Scientific journal

Modern problems of science and education

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 0,936

Введение

Среди социально значимых патологий алкогольная болезнь печени (АБП) занимает одно из ведущих мест [1-3]. Ежегодно в России более 20% смертей обусловлены злоупотреблением алкоголем, а в глобальном масштабе свыше 300 миллионов человек страдают от расстройств, вызванных его токсическим воздействием. Важную роль в развитии АБП имеют факторы риска: злоупотребление алкоголем, генетическая предрасположенность, этническая принадлежность, пол, применение некоторых лекарственных средств (ЛС). Алкоголизм – актуальная проблема и среди молодёжи: с каждым годом их зависимость от спиртных напитков увеличивается [4; 5]. Алкоголизм наносит серьезный удар по здоровью нации, приводя к росту числа людей с ограниченными возможностями и снижению общей работоспособности на 10-15%. Сегодня особенно остро стоит вопрос о создании собственных, эффективных и безопасных лекарств, которые помогут улучшить лечение АБП [6-8]. Ключевыми моментами в борьбе с этим недугом являются раннее обнаружение, правильное лечение и профилактика возможных осложнений со стороны печени [9; 10].

Целью исследования – оценка гепатопротекторного эффекта гинкго двулопастного листьев экстракта путем анализа изменений в белковом, углеводном, пигментном и липидном метаболизме у крыс с индуцированным этанолом повреждением органа.

Материалы и методы исследования

Влияние на белковый, липидный, углеводный и пигментный обмены при экспериментальном алкогольном поражении печени изучалось на 24 самках белых крыс линии Wistar (масса 180-200 г) из питомника Пятигорского медико-фармацевтического института (ПМФИ). На протяжении двух недель до начала эксперимента животные содержались на стандартном рационе вивария. Далее белых крыс разделили по 6 животных на 4 группы. В качестве объекта исследования использовали таблетки препарата гинкго двулопастного листьев экстракта. Серия: А58672. Регистрационный номер: П N011709/01. Произведено: «Бофур Ипсен Индастри», Франция, 04.2023. Препаратом сравнения послужил экстракт плодов расторопши пятнистой, серия 5N24 («Софарма» АО, Болгария).

Дизайн эксперимента для изучения влияния различных веществ в условиях алкогольнойнагрузки включал четыре группы животных: 1) интактная группа - животные, не подвергавшиеся каким‑либо воздействиям; 2) контрольные животные, которым две недели ежедневно вводился перорально 40%-ный раствор этанола в дозе 5 г/кг массы тела [11]; 3) экспериментальные животные, которые получали перорально суспензию экстракта листьев гинкго двулопастного. Дозировка составляла 10 мг/кг, что было рассчитано на основе средней терапевтической дозы для человека с учетом коэффициента пересчета между видами (5,9) [12, с. 562; 13, с. 57]. Введение суспензии производилось ежедневно на протяжении 14 дней. За час до приема экстракта животным вводили 40%-ный раствор этанола в дозе 5 г/кг, также в течение двух недель [14]; 4) экспериментальная группа 2 (группа сравнения). Животные этой группы 14 дней ежедневно принимали перорально суспензию измельченных драже экстракта плодов расторопши пятнистой в эффективной дозе 100 мг/кг, оказывающей гепатопротекторное действие [15]. За час до введения суспензии им также вводился 40%-ный раствор этанола в дозе 5 г/кг на протяжении всех двух недель исследования.

На 15-й день эксперимента у всех грызунов производилось взятие крови из бедренной артерии и забор образцов печеночной ткани. Для анестезии применялся раствор хлоралгидрата, вводимый внутрибрюшинно в дозе 350 мг/кг. Данная процедура проводилась с целью эвтаназии, что соответствовало нормам Европейской конвенции по содержанию и использованию экспериментальных животных (86/609/ЕЕС). Кроме того, процедура осуществлялась в соответствии с рекомендациями этического комитета ПМФИ (протокол №2 от 18.02.2025 г.).

Сведения о лабораторном исследовании. В сыворотке крови определяли следующие показатели: содержание холестерина, триглицеридов (ТРГ), липопротеинов низкой плотности (β-ЛПНП) и пред-β-липопротеинов (пре-β-ЛПНП), липопротеинов высокой плотности (α-ЛПВП), общего содержания белка, его отдельных фракций (альбуминов и глобулинов), а также общего билирубина и его составляющих. В образцах печёночного гомогената выполняли количественный анализ содержания триглицеридов (ТРГ) и гликогена. Определение ТРГ проводили колориметрическим методом по Gottfried и Roserberg в модификации Н. А. Сентебовой. Концентрацию гликогена определяли колориметрически - по реакции с фенолом в кислой среде после проведения щелочного гидролиза гликогена [16, с.156, 184). Гомогенат печени готовили на 0,9% растворе хлорида натрия в соотношении 1:8. Для определения биохимических показателей применялись валидированные методики и коммерческие наборы реагентов [16, с. 283-298].

