Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 0,936

Введение

Системное воспаление и эндогенная интоксикация являются ключевыми компонентами течения бруцеллёзной инфекции [1].

В ответ на воспаление в макроорганизме синтезируются «острофазовые реактанты» - неспецифические белки, по которым можно оценить тяжесть и прогноз заболевания [2].

В клинической практике неоптерин признан чувствительным и стабильным маркером активации клеточного звена иммунной системы, а его концентрация в биологических жидкостях отражает выраженность системного воспалительного ответа. Многообразие клинических проявлений и индивидуальные особенности физиологических и патологических реакций организма определяют сложность изучения патогенетических механизмов бруцеллёза. Бруцеллёз системное заболевание, особенностью патогенеза которого является длительная персистенция, что определяет риск хронического течения инфекционного процесса.

Неоптерин – биомаркер, синтезируемый макрофагами и моноцитами под действием интерферона гамма [3]. Уровень неоптерина в плазме крови и моче определяется активацией макрофагов, сопровождающейся образованием 7,8-дигидронеоптерина с его последующим окислением до неоптерина [4]. В исследовании [5] отмечено, что средняя концентрация неоптерина в сыворотке крови у здоровых доноров составляла 5,26 нмоль/л.

В научной литературе показано изучение неоптерина как маркера воспаления при различных аутоиммунных и инфекционных заболеваниях [6, 7]. Его концентрация в сыворотке крови служит индикатором степени активации клеточного иммунитета и может использоваться для прогнозирования течения бруцеллёза и оценки эффективности терапии [8].

В исследовании [9] установлено, что у пациентов с бруцеллёзом в ранний период заболевания отмечается значительное повышение уровня неоптерина, значение медианы – 9.26 ng/L. Это отражает воспалительную реакцию, обусловленную изменениями клеточного иммунитета при бруцеллёзе.

Неоптерин и хитотриозидаза рассматриваются как новые маркеры для мониторинга состояния пациентов с воспалительными заболеваниями, в том числе бруцеллёзом [8]. Их совместное определение может быть полезно для динамического наблюдения и оценки эффективности лечения.

Показано, что при бруцеллёзе у человека значительно повышаются уровни С-реактивного белка, sCD14 и неоптерина в сыворотке крови. Эти маркеры, как по отдельности, так и в комбинации, могут использоваться для мониторинга результатов терапии [10].

В исследовании [11] отмечено, что неоптерин маркер воспаления и окислительного стресса при атеросклерозе, сердечно-сосудистых и ревматических заболеваниях.

Интерферон-гамма (ИФН-γ) стимулирует продукцию неоптерина макрофагами. При системном воспалительном ответе отмечается прямая связь повышения уровня неоптерина с ИФН-γ [12].

Анализ научной литературы [13, 14] показал, что мониторирование уровня неоптерина имеет важное значение в оценке тяжести течения бруцеллёза.

Цель исследования – определение уровня белка острой фазы воспаления (неоптерина) и цитокина (ИФН-γ) в сыворотке крови больных острым бруцеллёзом до и после проведения антибиотикотерапии.

Материал и методы исследования

Исследован клинический материал (сыворотка крови) от 32 пациентов с лабораторно подтвержденным диагнозом острый бруцеллёз (результаты серологических реакций: реакция Райта 1:100 и выше, реакция Хеддельсона резко положительна, методом иммуноферментного анализа (ИФА) обнаружены антитела класса IgМ к возбудителю бруцеллёза).

Согласно методическим указаниям МУ 3.1./4.2.4145-25 [15] для диагностики бруцеллёза рекомендуется проводить комплексное исследование биоматериала с применением не менее 3-4-х тестов. Для диагностики острого и подострого бруцеллёза проводятся бактериологические и иммунологические исследования (реакция Райта и Хеддельсона, реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) или реакции агглютинации латекса (РАЛ), ИФА). Диагностически значимым является титр 1:100 и выше (положительный результат) в реакции Райта, РНГА, РАЛ; агглютинация не менее 2+ в реакции Хеддельсона, выявление специфических антител к возбудителю бруцеллёза в ИФА.

Биоматериал исследовали до и после проведения комплексной антибактериальной терапии (доксициклин 100 мг 2 раза в день +рифампицин 150 мг 2 капсулы в день), курс 6 недель). Группу контроля составили здоровые доноры (n=20) не переболевшие бруцеллёзом и не вакцинированные против этой инфекции.

Согласно классификации клинических форм бруцеллёза по Г.П. Рудневу (1955) проанализированы выписки из историй болезни, произведён отбор больных бруцеллёзом. Все больные острым бруцеллёзом имели среднюю степень тяжести течения болезни, в фазе компенсации.

Критерии исключения из исследования: острые инфекционные заболевания, обострение тяжелых соматических заболеваний, опухоли любой локализации, аутоиммунные заболевания, диффузные заболевания соединительной ткани. Критерии невключения в исследование: беременность, отказ в подписании добровольного информированного согласия.

Среди обследованных преобладали мужчины, при этом различие показателей в зависимости от пола в обследуемых группах не имело статистической значимости, что позволило объединить их в одну группу без учёта половой принадлежности. Большинство больных (n=23) жители сельской местности, имеющие в наличии личные подсобные хозяйства (уход за скотом, употребление молочной и мясной продукции), и лица из профессиональных групп риска (фермеры, пастухи, доярки). Возраст обследованных находился в диапазоне от 18 до 69 лет. Период выявления и наблюдения за больными острым бруцеллёзом март-ноябрь 2024-2025 гг. Основные клинические проявления бруцеллёза: лихорадка, выраженная потливость, астено-вегетативный синдром (слабость, утомляемость), артралгии, гепатоспленомегалия.

