Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

THE SCREENING OF ACTIVE COMPOUNDS IN DERIVATIVE 3-METHYLIL-1-ETHIL XANTHINE AFFECTING HEMOSTASIS.

Kamilov F.Kh. 1 Timirkhanova G.A. 1 Samorodova A.I. 1 Khaliullin F.A. 1 Murataev D.Z. 1
1 Bashkirian State Medical University
The article describes the issue of how 8 newly synthesized derivative sals 3-methylil-1-ethil xanthine and medically applied pharmaceutical drugs affect capacity of platelets and plasmic component of hemostasis. It shows how differently 3-methylil-1-ethil xanthine derivatives affect the hemostasis system, and it reveals active compounds. The 3-methylil-1-ethil xanthine derivative М-76 show apparent antiaggregational and anticoagulational activity which prove a wider antithrombotic range of such compounds. The findings show that the issue of derivative sals 3-methylil-1-ethil xanthine needs further research.
blood
3-methylil-1-ethil xanthine derivatives
antiaggregation activity
anticoagulation activity

Введение. Поиск потенциальных антитромботических средств ведется исследователями на протяжении длительного времени. Найдены перспективные вещества среди активаторов фибринолиза, ингибиторов тромбина, ферментов и комплексных препаратов, субстратов растительного происхождения, пептидных ингибиторов тромбинзависимого превращения фибриногена [9]. Несмотря на успех исследователей селективных антитромботических средств, имеющих широкое практическое применение, не существует [1]. Применяемые на практике лекарственные препараты, помимо гемостаза, изменяют многие другие параметры систем организма [2].

Одним из современных направлений в разработке новых лекарственных средств является синтез аналогов и производных применяемых препаратов. Предыдущие исследования подтвердили наличие у ряда производных 3-метилксантина выраженной антиагрегационной активности [3, 6]. Полученные данные способствуют дальнейшим исследованиям по изучению влияния производных ксантина на систему гемостаза и являются основой для поиска селективных ингибиторов функциональной активности тромбоцитов среди впервые синтезированных N7-замещенных производных ксантина, содержащих этильный радикал в положении N1, для создания на их основе избирательно действующих, высокоэффективных лекарственных препаратов.

Цель. Оценить влияние 8 синтезированных производных 1-этилксантина на систему гемостаза in vitro и сравнить с применяемыми в медицине лекарственными препаратами.

Материал и методы исследования. Исследование влияния на функциональную активность тромбоцитов проводили in vitro по методу Born на агрегометре “Thromlite-1006A” на донорской крови человека [8]. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов. В качестве индуктора агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл и коллаген в концентрации 5 мг/мл, производства “Технология-Стандарт”, г. Барнаул (рис. 1). Определение активности исследуемых производных проводили в концентрации 2×10-3 М/л. При анализе агрегатограмм обращали внимание на спонтанную агрегацию тромбоцитов, вызванную введением исследуемого вещества в плазму, рассчитывали степень подавления или усиления агрегации под действием производных ксантина, оценивали дезагрегационный эффект соединений [1].

Исследование антикоагуляционной активности проводили in vitro стандартными коагуляционными методами на турбометрическом гемокоагулометре Solar CGL 2110 на донорской крови человека. Проводилось определение активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ), протромбинового времени (ПВ) и концентрации фибриногена по A. Clauss [5]. Определение антикоагуляционной активности исследуемых производных проводили в конечной концентрации 10-3 г/мл.

Объекты исследования – лекарственные препараты: пентоксифиллин, кофеин бензоат натрия, эуфиллин, а также производные ксантина, впервые синтезированные на кафедре фармацевтической химии Башкирского государственного медицинского университета [7].

Препараты сравнения: в качестве антикоагулянта использовали «Гепарин натрия» (производства ОАО «Синтез», Россия), в качестве антиагрегантов – пентоксифиллин, кофеин-бензоат натрия, эуфиллин (ОАО «Дальхимфарм», Россия), ацетилсалициловая кислота (2-ацетилоксибензойная кислота, Фармацевтическая фабрика Шандонг Ксинхуа Фармасьютикал Ко., ЛТД, Китай). Определение влияния на функциональную активность тромбоцитов и плазменный компонент гемостаза проводили на 6 пробах крови разных доноров для каждого соединения. Данные показателей статистически обрабатывали с применением t-критерия Стьюдента.

Обсуждение результатов. Результаты исследования влияния производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов представлены в таблице 1.