Статистическое исследование: для каждой группы были определены средний показатель (M) и стандартная ошибка среднего (m), а также количество наблюдений (n), что отражено в табличных данных. Статистический анализ выявил, что все экспериментальные группы демонстрировали результаты, соответствующие нормальному распределению. Для подтверждения значимости полученных в ходе исследования результатов был использован параметрический подход с применением t-критерия Стьюдента. Результаты считались статистически значимыми при уровне вероятности p в диапазоне от 0,001 до 0,05. Обработка статистических данных производилась посредством программного комплекса Stat Plus 2009.

Результаты исследования и их обсуждение

Воспроизведение модели алкогольного поражения печени у белых крыс сопровождалось значительным повышением в сыворотке крови концентрации холестерина, ТРГ, β- и пре-β-липопротеинов, билирубина, снижением содержания α-липопротеинов, общего белка и белковых фракций, а также увеличением в гомогенате печени уровня ТРГ и снижением содержания гликогена, о чем свидетельствовали результаты эксперимента [17]. Исследование показало, что у животных из контрольной группы наблюдалось повышение уровня холестерина в плазме на 33,3% в сравнении с показателями интактных животных. Введение экстракта листьев гинкго двулопастного и экстракта плодов расторопши пятнистой привело к снижению концентрации холестерина в сыворотке крови на 25,4% и 29,6% соответственно по сравнению с контролем. Тем не менее статистически значимой разницы в воздействии исследуемого препарата и средства сравнения на уровень холестерина в сыворотке крови выявлено не было (табл.).

Исследование воздействия экстракта листьев гинкго двулопастного на метаболические процессы в сыворотке крови и печеночном гомогенате крыс с индуцированной алкоголем патологией печени

Исследуемые показатели	Интактные крысы	Контрольные крысы, получавшие этиловый спирт		Крысы, получавшие экстракт листьев гинкго двулопастного	Крысы, получавшие экстракт плодов расторопши пятнистой
n= 6	M± m
Гомогенат печени
ТРГ, мкмоль/г	19,9±0,89		51,6±3,18 +159,3%, р<0,001	35,60±2,27 -31%, р<0,01	28,17±1,65 -47,3%, <0,001
Гликоген, г/кг	6,84±0,28		5,12±0,32 -25,1%, р<0,01	6,27±0,54 +22,4%, p<0,5	6,69±0,25 +26,8%, <0,05
Сыворотка крови
ТРГ, ммоль/л	0,80±0,057		2,83±0,32 +253,75%, p<0,001	1,94±0,11 -31,4%, p<0,05	1,76±0,14 -37,8%, p<0,05
Холестерин, ммоль/л	1,8±0,16		2,4±0,17 +33,3%, p<0,05	1,79±0,16 -25,4%, p<0,05	1,69±0,15 -29,6%, p<0,05
β- и пре-β-липопротеины, г/л	0,89±0,07		3,1±0,25 +248,3%, p<0,001	2,62±0,22 -15,5%, p<0,5	2,56±0,27 -17,4%, p<0,5 ○
α-липопротеины, ммоль/л	0,69±0,03		0,35±0,02 -49,2%, p<0,001	0,42±0,027 +20%, p<0,5	0,57±0,029 +23,8%, <0,05 □
Общий билирубин сыворотки крови, мкмоль/л	9,6±1,68		16,7±1,63 +74%, p<0,05	10,7±1,11 -36%, p<0,05	9,4±0,73 -43,7%, p<0,01
Прямой билирубин сыворотки крови, мкмоль/л	3,4±0,53		6,3±0,60 +85,3%, p<0,05	4,1±0,46 -34,9%, p<0,05	3,6±022 -42,8%, p<0,01
Свободный билирубин	6,2±0,75		10,4±1,12 +67,7%, p<0,05	6,6±0,56 -36,5%, p<0,05	5,8±0,48 -44,2%,p<0,05
Общий белок, г/л	74,6±0,67		47,6±4,2 -36,2%, p<0,001	64,2±3,1 +34,9%,p<0,05	70,3±3,4 +47,7%,p<0,01
Альбумины, г/л	45,9±3,8		20,4±1,9 -55,5%, p<0,001	35,7±2,4 +75%, p<0,01	43,6±4,1 +113,7%,p<0,01
Глобулины, г/л	28,7±0,29		27,2±2,38 -5,22%, p>0,5	28±3,5 +2,94%, p>0,5	26,7±2,8 -1,83%, p>0,5 ◇

Примечание: таблица составлена авторами на основе полученных данных в ходе исследования. Данные, представленные в контрольной группе, сравниваются с результатами интактных крыс; данные, полученные при введении экстракта листьев гинкго двулопастного и экстракта плодов расторопши пятнистой, сравниваются с контрольной группой.