Все обследуемые дали информированное добровольное согласие на медицинское вмешательство и участие в настоящих исследованиях (согласно Федеральному закону «Об основах охраны здоровья граждан в РФ» от 21.11.2011 № 323-ФЗ, ред. от 30.12.2021). Клинические исследования одобрены локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО «Ставропольский государственный медицинский университет» Минздрава России (заключение локального этического комитета № 109 от 19 мая 2022).

Работа с клиническим материалом осуществлялась согласно требованиям санитарных правил 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней».

Анализ уровня ИФН-γ, неоптерина в сыворотке крови проводился методом твердофазного иммуноферментного анализа. Уровень неоптерина определяли с помощью тест-систем Neopterin ELISA (IBL, Hamburg), в инструкции к тест-системе указана норма неоптерина в сыворотке крови < 8,7 нмоль/л. Определение уровня ИФН-γ проводили тест-системой «Вектор-Бест», (Россия). Для доказательства нормальности распределения данных использовали критерий Колмогорова-Смирнова. По t-критерию Стьюдента оценивалась значимость различия средних значений при уровне p < 0,05. Для сравнения данных до и после лечения использован парный t-критерий.

Результаты исследования и их обсуждение

Анализ уровня неоптерина до антибиотикотерапии показал повышение относительно данных группы контроля – 15,3±1,6 нмоль/л и 3,7±0,94 нмоль/л соответственно (р < 0,05); после лечения отмечалась тенденция снижения показателя 9,6±2,3 нмоль/л (р < 0,05).

Значение ИФН-γ в сыворотке крови контрольной группы составило 3,350,6 пг/мл, у больных острым бруцеллёзом до приёма антибиотиков – 18,22±5,03 пг/мл, после завершения курса терапии – 7,99±2,03 пг/мл (р < 0,05), (табл.1, табл.2, рис. 1, рис.2).

Таблица 1

Концентрация неоптерина и ИФН-γ в сыворотке крови больных острым бруцеллёзом

Исследуемый маркер	Контрольная группа, n=20	Группа больных острым бруцеллёзом, n=32
		до антибиотикотерапии	после антибиотикотерапии
Неоптерин, нмоль/л	3,7±0,94	15,3±1,6*	9,6±2,3*
ИФН-γ, пг/мл	3,350,6	18,22±5,03*	7,99±2,03*

Примечание: *р – достоверность различий между показателями основной группы и контрольной группы

Составлена автором на основе полученных данных в ходе исследования.

Таблица 2

Исследуемый показатель	До лечения	После лечения	Средняя разница	95% доверительный интервал (ДИ)	Размер эффекта, d
Неоптерин, нмоль/л	15,3±1,6	9,6±2,3	5,7	5,0-6,4	2,85
ИФН-γ, пг/мл	18,22±5,03	7,99±2,03	10,23	8,8-11,6	2,56

Сравнительный анализ исследуемых показателей до и после лечения

Сравнительный анализ выявил статистически значимые различия с большой величиной эффекта для данных показателей, p < 0,0001.

Составлена автором на основе полученных данных в ходе исследования.

Рис. 1. Концентрация неоптерина в сыворотке крови больных острым бруцеллёзом

Составлен автором на основе полученных данных в ходе исследования

Рис. 2. Концентрация ИФН-γ в сыворотке крови больных острым бруцеллёзом

Составлен автором на основе полученных данных в ходе исследования

Анализ данных свидетельствует о выраженной активации клеточного звена иммунитета у больных с острым бруцеллёзом. Значительное повышение уровня ИФН-γ является закономерным, так как Brucella spp. внутриклеточный патоген, выживание и персистенция которого напрямую зависят от способности избегать киллинга внутри фагосом. Инвазия патогена запускает активацию клеточного иммунитета с участием Т-хелперов 1 типа (Th1), ключевым цитокином которого является ИФН-γ. Понижение уровня ИФН-γ после завершения курса антибактериальной терапии указывает на эффективное подавление инфекционного процесса и может отражать снижение воспалительного ответа после терапии. Динамика данного показателя может служить объективным критерием эффективности проводимого лечения.

Схожая тенденция наблюдается и при анализе концентрации неоптерина. Исходно повышенный уровень этого метаболита по сравнению с контролем подтверждает наличие системного воспалительного ответа. Снижение концентрации данного показателя после антибиотикотерапии свидетельствует о положительной динамике заболевания.

Заключение

На фоне внутриклеточного паразитизма бруцеллы длительно персистируют в макроорганизме, вызывая развитие воспалительных реакций, которые при бруцеллёзной инфекции слабоманифестны. Ввиду относительно длительного, но умеренного воспаления при бруцеллёзе под действием цитокина (ИФН-γ) отмечается повышение концентрации маркера функционального состояния моноцитарно-макрофагального звена иммунной системы (неоптерина). Потенциальная прогностическая роль данных показателей требует отдельного проспективного исследования.

Таким образом, неоптерин и ИФН-γ являются маркерами активности иммунного ответа, запускающими развитие системного воспалительного ответа при остром бруцеллёзе. Определение концентрации неоптерина и ИФН-γ может рассматриваться как дополнительный лабораторный критерий оценки выраженности воспаления при остром бруцеллёзе; клиническая и прогностическая значимость данных показателей требует дальнейшей валидации.

The author declare that there is no conflict of interest.

The author expresses gratitude to O. G. Golub, head of the department for diagnostics, treatment and examination of occupational pathology of brucellosis, infectious disease specialist of the State Budgetary Healthcare Institution of the Stavropol Territory “City Clinical Hospital No. 2”, Stavropol, for the opportunity to examine clinical material from patients with acute brucellosis.

The research was performed without external funding.