Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 0,936

Введение

Грибковый кератит – тяжелая инфекционная патология роговицы. Ее доля в структуре всех инфекционных кератитов может составлять от 1 до 60% в зависимости от таких условий, как климат региона, уровень урбанизации и структура экономики страны [1]. При этом доля неблагоприятных исходов может составлять до 28% случаев [2], а процент тяжелых осложнений, включающих перфорацию роговицы, эндофтальмит и панофтальмит, являющихся причиной энуклеации и эвисцерации, составляет от 15 до 30% [3, 4].

Одной из причин низкой эффективности консервативного лечения грибкового кератита является отсутствие официальных офтальмологических форм противогрибковых лекарственных средств в большинстве стран, в том числе в России. Вследствие этого врачи вынуждены использовать иные формы препаратов в режиме off-label, что сопровождается высокой вариабельностью эффективности и безопасности, особенно при выборе некорректной концентрации, частоты применения или отсутствии хорошей проникающей способности лекарственного вещества [5].

Относительно высокой проникающей способностью в ткани роговицы обладают лекарственные препараты из класса азолов (флуконазол, вориконазол). При этом вориконазол также имеет такие положительные свойства, как широкий спектр противогрибкового действия и высокая способность к проникновению в строму роговицы и в переднюю камере глаза, что обусловлено относительно низкой молекулярной массой и хорошей растворимостью при использовании классической формы лиофилизата в комплексе с циклодекстрином. Однако данное свойство реализуется лишь при частых закапываниях препарата, а также может быть ограничено за счет частого моргания, обильного слезоотделения, наличия плотного инфильтрата, густого отделяемого, а также воспалительного отека роговицы, в особенности при длительном и осложненном воспалительном процессе [5, 6].

Доказано, что использование для местного применения раствора вориконазола в концентрации более чем 1% нецелесообразно, так как не ведет к значимому повышению концентрации в тканях роговицы, в связи с чем актуальной задачей является поиск иных путей повышения эффективности накопления лекарственного средства в роговице [7, 8].

Одним из эффективных способов усиления накопления лекарственного препарата в строме является ванночковый электрофорез. Ранее предпринимались попытки применения электрофореза вориконазола в виде раствора комплекса с циклодекстрином и в транспортной капсуле липосом, что, однако, не нашло широкого применения [9, 10].

Одним из вариантов транспортной среды при электрофорезе вориконазола может быть биополимерный гидрогель на основе модифицированного альбумина. Механизм действия его основан на заключении молекул лекарственного средства в структуру длинной глобулярной молекулы альбумина и ускорении их совокупной подвижности под действием электрического тока. При этом процесс синтеза подобного гидрогеля является относительно легким и малозатратным [11, 12].

Сывороточный альбумин, используемый в качестве транспортной среды, обладает рядом преимуществ, в том числе высокой биосовместимостью и возможностью биодеградации. При этом он является удобным инструментом для применения в медицине за счет возможности изменения объема и вязкости под действием таких внешних факторов, как температура, pH, ионный состав среды [12].

Цель исследования – оценить эффективность местного применения ванночкового электрофореза с вориконазолом в альбуминовом гидрогеле для лечения грибкового кератита в условиях эксперимента.

Материал и методы исследования

Этап 1: исследование возможности применения гидрогеля модифицированного бычьего сывороточного альбумина (МБСА) в качестве транспортной среды для молекул вориконазола.

Исследование физико-химических свойств МБСА проводили на базе кафедры клинической лабораторной диагностики, биологической и общей химии им. В.В. Соколовского ФГБОУ ВО СЗГМУ им. И.И. Мечникова, а также кафедры физической и неорганической химии ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России.

Синтез биополимерного гидрогеля проводили по технологии, разработанной авторами [13]. В работе были использованы: бычий сывороточный альбумин (БСА), (BSA – Product number A2153, Fraction V, Sigma – Aldrich Company Ltd, Gillingham, UK). Растворы БСА получали путем растворения лиофилизированного белка в растворе. Раствор этанола (40%), ацетилцистеин (≥99,5%).

Все использованные в работе реактивы соответствовали марке «чистый для анализа». Все растворы готовились на бидистиллированной воде. Концентрированные растворы готовились по точной навеске, растворы HCl и KCl готовились из фиксаналов, разбавленные– методом последовательного разведения.

