Ретроспективный анализ литературных данных как отечественных, так и зарубежных исследователей, свидетельствует о широкой распространённости заболеваний пищеварительной системы у собак и кошек [1,8]. Заболевания пищеварительной системы у мелких домашних животных составляют до 50 % от всех патологий незаразной этиологии [2]. Среди заболеваний пищеварительной системы достаточно часто регистрируются различные патологии печени. Нарушения в работе печени приводят к значительным нарушениям гомеостаза. Этот орган является центральным органом метаболизма, активно участвует в пищеварении, детоксикации ядовитых веществ [5,9].
К сожалению, в ветеринарной медицине существует недостаточное количество эффективных и доступных по цене препаратов для лечения патологий печени. Все это делает актуальным поиск эффективных средств или их комбинаций, позволяющих осуществить эффективную терапию заболеваний печени. Необходимо учесть, что сейчас основными направлениями в гуманной и ветеринарной медицине является разработка способов адресной доставки лекарственных веществ [4,6], разработка современных экспресс методов диагностики заболеваний различной этиологии [7]. Кроме того, научным сообществом уделяется особое внимание разработке новых лекарственных средств или их комбинаций, обладающих комплексным профилактическим и терапевтическим потенциалом, которые позволили бы осуществить эффективную терапию и снизить риск возникновения заболеваний внутренних органов [10]. При этом важно, чтобы лекарственные средства были нетоксичны и обладали высокой биодоступностью [3].
В этой связи нами была разработана мицеллярная форма гепатопротекторного препарата на основе экстракта плодов расторопши пятнистой (силимарина), витамина Е и метионина для орального применения.
Цель исследования. Целью экспериментальной работой являлось подтверждение терапевтических свойств и изучение влияния разработанного препарата «Гепасейв-плюс» на общее клиническое состояние, гематологические и биохимические показатели, а также на функциональное состояние печени и почек у собак и кошек.
Материалы и методы исследований.
Исследуемый объект - комбинированный гепатопротекторный препарат «Гепасейв-плюс» для орального применения, имеющий в своем составе экстракт плодов расторопши пятнистой (силимарин), витамин Е, метионин и вспомогательные компоненты (фосфотидилхолин, лактулоза, кремофор, бензиловый спирт и дистиллированную воду).
Исследования проводились в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985), «Методическими указаниями по гигиенической оценке новых пестицидов» (Киев, 1988), методическими рекомендациями Фармакологического Государственного комитета («Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», Москва, 2005) и приказа МЗ РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики». Эксперименты проводили на мелких домашних животных (собаки и кошки), поступивших на обследование и лечение в ветеринарную клинику «Doctor-Vet» и в лабораторию «Лучевой диагностики и лучевой терапии» при кафедре «Терапия, акушерство и фармакология» ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова» (г. Саратов).
Для проведения терапевтической эффективности препарата «Гепасейв-плюс» на кошках, были подобраны 20 животных (кошек) в возрасте от 8 до 15 лет с заболеваниями гепатобилиарной системы. У животных наблюдали анорексию, частые или периодические позывы к рвоте, расчесы в области корня хвоста и холки, дегидратацию, иктеричность слизистых оболочек.
Все животные подвергались комплексному обследованию, которое включало в себя клиническое исследование, биохимический анализ крови, УЗ-диагностику. Инфекционные заболевания исключали при помощи диагностических тест систем «ВетЭксперт». Биохимические исследования проводили на биохимическом анализаторе «МindrayBA-88A» с использованием диагностических систем фирмы «Ольвекс диагностикум» и «Диакон ДС». Ультразвуковую диагностику проводили на портативном ультразвуковом сканере марки «Logiq 400 CFM» и «Мindray DP-6900» с использованием с микроконвексных датчиков частотой 3,5-8 МГ.
При проведении исследований животным был поставлен диагноз - хронический (неинфекционный) гепатит в стадии обострения. Животных делили на две группы по 10 животных - опытную и контрольную. Животные обеих групп получали следующую базисную схему лечения: глюкоза 5 % по 50,0 мл в/в капельно 1 раз в день - 5 дней; цианокобаламин по 500 мкг в/м 1 раз в 2 дня - 6 инъекций; преднизолон по 0,3 мл в/м 2 раза в день 3 дня, по 0,1 мл в/м 2 раза в день - 3 дня; дротаверин 0,5 мл в/м 2 раз в день - 5 дней; низкобелковая диета.
