Введение. Современная динамика применения синтетических лекарственных средств в практической медицине и фармации влечет за собой нежелательный рост системных нарушений в организме, связанных с использованием данных средств.
Патологии печени и почек наиболее часто возникают в результате применения разнообразных групп лекарственных средств, включая нестероидные противовоспалительные препараты, цитостатики, сульфаниламиды, антибиотики, диуретики, ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента и др. [1, с. 129–137]. Однако, несмотря на широкий выбор синтетических лекарственных препаратов, интерес к фитотерапии не угасает. Это связано с тем, что комплексные биологически активные вещества, извлеченные из растений, имеют низкий уровень токсичности и обеспечивают более щадящее воздействие на организм [2]. Для профилактики и лечения печеночных и почечных нарушений имеется широкий спектр биологически активных веществ, метаболически приближенных к живому организму, обеспечивающих повышение резистентных механизмов и функциональных резервов жизненных систем [3, с. 897].
Актуальными являются создание растительных препаратов комплексного действия и изучение их особенностей при патологических процессах, протекающих в печени, а также приводящих к нарушению работы мочеполовой системы. Одним из растений, обладающих таким потенциалом, является яснотка пурпурная – Lamium purpureum L. (крапива красная). Это растение широко распространено по всей территории России и часто используется в гомеопатической практике и народной медицине для лечения различных заболеваний, затрагивающих разные органы и системы [4, с. 46].
Цель данного исследования заключается в сравнительной оценке влияния 20%-ного спиртового экстракта травы яснотки пурпурной и расторопши пятнистой плодов экстракта на антиоксидантную систему печени, а также на функциональные параметры почек при повреждении печени тетрахлорметаном.
Материалы и методы исследования
20%-ное спиртовое извлечение травы яснотки пурпурной представляет собой прозрачную жидкость бурого цвета со слабым своеобразным запахом и горьковато-вяжущим вкусом. При фитохимическом анализе травы яснотки пурпурной установлено наличие следующих биологически активных веществ: флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот, в том числе кислоты аскорбиновой [5, с. 524].
В рамках исследования было задействовано 5 групп животных, по 6 особей в каждой: 1) интактная группа получала 0,9%-ный раствор натрия хлорида в равных объемах с исследуемым веществом; 2) контрольная группа (К1) получала аналогичный объем 0,9%-ного раствора натрия хлорида и тетрахлорметана (CCl4), 3) контрольная группа (К2) – 20%-ного этанола и CCl4, 4) расторопши пятнистой плодов экстракт совместно с ССl4, 5) 20%-ное спиртовое извлечение травы яснотки пурпурной с ССl4. При совместном введении с ССl4 20%-ное спиртовое извлечение травы яснотки пурпурной, 20%-ный спирт этиловый и расторопши пятнистой плодов экстракт вводились за 1 час до применения CCl4. Для моделирования острого CCl4-гепатоза использовали пероральное введение через зонд 50%-ного раствора CCl4 в вазелиновом масле в дозе 0,3 мл на 100 г массы тела животного трижды с интервалом в один день [6]. Исследуемое извлечение вводили по лечебно-профилактической схеме в дозе 2,2 мл/кг. В качестве препарата сравнения был применен расторопши пятнистой плодов экстракт на основе флавоноидов в дозировке 18 мг/кг, с учетом пересчета максимальной суточной дозы для человека на крысу по межвидовому коэффициенту 5,9.
Антиоксидантная активность в печени при ее повреждении CCl4 была изучена в экспериментах на белых беспородных крысах-самках линии Wistar массой от 180 до 200 г, находившихся в стандартных условиях вивария [7, с. 118]. Для оценки степени интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) использовали результаты анализа комплексных окрашенных соединений с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-активные продукты) в гомогенате печени и крови, а также концентрацию диеновых коньюгатов (ДК) в печени, полученные по стандартным методикам. Диуретическая активность изучалась за сутки до забоя после введения исследуемых объектов по лечебно-профилактической схеме путем сбора мочи у животных, помещенных в специальные устройства – мочесборники. Измеряли объем собранной мочи через 5 и 24 часа [7, с. 219]. Водную 2,5%-ную нагрузку осуществляли реr оs непосредственно перед опытом. Эксперименты над животными проводили в соответствии: с Директивой Европейского парламента и Совета Европейского Союза 2010/63/ЕС от 22.09.2010 г. о защите животных, использующихся для научных целей, с Федеральным законом от 27.12.2018 № 498-ФЗ (ред. от 27.12.2019) «Об ответственном обращении с животными и о внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации», а также с учетом рекомендаций этического комитета Пятигорского медико-фармацевтического института о проведении экспериментального исследования (протокол № 4 от 19.04.2024 г.).