Навеску БСА растворяли в 100 мл раствора ацетилцистеина (дистиллированной воды с добавлением точной навески ацетилцистеина), перемешивание осуществлялось с помощью магнитной мешалки до полного растворения. Полученный раствор сливали в фарфоровую чашу, прогревали и упаривали на 50% по объему. К упаренному раствору БСА добавляли водный 40%-ный раствор этанола (100 мл) и перемешивали. Затем повторно упаривали до необходимой концентрации до полного удаления из смеси спирта.

Электрокинетический потенциал (ζ-потенциал) определяли методом макроэлектрофореза – методом подвижной границы на приборе Чайковского – Малаховой [14]. Границу раздела между водной дисперсией белка и раствором, имеющим такой же состав, как и дисперсионная среда, определяли с помощью лазера [15]. Для макроэлектрофореза использовали раствор модифицированного БСА. Электрокинетический потенциал белков рассчитывали по уравнению Гельмгольца – Смолуховского. Погрешность всех измерений не превышала 10%.

Этап 2: определение возможности повышения концентрации вориконазола в ткани роговицы при помощи электрофореза в транспортной среде МБСА (исследование ex vivo)

С целью определения принципиальной возможности усиления накопления тканями роговицы частиц вориконазола путем электрофореза в среде МБСА на базе научно-исследовательской лаборатории хроматографии СЗГМУ им. И.И. Мечникова был проведен хроматографический анализ с определением концентрации вориконазола методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖК).

Для этого предварительно были подготовлены образцы роговицы. Исследование проводили с использованием кадаверных глаз, добытых в срок не более 2 ч с момента смерти животного.

Глаза были разделены на две группы (по 6 глаз в каждой) в зависимости от способа введения вориконазола:

Группа 1 (опыт) – ванночковый электрофорез с раствором 1,0% вориконазола в гидрогеле МБСА.

Группа 2 (контроль) – форсированные инстилляции 1,0% раствора вориконазола – 6 раз в течение 1 ч.

Ванночковый электрофорез проводили по стандартной методике при помощи аппарата физиотерапевтического «ЭЛФОР ПРОФ» («Невотон», г. Санкт-Петербург). Положительный электрод (анод) подключали к металлическому стержню ванночки, внутрь которой помещали гидрогель МБСА, нагруженный вориконазолом в концентрации 1,0%. Отрицательный электрод (катод) помещался на область склеры у места выхода зрительного нерва. Длительность процедуры электрофореза составляла 10 мин, сила тока – 1,0мА.

Затем роговицы выкраивали по краю лимба и помещали в стерильную емкость с физиологическим раствором. Образцы передавали в лабораторию хроматографии для исследования.

Для проведения хроматографического исследования использовался стандарт вориконазола (VETRANAL™, США). Рабочий раствор лекарственного препарата составлял 1мг/мл. Для построения калибровочной зависимости по методу абсолютной градуировки использовался раствор вориконазола с концентрациями: 0,005; 0,01; 0,02; 0,03; 0,05; 0,1; 1; 5; 10; 20; 50; 100мкг/мл (рабочий раствор последовательно разбавлялся бидистиллированной водой в необходимое количество раз), r2=0,999. Предел количественного определения вориконазола составил 5нг/мл. Для проведения пробоподготовки и хроматографического исследования использовались следующие реактивы: ацетонитрил («Вектон», Россия), хлороформ («Экос», Россия).

Хроматографический анализ выполняли на жидкостном хроматографе Agilent Technologies 1260 Infinity с диодно-матричным детектором. Условия проведения анализа: колонка Phenomenex Luna C18 (2), 150x2,00мм, 5мкм при температуре 26ºС и предколонка Phenomenex SecurityGuard с картриджами C18 4х2,0мм, 10/Pk. В качестве подвижной фазы в режиме градиентного элюирования использовали смесь ацетонитрила в бидистиллированной воде (от 25 до 80 % ацетонитрила). Скорость потока подвижной фазы – 0,3 мл/мин. Объем вводимой пробы – 20 мкл. Время хроматографирования: 22 мин. УФ-детектирование проводили при длине волны 254 ± 1,2нм.

Исследование включало анализ роговиц глаз кроликов (ткани) после воздействия вориконазола, а также физраствора (3 мл), в который они были помещены. Подготовка реальных образцов к анализу включала в себя экстракцию вориконазола хлороформом и упаривание органического слоя в токе воздуха до сухого остатка. Полученный сухой остаток растворяли в 60 мкл подвижной фазы и переносили в микровиалы для ВЭЖХ для последующего анализа.

Этап 3: оценка эффективности электрофореза вориконазола в гидрогеле МБСА в экспериментальных условиях in vivo.

