Введение. В медицинской практике широко применяется трава зверобоя продырявленного в качестве вяжущего, спазмолитического, дезинфицирующего, противовоспалительного средства. Зверобой применяют в виде травы, брикетов, сборов, настойки, водного настоя [3].
В последние годы масляные экстракты из лекарственных растений находят все большее применение в медицине и косметологии [2; 5].
Целью исследования является разработка способа получения масляного извлечения из травы зверобоя продырявленного. Для расширения возможностей эффективного использования ректальных лекарственных форм масляные извлечения помещали в желатиновые ректальные капсулы (ЖРК).
Материалы и методы исследования
В работе использовали методы: диализа через полупроницаемую мембрану, спектрофотометрический, тонкослойной хроматографии.
Изучение спектров поглощения масляных извлечений из травы зверобоя продырявленного проводили спектрофотометрическим методом [4]. Для выбора лучшего экстрагента использовали масла: кукурузное, подсолнечное и оливковое и определяли содержание в них суммы производных хлорофилла.
Качественное определение производных хлорофилла и каротиноидов в масляной фазе проводили методом тонкослойной хроматографии на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей – петролейный эфир – ацетон (7:3) [4].
Проведено изучение динамики высвобождения (выполняли методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану) [1].
Оценку качества желатиновых ректальных капсул проводили согласно требованиям Государственной фармакопеи XII издания. Были использованы показатели: внешний вид, средняя масса капсул с содержимым, средняя масса содержимого капсул, распадаемость, испытание на подлинность, количественное определение.
Выполнена валидационная оценка разработанных методик по критериям: линейность, прецизионность, правильность.
Результаты исследования и их обсуждение
Для стандартизации травы зверобоя продырявленного и масляных извлечений использовали определение содержания в нем суммы хлорофиллов, которые извлекаются масляными растворами [3]. В процессе экстрагирования использовали масла: кукурузное, подсолнечное, оливковое. При изучении спектра поглощения масляных извлечений из травы зверобоя установлено, что максимумы светопоглощения во всех маслах совпадают и находятся при длине волны 669 нм (рис. 1).
Рисунок 1 – УФ-спектр поглощения извлечения из травы зверобоя в масле оливковом
Результаты количественного определения суммы хлорофиллов в масляных извлечениях показали, что наибольшее количество производных хлорофилла (9,39%) извлекается маслом оливковым (табл. 1).
Таблица 1 – Результаты количественного определения суммы хлорофиллов в масляных извлечениях из травы зверобоя
|
Экстрагент |
Содержание суммы хлорофиллов, мг/% |
Относительная ошибка, % |
|
Масло кукурузное |
5,54 |
2,59 |
|
Масло подсолнечное |
5,54 |
2,04 |
|
Масло оливковое |
9,39 |
1,31 |
Результаты исследования качественного состава масляных извлечений методом тонкослойной хроматографии показали наличие производных хлорофилла (А1, А2), каротиноидов (К) (рис. 2), что согласуется с литературными данными [4].
Rf (A1)=0.06
Rf (A2)=0.47
Rf (K) =0.88
Рисунок 2 – Тонкослойная хроматография экстрактивных веществ в масляном извлечении из травы зверобоя продырявленного
Изучение динамики высвобождения показало, что масло оливковое обеспечивает лучшую высвобождаемость производных хлорофилла (рис. 3).
Рисунок 3 – Динамика высвобождения производных хлорофилла методом диализа
Полученное масляное извлечение помещали в мягкие желатиновые капсулы, запаивали их и проводили стандартизацию. Желатиновые ректальные капсулы изготовляли методом погружения, используя состав, принятый отечественной промышленностью.
По внешнему виду желатиновые ректальные капсулы имели желтую окраску, гладкую поверхность без пузырьков воздуха и механических включений.
Среднюю массу капсул с содержимым определяли совместным взвешиванием 20 невскрытых капсул и рассчитывали среднюю массу. Затем взвешивали каждую капсулу отдельно и сравнивали со средней массой капсулы. Отклонение массы каждой капсулы не должно превышать ±10% от средней массы.
Определение средней массы содержимого капсул. Осторожно вскрывали 20 капсул, удаляли содержимое, промывали хлороформом с последующим удалением растворителя на воздухе и взвешивали каждую оболочку. Массу содержимого капсул определяли вычитанием массы оболочки из массы капсулы с содержимым. Отклонение массы содержимого каждой капсулы от средней массы не должно превышать ±10%, за исключением двух капсул, в которых допускается отклонение ±25%.
Определение распадаемости капсул проводили в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XII издания на лабораторном идентификаторе процесса распадаемости. Капсулы должны распадаться в течение не более 20 минут.
