Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,006

JOINT DEFINITION OF WATER-SOLUBLE VITAMINS GROUPS B AND C

Deryabina V.I. 1 Mikheeva E.V. 1 Slepchenko G.B. 1 Schukina T.I. 1
1 National Research Tomsk Polytechnic University
Simultaneous voltammetric determination of water soluble vitamins groups B and C. The investigations on the choice of working conditions of simultaneous electrochemical determination of water soluble vitamins groups B and C. It was found in the range of determined concentration from 10 to 60 mg/dm3 hundredfold excess of vitamin C doesn’t influence the analytical signals of vitamins B2 and B6. Maximal sensitivity and good reproducibility of determination have been obtained at glass carbon electrode in ground solution of sodium hydrotartrate. The mutual influence of vitamins was studied on model mixtures. Based on results involved the method of analysis of feeds and feed supplements by differential voltammetry have been proved. The methods is simple in fulfillment and low-costing , allows to analyses group of water soluble vitamins in the following concentration ranges: vitamin B2 from 0,5 to 60, vitamin B6 from 1,0 to 80 and C from 0,5 to 100 mg/kg (Srisnot more 25 %).
C
B6
vitamins B2
vitamins groups
water soluble
voltammetry
technique

В настоящее время потребительский рынок насыщен большим ассортиментом витаминизированных препаратов для животных, рецептура которых содержит несколько витаминов, чаще всего витамины С, В2 и В6. Эти витамины представляют собой биологически активные органические соединения разнообразной химической природы, недостаток или избыток которых в организме животного одинаково вредно, так как может вызвать глубокие нарушения различных его функций.

Оптимальной формой лабораторного контроля качества является система планового регулярного слежения за содержанием витаминов с компьютерной обработкой результатов анализа. Важнейшее условие оптимизации деятельности лабораторной службы – наличие специфических, хорошо воспроизводимых, доступных методов, позволяющих проводить совместное определение анализируемых компонентов.

В настоящее время для анализа витаминов С, В2 и В6 в аналитических лабораториях используют в основном оптические и хроматографические методы анализа [1,3-5,7]. Среди электрохимических методов, для определения водорастворимых витаминов успешно применяют методы вольтамперометрии (ВА) [2,6]. Методы ВА довольно перспективны, так как сочетают высокие информационные возможности и простоту процесса измерения сигнала с невысокой стоимостью анализа и оборудования. К сожалению, предлагаемые аттестованные ВА-методики позволяют определять каждый витамин отдельно.

Цель работы заключалась в исследовании совместного вольтамперометрического поведения водорастворимых витаминов С, В2 и В6, выборе их рабочих условий и разработке методики анализа кормов и кормовых добавок на содержание витаминов методом дифференциальной вольтамперометрии.

Приборы и реактивы. Вольтамперометрические измерения проводили на компьютеризированном анализаторе «СТА» (ООО «ИТМ», г. Томск) в трехэлектродной системе. Индикаторным электродом служил стеклоуглеродный электрод (СУЭ), графитовый и углеситалловый, вспомогательными электродом сравнения – хлоридсеребряные в насыщенном растворе хлорида калия с сопротивлением не более 3,0 кОм.

Основные растворы, содержащие 1000,0 мг/дм3, водорастворимых витаминов В6, С готовили растворением навесок фармакопейных препаратов сухих порошков, пиридоксина гидрохлорида, аскорбиновой кислоты (с содержанием основного вещества не менее 99,5 %) в бидистиллированной воде.

Основной раствор, содержащий 1000,0 мг/дм3 витамина В2, готовили растворением навески фармакопейного препарата сухого порошка рибофлавина (с содержанием основного вещества не менее 99,5 %) в 10,0 см3 раствора NaOH концентрации 0,1 моль/дм3 и затем доводили до 100 см3 бидистиллированной водой.

Рабочие растворы – аттестованные смеси (АС) получали последовательным разбавлением в бидистиллированной воде основных растворов.

Растворы фоновых электролитов готовили растворением навески соответствующих солей (ч.д.а. или ос.ч.) в дистиллированной воде.

Массовую концентрацию витаминов рассчитывали методом добавок аттестованных смесей.

В качестве объектов анализа использовали витаминизированные корма для животных: БМВД «Pigimax№5220», ВМД «Хрюша» (ООО «Агровит»), Премикс ПКК1-2 (ЗАО «Витасоль», г. Боровск) и др.