С целью воспроизведения экспериментальной модели грибкового кератита были сформированы группы из лабораторных животных – кроликов породы шиншилла. В качестве одной из самых надежных и воспроизводимых была выбрана модель А.Н. Самойлова и Н.И. Давлетшиной [16, 17].

Все опыты на животных были проведены при одобрении локального этического комитета университета (заседания №10 от 11.10.2023) в соответствии с GLP и правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. С целью минимизации неприятных ощущений все животные предварительно были введены в состояние нейролептанальгезии (ксилазина гидрохлорид в расчете – 10мг × 1 кг веса) и дополнительной эпибульбарной анестезии инстилляциями оксибупрокаина (0,4%).

После предварительной стерилизации поверхности глаза при помощи 5% спиртового раствора формалина и лабораторного подтверждения стерильности в течение трех дней проводили закапывание раствора дексаметазона (0,1%) 4 раза в сутки, после чего производили интрастромальное введение 5-суточной питательной среды Сабуро с культурой грибов Fusarium solani, гомогенизированной и смешанной с изотоническим раствором хлорида натрия. Подготовка грибковых изолятов и культуральное исследование были проведены на базе НИИ медицинской микологии им. П.Н. Кашкина.

Заражение производили с дополнительным закапыванием концентрата димексида (99%) с целью повышения адгезивных свойств грибковых клеток. В результате 4–5-кратного повторения процедуры заражения с интервалом в 1 день удавалось добиться отчетливой клинической картины грибкового кератита, подтвержденного данными клинического и культурального исследования. Выраженность воспалительной реакции оценивали при помощи щелевой лампы с возможностью фотофиксации и описывали с использованием шкалы раздражения слизистой глаза по степени гиперемии, отека и выраженности отделяемого по балльной системе А. Majda и K. Chuscielska (табл.1).

Таблица1

Оценка повреждающего действия химических веществ на слизистые оболочки глаза кролика по A. Majda и K. Chrusaielska

Примечание: составлена авторами по Методическим указаниям к постановке исследований по изучению раздражающих свойств и обоснованию предельно допустимых концентраций избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны (утв. заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 11 августа 1980 г. №2196-80)

После подтверждения наличия кератомикоза путем культурального исследования приступали к этапу лечения. Местное лечение производили на правом (опытном) глазу, в левый глаз (контрольный) закапывали стерильный физиологический раствор.

Животные были разделены на две основные серии по 6 особей в каждой:
1 серия: инстилляции вориконазола – 10мг/мл (ВКЗ) с частотой 6 раз в сутки;
2 серия: ванночковый электрофорез вориконазола – 10мг/мл 1 раз в сутки.

Динамику клинических проявлений и эффективность местной терапии оценивали при помощи прижизненной оптической когерентной томографии (далее – ОКТ). Морфологическую структуру роговицы исследовали путем анализа гистологических срезов роговицы после выведения животных из эксперимента.

ОКТ-исследование

С целью оценки эффективности лечения прижизненное ОКТ-исследование было проведено в четырех временных точках: перед формированием грибкового кератита (здоровый глаз), затем на 1, 4 и 8-е сутки после начала лечения. Для объективизации исследования оценивали динамику изменения площади ОКТ-среза роговицы в определенный день по сравнению ее площадью перед началом лечения в том же месте на здоровом глазу. Используемый показатель обозначали, как коэффициент изменения площади ОКТ-среза роговицы.

Измерение площади на ОКТ-снимках в пределах диаметра в 8мм с захватом области инфильтрата или язвы проводили при помощи программного обеспечения Adobe Acrobat Reader (рис.1) с учетом поправок для перевода расчетов вмм2. Затем показатели сравнивали с площадью на том же участке до формирования грибкового кератита (рис.2).

Рис.1. Площадь ОКТ-среза роговицы в ограниченном диаметре с захватом инфильтрата. Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

Рис.2. Площадь ОКТ-среза в области будущего инфильтрата на интактной роговице. Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

При помощи полученных данных вычисляли отношение площади ОКТ-среза пораженной стромы к ее площади на том же участке до заражения, которое использовали в дальнейшем статистическом сравнении (рис.3).

Рис.3. Схема расчета индекса изменения площади ОКТ-среза роговицы.

Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

Гистологическое исследование

На 8-е сутки после выведения животных из эксперимента производили энуклеакцию глазного яблока и вырезку корнеосклеральных лоскутов с захватом 3–4мм склеры. Патоморфологическое исследование производили на кафедре патологической анатомии СЗГМУ им. И.И. Мечникова.

