Полиморфизм системы HLA позволяет использовать ее для уникальных популяционных исследований, проводимых с целью изучения частоты встречаемости генов, антигенов, гаплотипов, выявления генетических различий между популяциями, а также является основой для изучения таких проблем, как «HLA и заболевания», «HLA и качество иммунного ответа», «HLA и репродукция», и для решения практических вопросов в трансплантологии [4; 6; 7].

Следует отметить, что внедрение в исследования системы HLA молекулярно-генетических методов не только позволило конкретизировать представления о системе HLA, но и значительно расширило представления о ее полиморфизме, при этом были открыты многие новые аллели классов I, II и III, и общее количество только известных специфичностей HLA классов I и II увеличилось более чем в 6 раз. Аллельные варианты HLA классов I и II входят в несколько генетических локусов. Так, в классе I имеется 3 локуса HLA: А, В и С, также к антигенам HLA класса I относятся гены локуса МIС - МНС class I chain - related gens (МIС - А и МIС - В) [9].

Эти гены локализуются на хромосоме 6 в непосредственной близости от HLA - В [10].

К настоящему моменту установлено 17 аллельных вариантов генов МIС - А и МIС - В [6; 9]. В настоящее время обнаружено, что антигены МIС - А участвуют в активации взаимодействия ТСR - молекулы МНС в развитии Т-клеточно-опосредованной цитотоксичности и активности НК-клеток, тем самым, в частности, играя роль в обеспечении противоракового иммунитета [7].

Успехи молекулярной биологии, в частности иммуногенетические методы изучения главного комплекса гистосовместимости человека (МНС), способствовали не только новому взгляду на этиологию и патогенез многих заболеваний, но и прогнозам ряда заболеваний в клинике. Исследование МНС стало одним из приоритетных направлений в иммуногенетике [6]. Изучение характера ассоциированности антигенных вариантов генов HLA со злокачественными солидными опухолями у детей в изученной нами литературе ранее не проводилось.

Заболеваемость детей злокачественными опухолями в России за последние 10 лет увеличилась на 20% и достигла 4,25 тысяч [1]. В настоящее время в России насчитывается около 12 500 детей до 15 лет, находящихся под врачебным наблюдением по поводу злокачественных новообразований (ЗН) всех локализаций [2]. Россию можно отнести к странам с высоким уровнем заболеваемости детской онкологической патологией. В 2002 году она составила 13-15 на 100 тысяч детского населения [3]. Солидные злокачественные новообразования (ЗН), включая опухоли ЦНС, занимают второе место в структуре заболеваемости детей злокачественными опухолями. На их долю, по данным различных отечественных и зарубежных авторов, приходится от 48,5 до 54% от всей онкопатологии. Среди солидных опухолей наиболее часто диагностируются опухоли центральной нервной системы - около 20%. Реже встречаются опухоли почек - 8%, костей и мягких тканей - 12%, глаз - 3,5%, половых органов - 0,7% [5].

Целью настоящей работы явилось исследование распределения антигенов главного комплекса гистосовместимости I класса у детей с солидными злокачественными опухолями.

Материалы и методы. Информация об обследованной популяции. Определение антигенов HLA I класса было проведено у 74 пациентов отделения детской онкологии РНИОИ: 12 пациентов с саркомой Юинга, 11 пациентов с остеогенной саркомой, 14 пациентов с нейробластомой, 14 пациентов с нефробластомой, 23 пациента с герминогенными опухолями (дисгерминома, тератома, тератобластома, эмбриональный рак яичка, семинома, герминогенная опухоль головного мозга). Контрольную группу составили 1215 доноров ГУЗ СПК РО. Средний возраст больных составил: с саркомой Юинга - 11,8 года, остеогенная саркома - 17,1 года, нейробластомой - 4,7 года, нефробластомой - 4,8 года, герминогенные опухоли - 14,2 года. Заболевание начиналось в среднем в возрасте: с саркомой Юинга - 11,6 года, остеогенная саркома - 16,4 года, нейробластомой - 4,4 года, нефробластомой - 4,2 года, герминогенные опухоли - 10,6 года. Из них при саркоме Юинга - 9 мальчиков, 3 девочки, при остеогенной саркоме - 7 мальчиков, 4 девочки, нейробластома - 8 мальчиков, 6 девочек, нефробластома - 9 мальчиков, 5 девочек, герминогенные опухоли - 10 мальчиков, 13 девочек.

Исследование HLA фенотипа I класса проводилось на базе ГУЗ СПК РО в иммунологическом отделении методом серологического типирования.

Серологическое типирование осуществляли в стандартном лимфоцитотоксическом тесте. Для определения HLA - антигенов I класса, локусов А и В, в качестве гистотипирующих стандартов использовали сыворотки Всероссийского банка гистотипирующих реагентов Санкт-Петербургского НИИ гематологии и переливании крови.

