида (рисунок 2).

Рисунок 2 - Масс-спектр антоцианов плодов V. viniferaL.

Результаты анализа плодов V. viniferaL.представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Результаты анализа антоцианов в плодах V. viniferaL.

Таким образом, в ходе настоящего исследования с помощью методов ОФ ВЭЖХ и MALDI/TOF/MS удалось обнаружить присутствие 9 антоцианов, гликозидов мальвидина, пеонидина и питунидина. Причём использование метода ОФ ВЭЖХ при анализе антоцианов оказалось полезным для индивидуальной характеристики и количественной оценки компонентов в изученном объекте. Использование MALDI/TOF/MS оказалось важным для групповой характеристики антоцианов, когда необходимо подтвердить присутствие искомых компонентов в объекте.

Рецензенты:

Шомаров В.К., д.фарм.н., профессор кафедры фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета, г.Курск.

Будко Е.В., д.фарм.н., профессор кафедры фармацевтической, токсикологической и аналитической химии Курского государственного медицинского университета, г.Курск.

Библиографическая ссылка