После фиксации в забуференном растворе 10% нейтрального формалина выполняли ручную проводку со спиртами возрастающей концентрации, осуществляли вырезку линейного участка ткани роговицы с центром грибкового инфильтрата. Материалы заливали в парафиновые блоки, из которых формировали срезы толщиной 3мкм окрашивали гематоксилином и эозином по стандартным гистотехническим протоколам. Морфометрическое исследование проводили с использованием программного обеспечения Aperio AT2 (Leica Biosystems, Германия). Оценивали два основных показателя: толщину эпителия роговицы и степень инфильтрации стромы.

С целью усреднения показателя толщины эпителия измерения проводили во множестве точек на всем протяжении среда роговицы с интервалом 200мкм (рис.4).

Рис.4. Морфометрическая оценка толщины эпителия роговицы. Показан принцип проведения линейных измерений через равные интервалы по всей протяженности среза. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. ×200.

Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

С целью объективной оценки инфильтрации роговицы производили фотофиксацию гистологических срезов при увеличении ×400 в семи зонах стромы, расположенных на равном расстоянии друг от друга.

Изображения анализировали при помощи стандартного пакета Adobe Photoshop CS5 (Adobe Systems Inc., США) с оценкой соотношения пикселей для элементов с цветом, характерным для базофильной окраски (ядра клеток, в том числе иммунных, детрит, грибковые клеточные структуры) относительно остального изображения с получением результата в числовых значениях (рис.5).

Рис.5. Поэтапная схема оценки доли инфильтрации в ткани роговицы:
1 – панорамное сканирование среза роговицы с маркировкой зон интереса;
2 – микрофотографии выбранных зон (×400): а) участок с низкой плотностью инфильтрации, б) участок с высокой плотностью инфильтрации;
3 – выравнивание контрастных цветов по унифицированным параметрам для каждого скана; 4 – подсчет пикселей цветов, соответствующих окраске гематоксилином (зеленый, красный, желтый – ядра воспалительных клеток, тканевой детрит, ядра грибковых клеток, ядра кератоцитов) относительно всех пикселей на изображении, включая синий (коллагеновые волокна). Окраска гематоксилином и эозином.

Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

Статистический анализ

Статистический анализ проводили при помощи системы “Statistica for Windows”. Количественные данные проверяли на наличие нормальности распределения по критерию Шапиро – Уилка. При ненормальном распределении были применены непараметрические критерии для малых выборок с помощью медианы (Ме) и нижнего / верхнего квартилей (Q1–Q3). Для сравнения зависимых выборок расчет производили при помощи теста знаков, при независимых – при помощи U-критерия Манна – Уитни. Различие считалось значимым при p<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Этап 1

Обнаружено, что добавление к гидрогелю МБСА лекарственного средства (вориконазол) влияет на изменение положения точки нулевого заряда, в результате чего на графиках наблюдаются заметные отклонения и сдвиг изоэлектрической точки (для белка ИЭТ+ТНЗ), что говорит о специфическом взаимодействии, сорбционной природы (рис.6). Это позволяет сделать предположение о возможности использования данного гидрогеля в качестве носителя данного препарата.

Рис.6. Графики потенциометрического титрования: 1 – кривая титрования раствора КСl, 2 – кривая титрования раствора модифицированного БСА с концентрацией 8 г/л;

3 – кривая титрования раствора модифицированного БСА с концентрацией 8 г/л

с нагрузкой вориконазолом в концентрации 10мг/мл.

Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

Этап 2

В результате хроматографического анализа было выявлено значимое повышение концентрации вориконазола в серии опытных глаз по сравнению с контрольными как при сравнении концентрации в тканях роговицы, так и в физиологическом растворе, в который они были помещены (табл.2).

Таблица2

Результаты хроматографического анализа

Примечание: составлена авторами на основе полученных данных в ходе исследования

Этап 3

Моделирование кератита

На 7–9-й день от начала формирования модели отчетливая клиническая картина грибкового кератита наблюдалась у всех лабораторных животных. Суммарные признаки раздражения глазной поверхности находились в диапазоне от 4,6 до 7,8 баллов (табл.3).