Кроме того, в опытной группе, в качестве основного гепатопротекторного компонента в схеме лечения, применялся препарат «Гепасейв-плюс» - внутрь индивидуально (принудительно) в ротовую полость при помощи шприца-дозатора по 2 мл 2 раза в день в течение 3 недель. Животным второй группы в тех же дозировках в течение 3 недель был назначен препарат «Гепатовет» и она служила контролем.
Исследование на собаках. Исследование проводили на 30 собаках (щенках), подобранных по принципу аналогов разных пород и пола, в возрасте от 6 до 7 месяцев. Средняя масса животного составила 9 кг. В течение опыта всех животных содержали в одинаковых условиях, кормление осуществлялось готовыми рационами. Продолжительность курса введения препарата составляла 21 дней. Подопытных животных разделили на 3 группы, по 5 особей в каждой.
Первой группе вводили препарат «Гепасейв-плюс» внутрь при помощи шприца-дозатора по 4 мл 2 раза в день в течение 3 недель.
Животным второй группы препарат «Гепасейв-плюс» вводили согласно наставлению в дозе по 2 мл 2 раза в день в течение 3 недель.
Животные третьей группы являлись контролем, и вместо препарата получали 2 раз в день дистиллированную воду в дозе 4 мл в течение 21 дня. Исследования и наблюдения за клиническим состоянием животных всех групп вели ежедневно на протяжении 21 дня. По общепринятым методикам проводили изучение интегральных параметров общего состояния, клинического состояния животных. Проводили гематологические исследования. Кровь для исследования получали пункцией вены предплечья. Функциональное состояние почек у собак оценивали по анализам биохимии крови и анализам мочи.
Результаты исследования и их обсуждение
При исследовании, проведённом на кошках, было установлено следующее: препарат «Гепасейв-плюс» показал большую терапевтическую эффективность, чем гепатопротекторный препарат «Гепатовет», применяемый в контрольной группе. В частности - видимое улучшение клинического состояния у животных опытной группы наблюдалось уже на 6-7 день, а в контрольной на 8-11 день. Также высокая терапевтическая эффективность препарата «Гепасейв-плюс» хорошо проиллюстрирована в динамике биохимических показателей (таблицы 1,2).
Таблица 1
Сводная таблица биохимических показателей крови опытной группы животных до и после лечения
|
n |
|
ALT* ед/л |
AST* ед/л |
AST/ ALT |
Щелочная фосфотаза ед/л |
Общ. белок** г/л |
Альбумин г/л |
Глюкоза ммоль/л |
GGt ед/л |
|
Норма |
20-79 |
25-48 |
1-1,14 |
75-90 |
56-77 |
24-37 |
3,6-6,2 |
До 7,5 |
|
|
10 |
До лечения |
398±23,6 |
125±9,4 |
0,59±0,16 |
174,2±9,2 |
55,3±2,8 |
22,4±1,6 |
4,22±0,23 |
0 |
|
10 |
После лечения |
119±15,87 |
56±9,93 |
0,5±0,11 |
75,6±3,2 |
64,4±3,2 |
26,4±1,6 |
6,18±0,41 |
0 |
*данные не значимы
**данные статистически значимы при ошибке не более 1 - 5% Р≤0,05-0,01
Таблица 2
Сводная таблица биохимических показателей крови контрольной группы животных проведённых до и после лечения
|
n |
|
ALT* ед/л |
AST* ед/л |
AST/ ALT |
Щелочная фосфотаза ед/л |
Общ. белок** г/л |
Альбумин г/л |
Глюкоза ммоль/л |
GGt ед/л |
|
Норма |
20-79 |
25-48 |
1-1,14 |
75-90 |
56-77 |
24-37 |
3,6-6,2 |
До 7,5 |
|
|
10 |
До лечения |
418±22,3 |
112±13,8 |
0,37±0,2 |
177,8±8,6 |
51,2±2,3 |
18,9±1,5 |
4,91±0,34 |
0,5± |
|
9 |
После лечения |
234±17,60 |
74±2,38 |
0,49±0,4 |
121,7±3,1 |
58,7±2,8 |
22,8±1,9 |
5,24±0,45 |
0 |
*данные не значимы
**данные статистически значимы при ошибке не более 1 - 5% Р≤0,05-0,01
При анализе результатов УЗИ у животных обеих групп до лечения наблюдали следующие УЗИ изменения - эхогенность паренхимы печени повышена. Структура однородная, мелкозернистая. Сосудистый рисунок выражен ярко. Печеночные вены расширены до 8-12 мм. Желчный пузырь умеренно наполнен. У некоторых животных незначительное увеличение размеров печени, расширены желчные протоки. При повторном исследовании, через 21 день, после начала терапии было выявлено снижение эхогенности паренхимы печени и уменьшение диаметра печеночных вен.
