Введение. Иммунные нарушения, возникающие при гипоксии различного генеза, и механизмы их развития остаются все еще мало изученными. Функции иммунной системы осуществляются на фоне метаболических процессов и их сдвигов, вызываемых действием на организм различных агентов, а также клеток печени - гепатоцитов. Типовые метаболические сдвиги, возникающие при гипоксии различного генеза, сочетаются и с определенными особенностями нарушений метаболизма в тех или иных органах и тканях, обусловленными спецификой их структурно-функциональной организации, природой индуцирующего агента и первичным звеном его воздействия на клетки и организм в целом [3]. Взаимосвязь многочисленных метаболических сдвигов, нарушений функциональной активности гепатоцитов, возникающих при гипоксии, с функцией иммунной системы до настоящего времени изучена недостаточно, так же как не установлены наиболее эффективные способы фармакологической коррекции [7].
В настоящее время вопросы патогенеза, диагностики и лечения острых заболеваний печени остаются одними из актуальных в медицине как ввиду сложности диагностики и выбора оптимальных методов лечения, так и вследствие тенденции к росту количества больных этими заболеваниями. Появление и развитие клеточных технологий создали серьезные научные предпосылки в этой области [6, 7].
Цель исследования - изучение иммунотропной и метаболической активности аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости у животных в условиях ишемического поражения печени.
Материал и методы исследования. Эксперименты проводили на 56 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 180-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986) и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.).
Острое ишемическое поражение печени вызывали оперативным методом под внутрибрюшинным гексеналовым наркозом (30 мг/кг веса). Операция выполнялась из верхнесрединного лапаротомного доступа. Ишемию печени вызывали пережатием гепатодуоденальной связки после ее инфильтрации 0,5 мл 0,5 % раствора новокаина с помощью турникета в течение 20 минут [1]. Аллогенные гепатоциты и их культуральную жидкость вводили внутрибрюшинно в объеме 0,1 мл по 10 000 000 клеток в 1 мл.
Для оценки неспецифической резистентности устанавливали фагоцитарно-метаболическую активность полиморфноядерных лейкоцитов по фагоцитарному числу (ФЧ) и фагоцитарному индексу (ФИ), показателям спонтанного и индуцированного зимозаном НСТ-теста опсонизированного зимозаном (о/з) и неопсонизированного (н/з) [9]. Оценка иммунологической реактивности основывалась на показателях гуморального иммунного ответа (ГИО) (количество антителообразующих клеток - АОК) и гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов - РМ и по разнице количества в них кариоцитов - РК) [5].
В сыворотке крови экспериментальных животных определяли концентрацию общего билирубина, общего белка, фибриногена и активность аспартат- и аланинаминотрансфераз (АЛТ и АСТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), γ-глутамилтранспептидазы (ГГТ), ставили тимоловую пробу (ТП) и определяли протромбиновый индекс (ПТИ). Величины всех перечисленных показателей определяли унифицированными методами с использованием стандартных наборов реактивов [8]. Выраженность перекисного окисления липидов оценивали по содержанию ацилгидроперекисей (АГП) и малонового диальдегида (МДА), кроме этого, в сыворотке крови определяли активность каталазы [2, 10]. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрические и непараметрические методы [4].
Результаты исследования. В условиях ложной операции (без моделирования ИПП) достоверных различий между изучаемыми показателями иммунометаболического статуса получено не было (табл. 1, 2).
Таблица 1
Иммунная реактивность и функция полиморфноядерных лейкоцитов при введении аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости на фоне ишемического поражения печени (M±m)
Показатели |
Единицы измерения |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Интактные животные |
Ложная операция |
ИПП |
АГ |
Культура-льная жидкость АГ |
||
АОК |
103/сел. |
19,7±1,4 |
21,6±2,1 |
8,4±0,93*1,2 |
9,1±1,2*1,2 |
14,2±1,2*1-4 |
РМ |
мг |
3,12±0,07 |
3,04±0,04 |
2,01±0,04*1,2 |
4,27±0,04*1-3 |
3,15±0,05*3,4 |
РК |
106 |
1,83±0,08 |
1,8±0,21 |
0,92±0,02*1,2 |
2,24±0,03*1-3 |
1,93±0,12*3,4 |
ФИ |
% |
71,7±3,6 |
69,7±4,2 |
46,8±3,0*1,2 |
56,0±2,0*1-3 |
65,0±2,6*3,4 |
ФЧ |
абс. |
2,54±0,14 |
2,47±0,14 |
1,5±0,05*1,2 |
2,36±0,16*3 |
2,05±0,3 |
НСТ-сп. |
mOD |
0,79±0,05 |
0,77±0,03 |
0,49±0,02*1,2 |
0,58±0,09*1,2 |
1,1±0,1*1-4 |
НСТ-ст. н/з |
mOD |
0,89±0,07 |
0,87±0,04 |
0,54±0,04*1,2 |
0,79±0,08*3 |
1,29±0,13*1-4 |
НСТ-ст. о/з |
mOD |
0,93±0,04 |
0,95±0,03 |
0,55±0,05*1,2 |
0,96±0,05*3 |
1,62±0,12*1-4 |
Примечание: звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия.