Для совместного определения витаминов С, В2 и В6 предложен метод дифференциальной вольтамперометрии. Проведены исследования по выбору материала индикаторного электрода. В работе использовали графитовый электрод, пропитанный полиэтиленом с парафином в вакууме, стеклоуглеродный и углеситаловый электроды. Наибольшую чувствительность определения, низкое значение остаточного тока и хорошую воспроизводимость аналитических сигналов для всех трех витаминов наблюдали на стеклоуглеродном электроде, который и был выбран в качестве рабочего. К несомненным достоинствам стеклоуглеродных электродов следует отнести их налаженный промышленный выпуск, что не требует от исследователей собственных усилий по приготовлению электродов. Вольтамперограммы электроокисления витаминов С, В2 и В6 на СУЭ представлены на рисунке 1.

Рис.1. Вольтамперограммы окисления водорастворимых витаминов на СУЭ:

1 – фон 0,1 М NaC4H4O6∙Н2О;

2 – 2 мг/дм3 Вит В2 +2 мг/дм3 ВитВ6 + 1 мг/дм3 Вит С;

3 – 4 мг/дм3 Вит В2 +4 мг/дм3 ВитВ6 + 2 мг/дм3 Вит С.

Еэ = – 0,7 В, tэ = 30с,w = 25 мВ/с.

С целью выбора рабочего фонового электролита исследовали процесс электроокисления и восстановлениия исследуемых витаминов в 0,1 моль/дм3 растворах: (NH4)2SO4, KCl, Na3С6H5O7, C6H8O7∙2НN3, C4H5O6Na∙H2O, C4H6O6, С6Н8О7, буферном растворе Бриттона – Робинсона и цитратно-фосфатных буферных смесях. Все перечисленные электролиты можно использовать для совместного количественного определения витаминов, однако рабочим фоновым электролитом был выбран 0,1 моль/дм3 раствор C4H5O6Na∙H2O, на фоне которого регистрировались хорошо воспроизводимые пики электроокисления витаминов С, В2 и В6 с хорошим диапазоном линейности градуировочных зависимостей. Кроме того, электролит 0,1 моль/дм3C4H5O6Na∙H2O является хорошим высаливателем водорастворимых белков (рН раствора соответствует изоэлектрической точке гидролиза водорастворимых белков), мешающих экспрессному определению витаминов в витаминизированных подкормках и премиксах. Градуировочные графики зависимости величин тока электроокисления исследуемых витаминов представлены на рисунке 2.

Рисунок 2. Градуировочные зависимости водорастворимых витаминов С (1), В2 (2) и В6(3)

фон 0,1 моль/дм3NaC4H4O6∙Н2О; tэ = 30с; w = 27 мВ/с

1 – 5 мг/дм3 Вит С; 2– 5 мг/дм3 Вит В2; 3 –5 мг/дм3 ВитВ6

Из рисунка 2 следует, что линейная зависимость тока электроокисления витаминов сохраняется в широком диапазоне определяемых содержаний.

Для увеличения чувствительности определения применяли дифференциальный режим съемки вольтамперограмм. Существенным преимуществом такого вида съемки служит возможность получения четких пиков, облегчающих расшифровку вольтамперограмм и уменьшающих ошибку определения величины аналитического сигнала.

Изучено влияние развертки поляризующего напряжения на ток электроокисления исследуемых витаминов. Установлено, что с увеличением скорости развертки ток электроокисления витаминов увеличивается, однако при этом возрастает и остаточный ток. На основании полученных результатов выбраны рабочие скорости развертки потенциала, которые лежат в пределах от 20 до 30 мВ/с.

В современных компьютеризированных вольтамперометрических анализаторах реализованы различные способы регистрации вольтамперограмм. Исследования по выбору режима регистрации вольтамперограмм витаминов проводили при линейном и дифференциально-импульсном наложении потенциала. Параметры дифференциально-импульсного режима подобраны экспериментально и составляют: шаг развертки 3 мВ; амплитуда импульса 30мВ; длительность импульса 40 мс. При таких условиях регистрируются вольтамперограммы исследуемых витаминов с четко выраженными максимумами и хорошей воспроизводимостью.

На основании проведенных исследований предложены рабочие условия совместного ВА-определения витаминов С, В2 и В6 (таблица 1).