Таблица3

Суммарные показатели раздражения глазной поверхности

Примечание: составлена авторами на основе полученных данных в ходе исследования

Оценка ОКТ-критериев

При оценке индекса изменения площади ОКТ-среза роговицы значимая разница между опытными и контрольными глазами была обнаружена лишь на 8-е сутки лечения. При этом и в группе инстилляций вориконазола, и в группе электрофореза индекс на опытных глазах: 1,73 [1,31; 1,96] для инстилляций и 1,52 [1,40; 2,06] для электрофореза был значимо ближе к нормальному значению, чем в контрольных 2,36 [1,99; 3,38] для инстилляций и 2,51 [1,96; 2,96] для электрофореза (p<0,05). Однако между опытными глазами в двух сериях значимой разницы обнаружено не было (p>0,05) (рис.7).

Рис.7. Коэффициент изменения площади роговицы на 8-е сутки.

Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

Толщина эпителия

В обеих экспериментальных сериях толщина эпителия роговицы опытной группы была больше по сравнению с контрольными: 28,86мкм [20,94; 37,26] против 20,31мкм [16,35; 27,29] в серии инстилляций вориконазола и 20,65мкм [13,01; 29,09] против 9,65мкм [4,01; 22,47] в серии электрофореза. Однако при сравнении двух экспериментальных серий в опытной группе толщина эпителия роговицы была больше при использовании инстилляций, чем при применении электрофореза (p<0,05) (рис.8).

Рис.8. Толщина эпителия (мкм) на 8-й день лечения.

Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

Степень инфильтрации

При измерении выраженности инфильтрации в обеих сериях лабораторных животных было выявлено уменьшение доли инфильтрированной стромы роговицы глаз кроликов опытной группы по сравнению с контрольными: 6,52% [3,37; 16,69] против 9,37% [5,81; 25,69] в серии инстилляций вориконазола и 2,17% [1,54; 10,82] против 8,18% [2,74; 19,28] в серии электрофореза. При этом при сравнении глаз в опытной группе между сериями достоверно меньшая доля инфильтрации была выявлена при применении электрофореза (рис.9).

Рис.9. Инфильтрация стромы роговицы (%) на 8-й день лечения.

Примечание: составлен авторами по результатам данного исследования

Электрофизические свойства вориконазола в гидрогеле МБСА

В рамках исследования было показано, что коллоидный гидрогель модифицированного бычьего сывороточного альбумина может служить транспортной средой для вориконазола, способствуя повышению его проникающей способности. Данное свойство, вероятно, обеспечивается наличием заряженных групп в полимерной молекуле альбумина, способствующим захвату молекул лекарственных препаратов, что подтверждено результатами предшествующих исследований [18, 19].

Роль БСА в качестве переносчика активно изучается в контексте повышения эффективности доставки лекарственных средств, в том числе противоопухолевых и гормональных [18].

В офтальмологии ранее были изучены особенности транссклерального электрофореза БСА, при этом показана эффективность его введения со стороны положительно заряженного электрода (анода), но отмечено, что при введении альбумина в качестве самостоятельной молекулы основной движущей силой является электроосмос, что обусловлено низким собственным зарядом на его поверхности [20].

Однако информации об использовании его в качестве транспортной среды для проведения электрофореза с противогрибковым средством в мировой литературе найдено не было.

Определение возможности повышения концентрации вориконазола в ткани роговицы при помощи электрофореза в транспортной среде МБСА (исследование ex vivo)

В ходе экспериментов на кадаверных глазах было обнаружено, что электрофорез вориконазола в гидрогеле МБСА приводит к более высоким концентрациям препарата в роговице по сравнению с обычными инстилляциями (12,85мкг/мл против 3,05 мкг/мл, p<0,05), что может обеспечить более эффективное и пролонгированное действие препарата.

Эти данные частично согласуются с результатами применения электрофореза 1% раствора вориконазола, показавшими кратное увеличение концентрации в тканях по сравнению с простыми инстилляциями [9], а также с данными, полученными при применении электрофореза вориконазола в комплексе с циклодекстрином (торговая форма лиофилизата вориконазола) и в составе липосом (синтезированная транспортная форма). Однако указанные результаты противоречивы, поскольку показано, что электрофорез приводит к повышению концентрации вориконазола в составе липосом, тогда как для простого раствора лиофилизата в физиологическом растворе NaCl 0,9% движущей силой может быть лишь электроосмос, что не может обеспечивать высокой концентрации лекарственного средства в тканях [10].