Исследование показало, что при пероральном приеме этанола у контрольных животных наблюдалось статистически значимое увеличение уровня ТРГ в плазме крови на 253,8% по сравнению с интактными животными. Экстракты листьев гинкго двулопастного и плодов расторопши пятнистой оказывали нормализующее действие при патологии, снижая концентрацию ТРГ в сыворотке крови на 31,4% и 37,8% соответственно по сравнению с контролем. В экспериментальной модели заболевания было выявлено существенное повышение уровня β- и пре-β-липопротеинов в плазме крови у контрольных животных – на 248,3% в сравнении с интактными. Применение экстракта из листьев гинкго двулопастного у животных, страдающих экспериментальной гепатопатией, продемонстрировало тенденцию к снижению содержания β- и пре-β-липопротеинов в сыворотке крови на 15,5% по сравнению с контрольной группой. Аналогично, экстракт из плодов расторопши пятнистой при тех же условиях эксперимента не привел к статистически значимому снижению уровня β- и пре-β-липопротеинов, показав снижение на 17,4% (табл.).

У контрольной группы животных отмечено существенное снижение уровня α-липопротеинов в плазме крови – на 49,2% в сравнении с интактными особями. Экстракт листьев гинкго двулопастного, введенный опытным животным, вызвал небольшое увеличение концентрации α-липопротеинов на 20% относительно контрольных показателей, но эта разница не достигла статистической значимости. При этом в группе животных, получавших экстракт плодов расторопши пятнистойв условиях гепатопатии, было выявлено увеличение содержания α-липопротеинов на 23,8% по сравнению с контрольными животными (табл.).

Алкогольное повреждение печени привело к нарушениям в метаболизме белков. По истечении двух недель экспозиции этанолом уровень общего белка в плазме крови у подопытных животных снизился на 36,2% в сравнении с показателями интактной группы. Введение экстракта листьев гинкго двулопастного животным с печеночной патологией оказало влияние на этот процесс: концентрация общего белка повысилась на 34,9% относительно контрольной группы. Однако препарат сравнения показал еще более выраженный нормализующий эффект, увеличив этот показатель на 47,7%.

Концентрация в сыворотке крови альбуминов у животных с этаноловой гепатопатией существенно понизилась на 55,5% по сравнению с уровнем показателя животных интактной группы. В отличие от контрольных опытов введение экстракта листьев гинкго двулопастного и в большей степени экстракта плодов расторопши пятнистойобусловило значительное увеличение содержания альбуминов соответственно: на 75% и на 113,7%. При экспериментальной модели алкогольной гепатопатии не было выявлено значимых изменений в концентрации глобулинов в сыворотке крови как у контрольной группы крыс, так и в опытных группах.

Токсическое действие этанола оказало влияние и на пигментный обмен. В группе контрольных животных введение этанола вызвало, по сравнению с интактными животными, значительное увеличение общего билирубина в сыворотке крови на 74%. Под влиянием введения гинкго двулопастного листьев экстракта у опытных животных имело место снижение концентрации общего билирубина на 36%. Введение экстракта плодов расторопши пятнистойвызвало более заметное снижение общего билирубина на 43,7%. У контрольных животных было отмечено существенное увеличение уровней прямого и свободного билирубина – на 85,3% и 67,7% соответственно, по сравнению с интактной группой. В группах, получавших экстракт листьев гинкго двулопастного, наблюдалось обратное явление: прямой и свободный билирубин снизился на 34,9% и 36,5% соответственно, в сравнении с контрольной группой. Экстракт плодов расторопши пятнистой продемонстрировал более выраженное действие, чем экстракт гинкго, приведя к снижению прямого и свободного билирубина на 42,8% и 44,2% соответственно, относительно контрольных показателей. Анализ уровня ТРГ в гомогенате печени у контрольных животных выявил значительное его возрастание на 159,3% по сравнению с интактными. Эти данные указывают на то, что алкогольная интоксикация вызывала развитие липидоза печени. Введение опытным группам экстракта листьев гинкго двулопастного и экстракта плодов расторопши пятнистой сопровождались снижением содержания ТРГ в гомогенате печени соответственно на 31% и 47,3%. Эффект препарата сравнения немного превосходил действие исследуемого препарата. Введение этанола контрольным животным обусловило снижение гликогена в печени на 25,1% по сравнению с интактными, а введение гинкго двулопастного листьев экстракта и экстракта плодов расторопши пятнистойсопровождалось повышением уровня гликогена в печени на 22,4% и 26,8% соответственно (табл.).

Заключение

Двухнедельное пероральное введение экстракта листьев гинкго двулопастного в дозировке 10 мг/кг показало способность восстанавливать нарушенные метаболические процессы у крыс с моделированной алкогольной болезнью печени. Гепатопротекторный эффект заключается в снижении холестерина, ТРГ и билирубина и повышении общего белка и альбуминов в сыворотке крови, уменьшении уровня ТРГ в печеночном гомогенате у животных с индуцированной патологией. При этом не выявлено статистически значимого влияния экстракта на концентрацию альфа‑липопротеинов и глобулинов в сыворотке крови, содержание гликогена в гомогенате печени. Исследование имеет практическую ценность, поскольку расширяет представление о фармакологической активности экстракта листьев гинкго двулопастного и подтверждает его нормализующее действие на метаболизм при экспериментальном поражении печени.