Таблица 1. Рабочие условия одновременного ВА-определения витаминов В2, С и В6

Параметры

Значения параметров

Используемая система

В2

С

В6

Электроды

- индикаторный

3-х электродная

СУЭ

-сравнения /вспомогательный

ХСЭ/ ХСЭ

Фоновый электролит

0,1 моль/дм3 NaC4H4O6∙Н2О

Удаление кислорода

нет

Потенциал накопления (Ен), В

– 0,7 ± 0,05

Диапазон развёртки потенциалов (Ер), В

–0,7 до 1,2

Скорость изменения потенциала (w), мВ/с

20 -30

Режим регистрации

дифференциально-импульсный

Потенциал пика (Еп), В

– 0,35± 0,05

0,5±0,05

1,10 ± 0,05

В реальных объектах максимальное соотношение витаминов группы В к витамину С, как правило, составляет 1:100. Нами изучено взаимное влияние витаминов В2, В6 и витамина С. В ходе исследований установлено, что в диапазоне концентраций от 1,0 до 60 мг/дм3 стократный избыток витамина С не оказывает влияния на аналитические сигналы витаминов В2 и В6.

На основании проведенных исследований разработана методика количественного химического анализа витаминизированных подкормок для животных на содержание витаминов С, В2 и В6.

Методика совместного определения витаминов С, В2 и В6 в витаминизированных подкормках для животных: навеску витаминизированной подкормки или премикса (0,5 – 1,0) г растворяют в воде, в результате чего витамины переходит в водную фазу. Затем смесь фильтруют (центрифугируют), в полученном фильтрате определяют содержание водорастворимых витаминов С, В2 и В6 методом дифференциально-импульсной вольтамперометрии.

Витаминизированные подкормки и премиксы представляют собой многокомпонентные сухие смеси. Кроме витаминов в них содержатся наполнители, антиоксиданты, эмульгаторы, минеральные и другие добавки, оказывающие негативное влияние на величину аналитического сигнала исследуемых витаминов. Поэтому в некоторых случаях необходимо удалить белковые фракции. Для этого в смесь добавляют осадитель (сульфат цинка) и после 30 мин экспозиции осадок отделяют, фильтрат анализируют.

Используя данную методику, проведен анализ реальных объектов, полученные результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2. Результаты ВА-определения витаминов (В2, В6, С), проверка правильности методом «введено-найдено», (Р = 0,95, n =3)

Объект

Аналит

Содержание, г/кг

На упаковке производителя (в пробе)

Введено

Найдено

БМВД

«Pigimax№5220»

Украина

В2, г/кг

38

Не введено

39 ± 4

5,0

43 ± 4

В6, г/кг

16

Не введено

15 ± 2

4,0

20± 2

ВМД «Хрюша»

ООО «Агровит»

В2, г/кг

0,2

Не введено

0,19± 0,04

0,10

0,28± 0,05

С, г/кг

10

Не введено

9,7 ± 1,4

5,0

15 ± 2

Премикс ПКК1-2

ЗАО «Витасоль»,

г. Боровск

В2, г/кг

0,3

Не введено

0,26 ± 0,05

0,10

0,38 ± 0,07

В6, г/кг

0,2

Не введено

0,23 ± 0,05

0,10

0,29± 0,06

Как видно из таблицы 2, полученные результаты согласуются с данными, заявленными производителями.

В ходе исследований определены нижние границы определяемых содержаний (Сн) и пределы обнаружения (Сmin,p): для витамина С: Сн = 0,5 мг/дм3, Сmin,p= 0,25 мг/дм3; для витаминов В2 и В6: Сн = 1,0 мг/дм3, Сmin,p= 0,5 мг/дм3.

Предложенная методика проста в исполнении, не требует затрат, позволяет анализировать группу водорастворимых витаминов в следующих диапазонах концентраций, мг/кг: витамин В2 от 1,0 до 60, витамина В6 от 1,0 до 80 и витамина С от 0,5 до 100 (Sr не более 25 %).

Работа выполнена в рамках государственного задания «Наука» по теме 1.1317.2014.

Рецензенты:

Полещук О.Х., д.х.н., профессор, зав. кафедрой Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Томский государственный педагогический университет», г. Томск.

Отмахов В.И., д.т.н., профессор кафедры аналитической химии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Национальный исследовательский Томский государственный университет», г. Томск.