Кроме этого у данной группы животных снижается как метаболическая, так и фагоцитарная активность полиморфноядерных лейкоцитов (табл. 1).
В условиях моделирования ИПП у экспериментальных животных супрессируется иммунная реактивность: гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана (снижение количества иммунных АОК) и гиперчувствительность замедленного типа (снижение РМ и РК) (табл. 1).
На 5-е сутки после моделирования ИПП в плазме крови экспериментальных жи-вотных происходит повышение активности АЛТ, АСТ, ЩФ и ГГТ, возрастает тимоловая проба, концентрация общего билирубина и снижается ПТИ. Эти изменения свидетельствуют о возникновении у отравленных животных синдрома холестаза, цитолиза, снижении синтетической активности гепатоцитов и возникновении иммунного воспаления (табл. 2).
Кроме этого в данной группе животных возрастает в плазме крови уровень продуктов ПОЛ (МДА и АГП) при повышении активности каталазы (табл. 2).
Таблица 2
Функциональная активность гепатоцитов, состояние процессов ПОЛ и активность каталазы при введении аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости на фоне ишемического поражения печени (M±m)
Показа-тели |
Единицы измерения |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
Интактные животные |
Ложная операция |
ИПП |
АГ |
Культураль-ная жидкость АГ |
||
АСТ |
Е/л |
41,4±4,2 |
42,7±4,4 |
56,8±3,7*1,2 |
49,8±2,1*1-3 |
51,2±3,0*1,2 |
АЛТ |
Е/л |
36,3±3,4 |
35,6±3,0 |
49,5±4,0*1,2 |
46,0±4,7*1,2 |
50,7±6,3*1,2 |
ГГТ |
Е/л |
10,7±1,3 |
11,3±1,4 |
14,0±0,8*1,2 |
14,0±0,7*1,2 |
15,1±3,8*1,2 |
ЩФ |
Е/л |
295,0±18,4 |
251,3±33,7 |
1136,3±95,6*1,2 |
426,8±65,3*1-3 |
382,5±22,3*1-3 |
Билирубин |
мкмоль/мл |
13,1±2,1 |
12,6±3,4 |
19,6±2,3*1,2 |
18,3±1,4*1,2 |
19,1±1,2*1,2 |
ПТИ |
% |
51,3±5,3 |
48,6±4,8 |
37,8±3,3*1,2 |
42,2±2,9*1,2 |
54,8±2,3*3,4 |
ТП |
ед. S-H |
2,96±0,13 |
2,8±0,3 |
3,71±0,08*1,2 |
3,8±0,11*1,2 |
2,77±0,11*3,4 |
АГП |
усл. ед. |
1,71±0,3 |
1,7±0,21 |
2,57±0,18*1,2 |
1,67±0,19*3 |
1,81±0,2*3 |
МДА |
мкмоль/л |
3,64±0,9 |
3,71±0,27 |
8,13±0,9*1,2 |
6,23±0,23*1-3 |
4,27±0,11*3,4 |
Каталаза |
кат/л |
10,6±1,7 |
12,4±3,0 |
14,2±1,9*1 |
15,2±1,7*1,2 |
12,7±1,3*4 |
Примечание: звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия.
Полученные результаты свидетельствуют о выраженных изменениях иммунной реактивности и функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов и гепатоцитов в условиях ишемического поражения печени.
Применение аллогенных гепатоцитов позволило у животных в условиях ИПП нормализовать ФЧ полиморфноядерных лейкоцитов и их кислородзависимую активность, корригировать, но не до уровня контрольной группы животных, количество АОК и ФИ нейтрофилов периферической крови (табл. 1, 2).
Культуральная жидкость АГ у животных с ИПП нормализует показатели гиперчувствительности замедленного типа, фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, а в плазме крови ПТИ, значения ТП и концентрацию продуктов ПОЛ (АГП и МДА) (табл. 1, 2).
Обсуждение результатов исследования. Полученные результаты свидетельствуют о выраженных изменениях иммунной реактивности и функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов и гепатоцитов в условиях ишемического поражения печени и возможности использования аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости в коррекции выявленных иммунометаболических нарушений.
Следует отметить, что применение культуральной жидкости оказывает более выраженное влияние на показатели иммунометаболического статуса в условиях ишемического поражения печени.
Рецензенты:
Снимщикова Ирина Анатольевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой иммунологии и специализированных клинических дисциплин ФГБОУ ВПО «Орловский государственный университет», г. Орел.
Афанасьев Юрий Иванович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой внутренних болезней № 1 ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», г. Белгород.
Библиографическая ссылка
Терехова С.В., Быстрова Н.А., Литвинова Е.С., Чуева Т.В. ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ У ЖИВОТНЫХ НА ФОНЕ ИШЕМИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ: КОРРЕКЦИЯ АЛЛОГЕННЫМИ ГЕПАТОЦИТАМИ // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 6. ;URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=7897 (дата обращения: 01.06.2024).