При исследовании образцов мочи животных были изучены некоторые физико-химические характеристики, такие как цвет, степень прозрачности, запах, плотность и уровень pH. Также проводили обнаружение ряда патологических веществ в моче, включая белки, глюкозу, кетоновые тела (ацетон), гемоглобин, желчные пигменты, нитриты и лейкоциты [8, с. 147]. Оценку цвета и прозрачности осуществляли визуально. Удельный вес, pH и наличие патологических компонентов в моче определяли с помощью качественных диагностических тест-полосок и автоматического анализатора мочи CL-50.
Забор биологического материала (крови и ткани печени) осуществляли после декапитации животных через сутки после последнего введения исследуемых веществ и гепатотоксиканта. В качестве наркоза был использован хлоралгидрат в дозе 350 мг/кг. Статистический анализ результатов был проведен с помощью программного обеспечения BioStat-2009, разработанного компанией Analist Soft Ins. (США). Для каждой группы были рассчитаны среднее значение (M) и стандартная ошибка среднего (m), которые наряду с количеством наблюдений (n) представлены в таблицах. Для оценки достоверности результатов исследования использовали параметрический метод с применением t-критерия Стьюдента. Уровень статистической значимости составлял р<0,001–0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
В проведенных И.Л. Абисаловой с соавторами исследованиях было показано, что при воспроизведении ССl4-гепатоза произошло развитие синдрома цитолиза и холестаза. Лечебно-профилактическое введение 20%-ного спиртового извлечения травы яснотки пурпурной на фоне поражения тетрахлорметаном привело к восстановлению функций печени, сопоставимому с действием расторопши пятнистой плодов экстракта [9].
При продолжении исследования в этом направлении в настоящей работе было выявлено, что при поражении печени CCl4 наблюдалось снижение ТБК-активных продуктов и ДК в печени на 57% и 68% соответственно, а содержание ТБК-активных продуктов в сыворотке повысилось на 144% (К1). Также отмечено в случае введения тетрахлорметана с 20%-ным раствором спирта этилового снижение ТБК-активных продуктов и ДК в печени на 71% и 60% соответственно, а содержание ТБК-активных продуктов в сыворотке повысилось на 109% (К2) по сравнению с нормой. Такие изменения связаны с истощением запасов системы антиоксидантной защиты организма на фоне ее токсического поражения. У крыс, получавших 20%-ное спиртовое извлечение травы яснотки пурпурной при поражении печени CCl4, сохранялось незначительное снижение ТБК-активных продуктов и ДК в печени (на 28% и 6% соответственно по сравнению с нормой), а содержание ТБК-активных продуктов в сыворотке повысилось на 41%. По отношению к контрольной группе животных (К2) показатели были нивелированы и имели следующие значения: содержание ТБК-активных продуктов увеличилось на 85%, а ДК в печени на – 135%, при этом содержание ТБК-активных продуктов в сыворотке понизилось на 44%. Введение расторопши пятнистой плодов экстракта в дозе 18 мг/кг при поражении печени CCl4 привело к увеличению на 100% и 210% по отношению к контролю (К1) показателей ТБК-активных продуктов и ДК в печени соответственно, значения ТБК-активных продуктов в сыворотке оставались сниженными на 52%. Содержание ТБК-активных продуктов и ДК в печени оставалось незначительно пониженным – на 14% и 2% соответственно по сравнению с нормой, а содержание ТБК-активных продуктов в сыворотке повысилось на 16%. Данные изменения не были статистически значимыми. Результаты исследования представлены в таблице 1.
