За последние годы проблема отклонения от нормы биохимических и иммунологических показателей у бактерионосителей получила новое направление развития. Наметилась необходимость выявления при этой патологии наиболее значимых в прогностическом плане маркеров, так как нахождение чужеродного возбудителя в организме человека не может не сопровождаться изменениями со стороны состава биологических жидкостей. В результате возможно возникновение различных процессов, природа которых выходит за привычные рамки реакции антиген-антитело [1, 2, 3, 5].

Мы предположили, что в случае персистенции бактерий, когда организм человека длительно контактирует с чужеродным агентом и не может его элиминировать, во внутренней среде будут происходить изменения, которые можно зафиксировать в лаборатории с использованием максимально простых приемов [4]. Поиск подобных маркеров и явился целью нашего исследования.

Материалы и методы. В основу предлагаемого метода легла реакция иммунопреципитации в агаровом геле. Он заключается в том, что в расплавленный и охлажденный до 50°С 1 % агар Дифко с 1 % NaCl вносили биологически активные вещества (лизоцим, лактоферрин, спермин и спрмидин), выполняющие, по нашему мнению, одну из ключевых ролей в реализации процесса бактерионосительства. 25 мл агара разливали на стеклянные пластины 9´12 сантиметров. После застывания агара в нем пробойником пробивали лунки и раскапывали в них сыворотку или спермоплазму пациентов. Контролем служили сыворотка и спермоплазма здоровых доноров.

Плашки инкубировали в течение 48 ч при 10°С во влажной камере, после чего проводили чтение результатов.

Результаты и обсуждение Установлено, что у бактерионосителей и в случае со спермой, и в варианте с сывороткой формировались четкие кольца преципитации. В то же время у здоровых лиц они отсутствовали. Диаметр колец не зависит от концентрации общего белка в пробе, так как в спермоплазме, где его концентрация существенно выше, диаметр сопоставим с диаметром колец при постановке реакции с сывороткой. Дальнейший анализ этого феномена показал, что субстраты биологических жидкостей, формирующие in vitro кольца преципитации в агаровом геле, являются водорастворимыми, так как последующая инкубация стекол в течение 6 дней в 5 % растворе хлорида натрия с троекратной сменой раствора привела к исчезновению этих колец.

Применительно к каждому показателю были получены следующие результаты:

Факторы преципитации лизоцима (ФПЛ)

После инкубации было установлено, что у здоровых доноров в сыворотке крови и в спермоплазме этот показатель не определялся. У носителей патогенных стафилококков признак ФПЛ идентифицирован у 40 % обследованных. Распределение по различным видам носительства выглядит следующим образом (таблица 1).

Таблица 1

Уровень ФПЛ при различных видах носительства (M±m)

При этом из всех носителей золотистого стафилококка он выявлен у половины больных, а эпидермального - у 30 % пациентов. У резидентных носителей обоих видов стафилококков этот признак на 25 % обнаруживается чаще, чем у транзиторных (р<0,05).

Интересно, что наличие ФПЛ у пациентов коррелирует с таким показателем хронического воспалительного процесса как обнаружение агглютинатов в сперме (г=0,511). Считается установленным, что при простатитах, простатовезикулитах и эпидедидимитах повышается содержание в спермоплазме мукополисахаридов, которые способны, взаимодействуя со скаферрином, изменять его физико-химические свойства, что и приводит к агглютинации сперматозоидов. Таким образом, получено дополнительное подтверждение высказанного нами ранее предположения о принадлежности ФПЛ к маркерам бактерионосительства, часто выражающегося в хронически протекающих воспалительных реакциях. В связи с этим логичными выглядят следующие результаты: при резидентном носительстве S. aureus диаметр кольца преципитации был наибольшим и составил 2,8 мм против 1,33 мм при резидентном носительстве S. epidermidis (p<0,01). В случае транзиторного носительства этот показатель отличается на 12,5 %. Таким образом, средний диаметр кольца преципитации у носителей золотистого стафилококка, вызывающего в организме человека более выраженные изменения, в среднем составляет 2,4 мм, а эпидермального - 1,49 мм (р<0,05).

Факторы преципитации лактоферрина (ФПЛФ)

В сыворотке и спермоплазме здоровых доноров определяемый показатель не идентифицирован.