Таблица 3
Эффективность проводимых терапевтических мероприятий
|
Группа
|
Количество животных |
Количество выживших животных |
% Выживших |
% Летальности |
|
Контроль |
10 |
10 |
100 |
0 |
|
Опыт |
10 |
9 |
90 |
10 |
При изучении переносимости препарата, проведённом на собаках, было установлено следующее: на протяжении всего эксперимента при ежедневном осмотре животных всех групп никаких отрицательных изменений в поведении животных после введения препарата не наблюдалось, также не было замечено изменений общего состояния, двигательной активности и изменения аппетита. Полученные гематологические показатели приведены в таблице 4.
Таблица 4
Влияние препарата «Гепасейф-плюс» на показатели крови собак
|
Исследуемые показатели |
Группы животных |
||
|
I |
II |
III |
|
|
До опыта |
|||
|
Гемоглобин, г/л |
116±7,0 |
112±3,82 |
119,0±4,16 |
|
Гематокрит, % |
27,6±2,3 |
31,3±2,46 |
35,03±1,61 |
|
Эритроциты, 1012/л |
5,47±0,5 |
5,45±0,57 |
5,76±0,27 |
|
Тромбоциты, 109/л |
307,2±21,5 |
285,7±12,2 |
409,4±13,4 |
|
Лейкоциты, 109/л |
10,4±0,8 |
10,2±0,3 |
9,8±0,6 |
|
Юные нейтрофилы, % |
0 |
0 |
0 |
|
Палочкоядерные нейтрофилы, % |
1,6±0,2 |
1,7±0,3 |
1,6±0,2 |
|
Сегментоядерные нейтрофилы, % |
16,8±1,6 |
17,5±0,1 |
15,2±1,2 |
|
Базофилы, % |
1 |
0 |
0 |
|
Эозинофилы, % |
2,0±0,2 |
2,4±0,1 |
1,4±0,1 |
|
Моноциты, % |
8,5±2,6 |
7,0±1,7 |
7,6±1,3 |
|
Лимфоциты, % |
71,4±2,8 |
71,2±1,9 |
73,9±2,5 |
|
21 сутки |
|||
|
Гемоглобин, г/л |
116±2,08 |
182±12,27 |
126,9±5,90 |
|
Гематокрит, % |
39±1,57 |
44,3±3,52 |
44,6±3,31 |
|
Эритроциты, 1012/л |
5,11±0,12 |
6,77±0,73 |
6,4±0,70 |
|
Тромбоциты, 109/л |
302,7±17,1 |
300,1±15,8 |
308,6±21,9 |
|
Лейкоциты, 109/л |
10,8±0,9 |
10,4±1,1 |
10,5±0,9 |
|
Юные нейтрофилы, % |
0 |
0 |
0 |
|
Палочкоядерные нейтрофилы, % |
1,6±0,2 |
1,7±0,2 |
1,6±0,1 |
|
Сегментоядерные нейтрофилы, % |
18,0±1,1 |
16,3±3,3 |
15,0±2,0 |
|
Базофилы, % |
0 |
0 |
0 |
|
Эозинофилы, % |
2,8±0,3 |
2,4±0,2 |
2,3±0,4 |
|
Моноциты, % |
7,5±0,6 |
7,7±0,8 |
8,3±0,5 |
|
Лимфоциты, % |
69,9±3,0 |
71,4±2,7 |
72,4±3,6 |
Изучение влияния лекарственного препарата «Гепасейв-плюс» на показатели крови собак показало, что морфологические показатели периферической крови животных опытных групп соответствуют физиологической видовой норме. Кроме того, в опытных группах животных наблюдается положительная динамика гемопоэза, на что указывает повышение количества эритроцитов, гемоглобина и гематокритной величины в периферической крови собак. Патологических сдвигов показателей не наблюдалось.