Таблица 1
Анализ воздействия лечебно-профилактического использования 20%-ного спиртового экстракта травы яснотки пурпурной в сравнении с расторопши пятнистой плодов экстрактом при экспериментальной патологии печени, возникшей под воздействием CCl4, на показатели интенсивности ПОЛ
|
Показатели |
Интактные 0,9%-ный раствор натрия хлорида
|
Экспериментальные группы |
|||
|
0,9%-ный раствор натрия хлорида + CCl4 (К1)
|
20%-ный спиртовый р-р +CCl (К2)
|
Расторопши пятнистой плодов экстракт 18 мг/кг + CCl4
|
20%-ный спиртовый р-р яснотки пурпурной 2,2 мл/кг + CCl4
|
||
|
ТБК-активные продукты сыв. крови, мкмоль/л |
1,37±0,022
|
3,34±0,085 Ри<0,01 +144%
|
3,46±0,011 Ри<0,01 +109%
|
1,59±0,042 Ри>0,05 +16% Рк1<0,01 -52% |
1,94±0,046 Ри <0,01 +41% Рк2 <0,01 –44%
|
|
ТБК-активные продукты печени, нмоль/мг белка |
0,21±0,019
|
0,09±0,035 Ри<0,01 –57 %
|
0,06±0,013 Ри<0,01 –71% |
0,18±0,016 Ри>0,05 –14% Рк1<0,01 +100% |
0,15 ±0,073 Ри >0,05 –28% Рк2 >0,1 +85%
|
|
ДК печени, нмоль/мг белка |
3,54±0,241
|
1,12 ±0,341 Ри<0,01 –68%
|
1,42±0,331 Ри<0,01 –60% |
3,47±0,232 Ри>0,05 –2% Рк1<0,01 +210% |
3,33 ±0,390 Ри >0,05 –6% Рк2 <0,01 +135%
|
Примечание: Ри – статистически значимо по отношению к интактным (норма) животным; Рк1 – статистически значимо по отношению к животным, получавшим CCl4 и 0,9%-ный физраствор, Рк2 – статистически значимо по отношению к животным, получавшим 20%-ный спирт этиловый и CCl4 (К2).
Полученные данные позволяют предположить, что вызванные нарушения антиоксидантной системы печени, обусловленные введением CCl4, были устранены лечебно-профилактическим применением 20%-ного спиртового извлечения травы яснотки пурпурной.
Исследование образцов мочи животных экспериментальных групп при введении 20%-ного спиртового извлечения травы яснотки пурпурной при экспериментальной патологии печени, вызванной CCl4, выявило некоторые изменения ее физико-химических свойств.
Моча животных контрольных групп (К1) и (К2) имела интенсивную желтую опалесцирующую окраску, характерный запах. Исследование количества эритроцитов с помощью тестовых полосок показало их отсутствие в моче крыс экспериментальных группах, которые получали 20%-ный спиртовый раствор яснотки пурпурной и расторопши пятнистой плодов экстракт. В то же время в контрольных группах наблюдалось умеренное развитие гематурии и лейкоцитурии, что сопровождалось увеличением количества лейкоцитов. В большинстве случаев их количество варьировало от 5 до 30 клеток на 1 мкл.
Исследование химического состава мочи у групп животных, получавших 20%-ный спиртовый экстракт травы яснотки пурпурной и расторопши пятнистой плодов экстракта в условиях экспериментальной патологии печени, вызванной ССl4, показало, что в моче отсутствуют патологические элементы, такие как глюкоза, белок, кетоны и билирубин (табл. 2). Уровень уробилиногена оставался в пределах нормы. Окрашивание индикаторных полос, предназначенных для определения количества лейкоцитов и эритроцитов, указало на отсутствие этих клеток в образцах мочи. Полученные результаты подтверждают, что патологии не выявлено [3, с. 129].
Таблица 2
Влияние 20%-ного спиртового извлечения травы яснотки пурпурной на некоторые показатели мочи при экспериментальной патологии печени, обусловленной действием CCl4
|
Показатели |
Интактные 0,9%-ный раствор натрия хлорида
|
Экспериментальные животные |
|||
|
0,9%-ный раствор натрия хлорида + CCl4 (К1)
|
20%-ный спиртовый р-р +CCl (К2)
|
Расторопши пятнистой плодов экстракт 18 мг/кг + CCl4 |
20%-ный спиртовый р-р яснотки пурпурной 2,2 мл/кг + CCl4
|
||
|
Удельный вес |
1,017±0,0011
|
1,015 ±0,0012 Ри <0,001 –0,2%
|
1,014 ±0,0011 Ри <0,001 –0,3%
|
1,017 ±0,0013 Рк1<0,01 +0,1% |
1,017 ±0,0012 Рк2 <0,001 +0,3% |
|
Нитриты |
_ |
_ |
+ |
_ |
_ |
|
рН |
7,4±0,10 |
6,9±0,24 Ри <0,001 –7%
|
6,8±0,18 Ри <0,001 -8%
|
7,4±0,22 Рк1 <0,001 +7% |
7,3±0,23 Ри >0,001 Рк2 <0,001 +7% |