Испытание на подлинность желатиновых ректальных капсул проводили методом хроматографии в тонком слое сорбента в системе растворителей петролейный эфир – ацетон (7:3).
Количественное определение суммы хлорофиллов в желатиновых ректальных капсулах проводили спектрофотометрическим методом.
В мерную колбу вместимостью 10 мл помещали 3 мл масляного извлечения и доводили хлороформом до метки. Параллельно проводили 6 измерений оптической плотности при длине волны 669 нм. Раствор сравнения – хлороформ.
Расчет содержания производных хлорофилла проводили по формуле:
где А – измеряемая оптическая плотность;
a – точная навеска масляного извлечения, взятая для анализа, г.
Таблица 2 – Результаты количественного определения суммы хлорофиллов в желатиновых ректальных капсулах
|
Навеска, г |
Оптическая плотность |
Найдено, мг/% |
Найдено, % |
Метрические характеристики |
|
2,8810 |
0,208 |
9,57 |
101,9 |
X=100,8 S=1,15 Sx=0,469 ∆H=1,21 ε=±1,20% |
|
2,8502 |
0,201 |
9,34 |
99,5 |
|
|
2,7110 |
0,194 |
9,48 |
100,9 |
|
|
2,9521 |
0,214 |
9,61 |
102,3 |
|
|
2,8443 |
0,202 |
9,36 |
99,7 |
|
|
2,8547 |
0,203 |
9,42 |
100,3 |
Из таблицы 2 следует, что относительная погрешность определения суммы производных хлорофилла не превышает ±1,20%.
Сводные данные проведенной стандартизации желатиновых ректальных капсул с масляным извлечением из травы зверобоя продырявленного приведены в таблице 3.
Таблица 3 – Результаты стандартизации ЖРК
|
Показатели качества |
Нормы качества |
Результаты анализа |
|
Описание |
Капсулы должны быть желтого цвета, с гладкой поверхностью, без пузырьков воздуха и механических включений |
Капсулы желтого цвета, с гладкой поверхностью, без пузырьков воздуха и механических включений |
|
Средняя масса капсул с содержимым, г |
1,50 |
1,48-1,52 |
|
Отклонение от средней массы капсул с содержимым, % |
±10 |
от +3,2 до -3,1 |
|
Средняя масса содержимого капсул, г |
0,55 |
0,53-0,57 |
|
Отклонение от средней массы содержимого капсул, % |
±10 |
от + 2,3 до -3,3 |
|
Распадаемость, мин |
не более 20 |
14-17 |
|
Подлинность |
на хроматограмме должно наблюдаться три пятна |
на хроматограмме наблюдается три пятна |
|
Посторонние примеси |
на хроматограмме не должно быть дополнительных пятен |
на хроматограмме нет дополнительных пятен |
|
Количественное определение, мг/% |
9,48 |
9,34-9,42 |
Данные таблицы 3 подтверждают, что все показатели соответствуют требованиям Государственной фармакопеи XII издания.
Проведенные исследования показали, что желатиновые ректальные капсулы стабильны в течение 18 месяцев хранения.
Проведена валидационная оценка разработанной методики анализа суммы производных хлорофилла спектрофотометрическим методом по показателям: линейность, правильность, прецизионность. Полученные результаты подтвердили валидность разработанной методики (табл. 4).
Таблица 4 – Результаты валидационной оценки методики анализа суммы хлорофиллов
|
Критерий |
Показатель |
Результаты |
|
Линейность |
Уравнение градуировочного графика Коэффициент корреляции |
Y=0,07x–0,001 R=0,999 |
|
Прецизионность |
Относительное стандартное отклонение |
RSD=0,73 |
|
Правильность |
Относительное стандартное отклонение Открываемость |
RSD=0,67 R=98,6% |
Выводы. Исследовано содержание суммы производных хлорофилла, извлекаемых оливковым маслом из травы зверобоя продырявленного. Изготовлены желатиновые ректальные капсулы с масляным извлечением из травы зверобоя продырявленного и проведена их стандартизация. Установлено, что по всем показателям капсулы соответствуют требованиям Государственной фармакопеи XII издания. Проведена валидационная оценка разработанной методики, которая показала возможность ее использования в фармацевтическом анализе.
Рецензенты:
Андреева И.Н., д.фарм.н., профессор кафедры «Туризм» Института сервиса и туризма филиала в г. Пятигорске ФГБОУ ВПО «ДГТУ», г. Пятигорск.
Молчанов Г.И., д.фарм.н., профессор кафедры экономики и управления Пятигорского филиала ГОУ ВПО «Российский государственный торгово-экономический университет», г.Пятигорск.