Таблица 5
Влияние препарата «Гепасейф-плюс» на биохимические показатели крови собак
|
Исследуемые показатели |
Группы животных |
||
|
I |
II |
III |
|
|
До опыта |
|||
|
Билирубин общий, мкмоль/л |
9,3±0,3 |
9,1±0,1 |
8,8±0,2 |
|
АСТ, Е/л |
34±0,4 |
34±0,3 |
33±0,2 |
|
АЛТ, Е/л |
29±0,3 |
31±0,5 |
32±0,4 |
|
Мочевина, ммоль/л |
6,3±0,4 |
6,4±0,3 |
6,7±0,2 |
|
Креатинин, мкмоль/л |
86±0,2 |
88±0,4 |
82±0,6 |
|
Общий белок, г/л |
54±2,1 |
53±3,4 |
55±4,1 |
|
Альбумин, г/л |
22,4±1,9 |
23,1±2,8 |
22,8±3,6 |
|
Глобулин, г/л |
31,6±2,5 |
29,9±2,1 |
32,2±2,5 |
|
Глюкоза, ммоль/л |
5,7±0,1 |
6,0±0,2 |
5,8±0,4 |
|
21 сутки |
|||
|
Билирубин общий, мкмоль/л |
8,2±0,8 |
8,7±0,4 |
8,3±0,7 |
|
АСТ, Е/л |
32±0,4 |
31±0,7 |
34±0,2 |
|
АЛТ, Е/л |
31±0,3 |
31±0,2 |
30±0,4 |
|
Мочевина, моль/л |
6,5±0,4 |
6,6±0,7 |
6,7±0,5 |
|
Креатинин, мкмоль/л |
95±0,2 |
90±0,3 |
89±0,4 |
|
Общий белок, г/л |
55±4,8 |
63±2,55 |
62±1,4 |
|
Альбумин, г/л |
23,9±2,7 |
28,6±2,3 |
27,8±2,1 |
|
Глобулин, г/л |
31,1±3,1 |
34,4±4,1 |
34,2±3,7 |
|
Глюкоза, ммоль/л |
5,3±0,19 |
5,4±0,3 |
5,3±0,18 |
Как видно из таблицы 5, колебания значений всех исследуемых показателей крови у животных опытных групп соответствуют физиологической норме. Вместе с этим концентрации общего белка в опытной группе собак несколько выше, чем в контрольной, в основном за счет альбуминовой фракции. Это может указывать на повышение конверсии питательных веществ корма.
По результатам исследования мочи не выявлено существенных различий от физиологических показателей. Исходя из этого, можно сделать вывод о том, что функциональное состояние почек не было нарушено.
Заключение
Данные, полученные в ходе эксперимента на кошках, свидетельствуют, что испытуемый препарат обладает высоким терапевтическим действием, что подтверждается эффективностью проводимых терапевтических мероприятий, которая в опытной группе составила 100%, а контрольной группе 90%. По итогам проведённой работы на собаках было установлено, что введение препарата «Гепасейв-плюс» опытным животным в терапевтической дозе оказало положительное влияние на функциональное состояние органов и систем организма собак, что подтверждено результатами общеклинических и лабораторных исследований (таб. 4,5,6). Также было установлено, что применение препарата «Гепасейв-плюс» в течение 21 суток в двукратной (от терапевтической) дозе не оказывает отрицательного влияния на физиологические показатели жизнедеятельности собак, что свидетельствует о безопасности данного препарата.
Рецензенты:
Волков А.А., д.вет.н., зав. кафедрой «Терапия, акушерство и фармакология» ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова» г. Саратов;
Староверов С.А., д.б.н., профессор кафедры «Терапия, акушерство и фармакология» ФГБОУ ВПО «Саратовский ГАУ им. Н.И. Вавилова», г. Саратов.