|
Белок, г/л |
_ |
+ |
+ |
_ |
_ |
|
Глюкоза, ммоль/л |
_ |
+ |
_ |
_ |
_ |
|
Кетоновые тела, ммоль/л |
_ |
+ |
+ |
_ |
_ |
|
Уробилиноген |
_ |
+ |
+ |
_ |
_ |
|
Кровяные пигменты |
_ |
+ |
+ |
_ |
_ |
|
Лейкоциты |
-_ |
+ |
+ |
-_ |
_- |
|
Примечания: Ри – статистически значимо по отношению к интактным (норма) животным; Рк1 – статистически значимо по отношению к животным, получавшим CCl4 и 0,9%-ный физраствор, Рк2 – статистически значимо по отношению к животным, получавшим 20%-ный спирт этиловый и CCl4 (К2). |
|||||
Изучение интенсивности диуреза после 2,5%-ной водной нагрузки показало, что на фоне экспериментальной патологии печени за 5 и 24 часа в контрольных группах животных (К1) и (К2) произошло снижение диуреза на 54%; 58% и 55%; 57% соответственно. В данной ситуации снижение диуреза связано с развитием аномальных реакций со стороны печени и почек у животных, что указывает на наличие олигоурии в результате токсического воздействия CCl 4 на эти органы. В опытной группе животных, получавших 20%-ное спиртовое извлечение травы яснотки пурпурной, статистически значимо увеличился диурез даже по сравнению с интактными животными за 5 и 24 часа – на 12 % и 36% соответственно. Данные результаты представлены в таблице 3.
Таблица 3
Влияние 20%-ного спиртового извлечения травы яснотки пурпурной на диуретическую активность при экспериментальной патологии печени, вызванной CCl4
|
Показатели |
Интактные 0,9%-ный раствор натрия хлорида
|
Экспериментальные животные |
|||
|
0,9%-ный раствор натрия хлорида + CCl4 (К1)
|
20%-ный спиртовый р-р +CCl (К2)
|
Расторопши пятнистой плодов экстракт 18 мг/кг + CCl4
|
20%-ный спиртовый р-р яснотки пурпурной 2,2 мл/кг + CCl4
|
||
|
Общее количество мочи, за 5 часов, мл |
4,8±0,19 |
2,2±0,17 Ри<0,01 –54% |
2,0±0,16 Ри<0,01 –58% |
3,8±0,19 Ри<0,01 –21% Рк1>0,05 +72% |
5,4±0,15 Ри<0,01 +12% Рк2>0,05 +170% |
|
Общее количество мочи, за 24 часа, мл |
9,4±0,28 |
4,2±0,17 Ри<0,01 –55% |
4,0±0,17 Ри<0,01 –57% |
7,5±0,19 Ри<0,01 -20% Рк1>0,05 +78% |
12,8±0,39 Ри<0,01 +36% Рк2>0,05 +220% |
|
Примечания: Ри – статистически значимо по отношению к интактным (норма) животным; Рк1 – статистически значимо по отношению к животным, получавшим CCl4 и 0,9%-ный физраствор, Рк2 – статистически значимо по отношению к животным, получавшим 20%-ный спирт этиловый и CCl4 (К2). |
|||||
Проведенные исследования показали, что 20%-ное спиртовое извлечение травы яснотки пурпурной обладает мочегонным действием, о чем свидетельствует увеличение объема собранной мочи уже через 5 и 24 часа эксперимента (на 170% и 220% соответственно по сравнению с контролем (К2)), расторопши пятнистой плодов экстракт обладает менее выраженным мочегонным действием.
Заключение
Лечебно-профилактическое применение 20%-ного спиртового извлечения травы яснотки пурпурной и расторопши пятнистой плодов экстракта на фоне патологии печени, вызванной тетрахлорметаном, выявило недостоверные отличия показателей у экспериментальных групп животных. Оно приводит к активированию одного из защитных печеночных механизмов – антиоксидантной системы. Полученные результаты исследования биохимического состава мочи при патологии CCl4 в группах К1 и К2 продемонстрировали изменения, которые привели к появлению кровяных пигментов, уробилиногена в моче, о чем свидетельствуют повреждение почечной паренхимы и развитие олигурии. Лечебно-профилактическое введение 20%-ного спиртового извлечения травы яснотки при экспериментальной патологии печени и почек, вызванной CCl4, привело к снижению интенсивности ПОЛ в печени и нормализации экскреторной почечной активности. Данные восстановительные механизмы были сопоставимы с показателями референтного средства. Следует отметить целесообразность применения 20%-ного спиртового извлечения травы яснотки пурпурной в качестве средства, обладающего умеренным диуретическим и антиоксидантным действием.