Статистическая обработка результатов. Достоверность различий и достоверность наблюдаемой ассоциации определяли с помощью общепринятого в иммуногенетике вычисления χ2.

Результаты и обсуждение. Первым этапом работы выполнена оценка распределения антигенов HLA I класса у детей с солидными злокачественными опухолями. Результаты исследования распределения антигенов HLA I класса представлены в таблицах 1-5.

Все основные антигены присутствуют в популяции: HLA I класса (локус А и В).

Таблица 1 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с нейробластомой

Антигены HLA I класса	Здоровые лица(n = 1215)	Больные (n = 14)	χ2.
А 1	25,19	21,42	0,09
А 2	48,06	50,0	00,2
А3	25,35	7,14	2,43
А23	4,36	7,14	0,25
А24	16,46	35,71	3,69
А25	4,52	7,14	0,22
А26	5,35	7,14	0,09
А11	12,59	14,28	0,04
А31	0,90	7,14	5,56
В 51	12,35	14,28	0,40
В7	19,67	1,14	1,38
В8	10,86	21,42	1,58
В44	14,07	14,28	0,001
В13	11,60	35,71	8,2
В62	6,99	7,14	0,001
В38	8,97	7,14	0,06
В39	1,73	7,14	2,31
В 18	13,50	7,14	0,48
В 49	5,10	7,14	0,12
В 55	0,82	7,14	0,01
В 27	10,70	28,57	4,55
В 35	14,90	14,28	0,004
В 60	6,34	14,28	2,32
В 61	2,47	7,14	1,27

                                  Примечание. В таблице 1 - частота встречаемости антигена в (%).

Из представленных данных (табл. 1), при нейробластоме по сравнению с контролем повышена частота антигенов - А24 - 35,71%, А31 - 7,14%, В8 - 21,42%, В13 - 35,71%, В27 - 28,57, В60 - 14,28%. Достоверно повышена только частота антигена В13 (χ2 - 6,02, р<0,05). Снижена частота антигенов В7 - 7,14% и В18 - 7,14%. Число гомозигот при нейробластоме - 7 случаев.

Таблица 2 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с нефробластомой

Антигены HLA I класса	Здоровые лица (n = 1215)	Больные (n = 14)	χ2.
А 1	25,19	14,28	0,86
А 2	48,06	50,0	0,02
А3	25,35	35,71	0,78
А24	16,46	14,28	0,05
А25	4,52	7,14	0,22
А26	5,35	21,42	6,85
А11	12,59	14,28	3,60
А28	5,10	14,28	2,36
А29	1,48	7,14	2,91
А31	0,90	7,14	5,56
В 51	12,35	28,57	3,32
В7	19,67	7,14	1,36
В8	10,86	14,28	0,17
В44	14,07	14,28	0,001
В13	11,60	7,14	2,69
В38	8,97	7,14	0,06
В 18	13,50	28,57	2,66
В 49	5,10	14,28	2,36
В 35	14,90	35,71	3,17
В 60	6,34	7,14	0,02
В 41	4,12	14,28	3,13

                      Примечание. В таблице 2 - частота встречаемости антигена в (%).

 

При нефробластоме (табл. 2) повышена частота антигенов: А26 - 21.42%, А31 - 7,14%, В51 - 28,57%, В18 - 28,57%, В35 - 35,71%, В41 - 14,28%. Достоверно повышена только частота антигена А26 (χ2 - 6,85, р<0,05). Снижена частота антигена В13 - 7,14%. Число гомозигот при нефробластоме - 5 случаев. Повышение частоты HLA А31, вероятнее всего, обусловлено низкой частотой антигена в популяции и небольшим числом пациентов в обследуемой группе.

Таблица 3 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с саркомой Юинга

Антигены HLA I класса	Здоровые лица (n = 1215)	Больные (n = 12)	χ2.
А 1	25,19	33,33	0,11
А 2	48,06	50,0	0,02
А3	25,35	33,33	0,89
А24	16,46	41,66	3,77
А25	4,52	8,33	0,004
А26	5,35	8,33	0,03
В 51	12,35	33,33	3,05
В7	19,67	25,0	0,01
В8	10,86	25,0	0,57
В44	14,07	8,33	0,02
В13	11,60	8,33	0,02
В62	6,99	8,33	0,15
В 18	13,50	8,33	0,01
В 27	10,70	8,33	0,04
В 35	14,90	16,67	0,06
В 60	6,34	8,33	0,09
В 61	2,47	8,33	0,13
В 41	4,12	8,33	0,001

                        Примечание. В таблице 3 - частота встречаемости антигена в (%).

При саркоме Юинга (табл. 3) значительно повышена частота антигенов А24 - 41,66%, В51 - 33,33%, В61 - 8,33%. Достоверных различий не выявлено.

