В настоящее время большое внимание уделяется диетологии питания. В последние годы препараты, обогащенные фруктозой, превратилась в популярный заменитель сахара. Фруктозу в отличие от глюкозы могут потреблять больные диабетом. Она значительно менее вредна для зубов, чем сахар. В смеси с глюкозой фруктоза не кристаллизуется, что важно в производстве мороженного, кондитерских изделий и т.д.
Были получены достаточно активные образцы иммобилизованной инулиназы из Kluyveromyces marxianus и Aspergillus awamori и изучена их каталитическая активность при работе в реакторах периодического и непрерывного действия.
Ковалентную и сорбционную иммобилизацию осуществляли по стандартной методике на предварительно очищенном носителе. Содержание белка в опытах со свободным ферментом определяли методом Лоури. Для иммобилизованной инулиназы использовали модифицированный метод Лоури. Определение каталитической активности фермента проводили спектрофотометрическим методом при помощи качественной реакции Селиванова на фруктозу.
Было установлено, что максимальной активностью обладают следующие препараты: инулиназа из Kluyveromyces marxianus при адсорбционной иммобилизации на ионообменном волокне ВИОН КН-1 и инулиназа изAspergillus awamori при ее иммобилизации на смоле АВ-26 глутаральдегидным методом.
Показано, что каталитическая активность и содержание белка в обоих иммобилизованных препаратах не изменялись на протяжении 2 лет при их хранении в сухом виде при комнатной температуре.
Была исследована стабильность обоих ферментных образцов в реакторах периодического и непрерывного действия. Показано, что при многократном использовании иммобилизованных препаратов в данных типах реакторов их активность практически не изменялась.
Известно, что наиболее предпочтительными в промышленных условиях являются реакторы непрерывного действия, позволяющие автоматизировать технологический процесс. Поэтому мы изучили особенности реакции гидролиза инулина в реакторе колоночного типа.
Было показано, что при пропускании раствора инулина нижним током через колонку, заполненную адсорбционно иммобилизованным на ВИОН КН-1 препаратом инулиназы из Kluyveromyces marxianus, со скоростью 3мл/мин создаются оптимальные условия гидролиза. Для иммобилизованного на АВ-26 глутаральдегидным способом фермента из Aspergillus awamori оптимальная скорость нижнего тока составляет 0,25 мл/мин.
Таким образом, нами были получены иммобилизованные препараты инулиназ из различных источников, обладающие достаточно высокой активностью и стабильностью при длительном хранении и многократном использовании.