У носителей патогенных стафилококков он выявлен в 55 % случаев. Интересно, что независимо от вида носительства он практически одинаково часто обнаруживался в случае инфицирования S. аureus - у 60 % пациентов, a S. еpidermidis - у 50 %. Концентрация преципитирующих агентов в сыворотке носителей S. аureus достоверно выше, чем у носителей S. еpidermidis (2,9 мм против 1,34 мм р<0,05). Распределение по различным видам носительства представлено в таблице 2.

Таблица 2

Уровень ФПЛФ при различных видах носительства (M±m)

Интересно, что показатель ФПЛФ в известной степени зависит от биологических параметров выделенного от пациента возбудителя, так как он обратной связью сильно коррелирует с антилизоцимной активностью стафилококка (г=-0,726). Параллельно установлена взаимосвязь наличия преципитирующих факторов с характеристиками самого организма - носителя, например, с возрастом обследуемого: расчет коэффициента детерминации установил, что величина ФПЛФ на 23,7 % зависит от возраста обследуемого: он выявлялся только у лиц старше 29 лет и ни разу не был обнаружен у более молодых пациентов. Кроме того, в ходе анализа спермограммы, выявлена прямая сильная связь регистрируемого показателя с количеством клеток сперматогенеза (г=0,606).

Факторы преципитации спермидина (ФПСД)

Этот признак наиболее часто встречался среди пациентов-бактерионосителей. Он выявлен у 65 % обследованных, при этом у не носителей он не обнаружен. Он несколько чаще встречался в сыворотке крови носителей золотистого стафилококка, чем эпидермального. При этом диаметр кольца преципитации и, следовательно, концентрация преципитирующих агентов также выше в среднем в первой группе и равна 3,28 мм, в то время, как во второй - 2,84 мм (р<0,05).

Дальнейшая статистическая обработка результатов показала, что независимо от вида микроорганизма с достоверностью р<0,05 ФПСД чаще встречается у резидентных носителей.

Необходимо подчеркнуть, что диаметр кольца преципитации также выше у резидентных носителей независимо от вида возбудителя (таблица 3).

Таблица 3

Уровень ФПСД при различных видах носительства (M±m)

Факторы преципитации спермина (ФПСМ)

Существующие в настоящее время тесты для определения патологии, вызванной хроническим воспалением, в организме бактерионосителя наибольшим образом связаны со следующим предлагаемым нами критерием, а именно - ФПСМ. Постановка самой реакции преципитации, а так же концентрация взятых веществ аналогична ФПСД.

Диаметр кольца преципитации и, следовательно, концентрация преципитирующих агентов выше в среднем в группе носителей золотистого стафилококка и равна 3,93 мм, в то время как в группе носителей эпидермального она составляет только 2,01 мм (р<0,05).

Распределение признака в зависимости от вида носительства представлено в таблице 4.

Таблица 4

Уровень ФПСМ при различных видах носительства (M±m)

Анализ результатов показал, что ФПСМ в большей степени, чем предыдущие, связан с возрастом обследуемого (h=27,8 %). Установлено, что этот показатель коррелирует с количеством активно подвижных сперматозоидов (г=0,532), а также уровнем неподвижных (г=0,756), патологических (г=0,714) форм, сперматозоидов с цитоплазматической каплей (г=0,570). Предлагаемый тест обратно связан со скоростью сперматозоидов (г=-0,697). Все это позволяет отнести РПСМ к факторам, отражающим фертильные свойства спермы.

Наличие корреляции с такими характеристиками эякулята как вязкость (г=0,64), рН (г=0,697), лейкоцитозом (г=0,612) и наличием агглютинатов (г=-0,570) свидетельствует о принадлежности РПСМ к характеристикам, напрямую отражающим наличие воспаления в организме бактерионосителя.

Исследование выполнено при финансовой поддержке РГНФ в рамках проведения научных исследований по проекту № 13-06-00008 «Повышение качества жизни больных хроническим простатитом: медицинский и социальный аспекты».

Рецензенты:

Николаев А. А., д-р мед. наук, профессор, зав. кафедрой общей и биоорганической химии ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Астрахань.

Кривенцев Ю. А., д-р мед. наук, доцент кафедры биохимии с курсом КЛД ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Астрахань.