По результатам проведенного исследования установлено, что среди препаратов сравнения наибольшую активность проявил пентоксифиллин. При предварительной инкубации пентоксифиллина в обогащенной тромбоцитами плазме в течение 3 минут происходило снижение АДФ-индуцированной агрегации в среднем на 50 % относительно контроля. На коллаген-индуцированную агрегацию тромбоцитов влияния пентоксифиллина не регистрировалось. Выраженную антиагрегационную активность проявил кофеин-бензоат натрия. Агрегация тромбоцитов, индуцированная АДФ и коллагеном, снижалась соответственно на 16 % и 6 %.

Таблица 1. Влияние производных ксантина на адгезивно-агрегационную функцию тромбоцитов, n=7

пп

 

Шифр

АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов в присутствии соединения

(% к контролю)

Коллаген-индуцированная агрегация тромбоцитов в присутствии соединения

(% к контролю)

 

М-9

92,4±2,3

90,7±2,1

P1=0,002

P2=0,07

 

М-8

99,1±0,9

98,9±1,1

 

М-7

97,2±2,1

98,2±1,6

 

М-17

97,2±2,2

96,9±2,1

 

М-76

80,7±2,6

P1<0,0001

P2=0,002

P3=0,003

86,6±2,3

P1<0,0001

P2=0,006

P3=0,0001

P4=0,00002

 

М-74

97,9±1,3

97,9±1,3

 

М-73

95,3±1,7

96,1±1,6

 

М-75

95,5±2,1

96,9±1,9

 

Кофеин-бензоат натрия

84,8±1,9

 

94,7±1,2

 

Эуфиллин

92,8±1,7

97,5±1,3

 

Пентоксифиллин

51,9±1,3

100,0±0,0

 

Аспирин

86,5±2,4

100,0±0,0

Примечание: Уровень статистической значимости различий в сравнении с эуфиллином (P1), кофеин-бензоат натрием (P2), аспирином (P3), пентоксифиллином (P4).

АБ

Рисунок 1:


А – Агрегация тромбоцитов, индуцированная АДФ (контроль)

Б – Агрегация тромбоцитов, индуцированная коллагеном (контроль)

Среди впервые синтезированных производных ксантина наибольшую антиагрегационную активность проявило соединение М-76. Введение 2×10-3 М/л вещества в кювету агрегометра за 3 мин до индуктора приводит к подавлению агрегации тромбоцитов в среднем на 19,3 % и 13,4 % относительно контроля (рис. 2). Это превышает показатели антиагрегационной активности препаратов сравнения.

АБ

Рисунок 2:

А – АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, в присутствии М-76

Б – Коллаген-индуцированная агрегация тромбоцитов, в присутствии М-76

Результаты исследования влияния соединений на плазменный компонент гемостаза представлены в таблице 2.

Таблица 2. Влияние производных ксантина на плазменный компонент гемостаза, n=7

Шифры

соединений

АПТВ,

% к контролю

ПВ,

% к контролю

Фибриноген,

% к контролю

 

М-9

109,5±2,5**

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

 

М-8

105,7±1,4*

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

 

М-7

101,9±1,2

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

4.

М-17

103,2±2,1*

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

5.

М-76

110,2±2,9**

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

6.

М-74

104,9±2,2

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

7.

М-73

103,8±1,7

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

8.

М-75

105,2±2,3*

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

9.

Гепарин

154,7±3,7**

100,0 ± 0,0

100,0 ± 0,0

Примечание: Уровень статистической значимости различий в сравнении с контролем: P*<0,01, P**<<0,0001.

Соединения показали различное влияние на плазменный компонент гемостаза, проявляющееся изменением показателя внутреннего пути свертывания крови – АПТВ. На показатели ПВ и концентрацию фибриногена в данной концентрации значимого влияния соединений не регистрировалось.

Среди впервые синтезированных производных ксантина найдены соединения, превосходящие по антиагрегационной активности ряд применяемых в настоящее время препаратов. Кроме этого, соединения оказывают влияние и на плазменный компонент гемостаза. Полученные результаты свидетельствуют о более широком антитромботическом потенциале новых производных ксантина, что свидетельствует о перспективности дальнейшего поиска потенциальных антиагрегантов среди производных 1-этилксантина.

Рецензенты:

Фазлыев М. М., д.м.н., профессор, начальник ФГУЗ «Медико-санитарная часть Министерства внутренних дел по Республике Башкортостан», г. Уфа.

Никитина И. Л., д.м.н., профессор кафедры фармакологии № 1 с курсом клинической фармакологии ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Уфа.