Таблица 4 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с остеогенной саркомой

Антигены HLA I класса	Здоровые лица (n = 1215)	Больные (n = 11)	χ2.
А 1	25,19	18,18	0,03
А 2	48,06	45,45	0,02
А3	25,35	36,36	0,22
А24	16,46	36,36	1,84
А26	5,35	9,00	0,01
А28	5,10	9,00	0,01
В 51	12,35	36,36	3,83
В7	19,67	9,0	0,25
В8	10,86	18,18	0,08
В44	14,07	18,18	0,01
В13	11,60	27,27	1,25
В14	5,60	9,0	0,02
В62	6,99	9,0	0,10
В38	8,97	9,0	0,27
В 56	1.97	9,0	0,28
В 35	14,90	27,27	0,52
В 60	6,34	9,0	0,07
В 61	2,47	9,0	0,18
В 41	4,12	9,0	0,004

                        Примечание. В таблице 4 - частота встречаемости антигена в (%).

У пациентов с остеогенной саркомой (табл. 4) повышена частота антигенов А24 - 36,36%, В51 - 36,36%, В61 - 9,0%, также отмечено повышение частоты антигенов В13, В56, В35 (27,27%, 9,0%, 27,27%) по сравнению с контрольной группой. Снижена частота антигенов В7 - 9,0%, однако эти различия недостоверны из-за небольшого числа наблюдений. Число гомозигот в группе с остеогенной саркомой составило 5 случаев, число гомозигот у пациентов с саркомой Юинга - 7.

Таблица 5 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с герминогенными опухолями

Антигены HLA I класса	Здоровые лица (n = 1215)	Больные (n = 23)	χ2.
А 1	25,19	17,39	1,20
А 2	48,06	56,52	0,65
А3	25,35	26,09	0,006
А24	16,46	26,09	1,51
А25	4,52	4,34	0,22
А26	5,35	17,39	3,98
А11	12,59	26,09	2,42
А30	2,39	4,34	0,75
А23	4,36	4,34	0,26
В 51	12,35	21,74	1,08
В7	19,67	17,39	0,001
В8	10,86	8,69	0,001
В44	14,07	21,74	0,56
В13	11,60	4,34	0,57
В14	5,60	8,69	0,03
В62	6,99	13,04	1,14
В39	1,73	4,34	0,02
В 18	13,50	21,74	0,71
В57	6,91	4,34	0,55
В49	5,10	4,34	0,10
В50	1,24	4,34	1,45
В55	0,82	4,34	0,45
В 27	10,70	4,34	1,78
В 35	14,90	26,09	2,24

                               Примечание. В таблице 5 - частота встречаемости антигена в (%).

При герминогенных опухолях (табл. 5) повышена частота антигенов А24 - 26,09%, А26 - 17,39%, А11 - 26,09%, В51 - 21,74%, В18 - 21,74%, В39 - 4,34%, В50 - 4,34%, В55 - 4,34%. Достоверные различия по сравнению с контрольной группой отмечены в частоте встречаемости антигена А26 (χ2 - 3,98, р<0,05). Повышение частоты антигенов В39, В50, В55, вероятнее всего, обусловлено небольшим числом обследованных пациентов данной патологии и низкой частотой этих антигенов среди здоровых лиц.

Проведение сравнительного анализа HLA I класса позволило выявить различия между антигенным составом у больных с саркомой Юинга и остеогенной саркомой, с нейробластомой, нефробластомой, герминогенными опухолями. Так, у больных с нейробластомой, нефробластомой, герминогенными опухолями встречается антиген А11, а у больных с саркомой Юинга и остеогенной саркомой не выявляются данные антигены. В тоже время, у больных с саркомой Юинга и остеогенной саркомой чаще встречается антиген В51, нежели при нейробластоме, нефробластоме, герминогенных опухолях.

Выводы

1. В исследованных нами группах детей с солидными злокачественными опухолями: нефробластомой, нейробластомой, саркомой Юинга, остеогенной саркомой, герминогенными опухолями отмечено достоверное увеличение частоты встречаемости ряда антигенов HLA I класса. Так достоверно повышена частота антигена HLA В13 при нейробластоме (р<0,05), HLA А26 при нефробластоме и герминогенных опухолях (р<0,05).

Необходимо продолжить исследование пациентов с данными патологическими процессами для уточнения результатов.

2. Для дальнейшего изучения ассоциативных связей системы HLA со злокачественными опухолями у детей целесообразно провести HLA типирование по II классу (локус - DRB I).

Рецензенты:

Каймакчи О.Ю., д.м.н., ассистент кафедры онкологии Ростовского государственного медицинского университета, г. Ростов-на-Дону.

Нестерова Ю.А., к.м.н., ассистент кафедры онкологии Ростовского государственного медицинского университета, врач-педиатр отделения детской хирургии ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт», г. Ростов-на-Дону.