Различные методы глазного электрофореза давно и широко используются в офтальмологии. При этом ванночковый электрофорез обладает рядом преимуществ, в первую очередь за счет непосредственного контакта вводимого раствора с поверхностью роговицы, что делает его полезным при кератитах. Однако список препаратов, вводимых при помощи ванночкового электрофореза при кератитах, ограничен. В него входит ряд антибиотиков и антисептиков. Несмотря на присутствие в отечественной литературе упоминаний о применении электрофореза препаратов нистатина и леворина, электрофорез с противогрибковыми лекарственными средствами пока широко не распространен [21, 22].

Оценка эффективности электрофореза вориконазола в гидрогеле МБСА

в экспериментальных условиях in vivo

Эффективность модели заражения

В ходе исследования все лабораторные животные были успешно заражены на 7–9-е сутки от начала активной контаминации, что говорит о высокой воспроизводимости используемой методики.

При анализе клинических признаков выраженности воспаления оказалось, что как электрофорез вориконазола, так и его частые инстилляции обеспечивают схожее снижение баллов по шкале раздражения глазной поверхности. Эти результаты соответствуют исследованиям, показывающим схожую клиническую эффективность азолов в моделях кератита при частом местном применении, однако комбинированное физиотерапевтическое воздействие на фоне гидрогеля позволяет снизить частоту процедур без потери терапевтического эффекта [23].

Оценка ОКТ-критериев

Данные ОКТ-исследования на 8-е сутки лечения показали сходную динамику восстановления структуры роговицы при обеих методиках введения вориконазола: коэффициенты изменения площади среза роговицы на опытных глазах в обеих сериях были ближе к нормальным значениям, чем контрольные, однако значимой разницы между опытными глазами серии электрофореза и инстилляций не было отмечено (p>0,05), что говорит о сопоставимой эффективности обеих методик. При этом отсутствие разницы может быть объяснено меньшей чувствительностью ОКТ-исследования к минимальным изменениям структуры роговицы (разрешающая способность 5–10мкм), а также относительно малым временным промежутком исследования [24].

Гистологические критерии

Результаты морфологического исследования показали большую чувствительность к изменениям, развивающимся в ткани роговицы. Так, толщина эпителия роговицы глаза кролика в опытной группе восстанавливалась быстрее по сравнению с контролем, но при электрофорезе она была статистически меньше, чем при инстилляциях (p<0,05).

По данным литературы, токсичность для эпителия роговицы может возникать при глазном электрофорезе при чрезмерной силе тока, либо при электрофорезе агрессивных растворов [25]. В связи с этим, несмотря на то, что толщина эпителия роговицы глаза в опытной группе при применении электрофореза была больше, чем на контрольных (p<0,05), существует необходимость дальнейшего уточнения безопасной силы тока и длительности процедуры электрофореза вориконазола в гидрогеле МБСА во избежание чрезмерного раздражения глазной поверхности.

Однако при оценке инфильтрации стромы наблюдалось более выраженное снижение инфильтрации после проведения электрофореза по сравнению с простыми инстилляциями, что можно считать преимуществом данного метода.

Степень инфильтрации, по данным литературы, является одним из наиболее важных прогностических факторов, определяющих интенсивность воспалительной реакции и степень осложнений, таких как изъязвление и перфорация роговицы [26]. Снижение интенсивности инфильтрации, напротив, ассоциировано с лучшими исходами [27].

Таким образом, авторы считают данный критерий одним из показателей, определяющих преимущество использования предложенной методики электрофореза.

Ограничения исследования. В проведенном исследовании существует ряд ограничений. Первое – это ее экспериментальный характер, поскольку вся работа основана на экспериментальных моделях, что не всегда позволяет экстраполировать результаты на пациентов в реальной клинической практике.

Во-вторых, длительность наблюдения в эксперименте in vivo ограничивалась восемью сутками, а долгосрочные эффекты и возможные побочные реакции не оценивались. Кроме того, отсутствует анализ вариантов действия лечения против каких-либо грибков помимо вида Fusarium solani, данные о которых помогли бы всесторонне оценить эффективность разработанного метода.

Также существует необходимость разработки строгой стандартизации изготовления, контроля качества и стерильности гидрогеля МБСА, а также совершенствования его химико-физических параметров для минимизации раздражающего действия, что будет являться целью дальнейших исследований.

Заключение

Применение физиотерапевтического лечения в виде ванночкового электрофореза раствора вориконазола 1% в гидрогеле МБСА является одним из эффективных способов повышения концентрации противогрибкового лекарственного средства в ткани роговицы и повышает эффективность лечения грибкового кератита в экспериментальной модели, что говорит о перспективности его дальнейшего изучения для применения в клинической практике.