Очень частая встречаемость в современном обществе сердечно-сосудистой патологии и колоссальная доля в ней артериальной гипертонии (АГ) стойко удерживает внимание к ней современной медицинской науки [10]. Ситуация усугубляется весьма частым сочетанием АГ с метаболическими нарушениями, среди которых дислипидемия (Д) занимает одно из лидирующих мест [6,10]. Особая опасность сочетания АГ с Д связана с резким ускорением на ее фоне формирования целого ряда патологических процессов, значимо повышающих риск возникновения тромбозов, негативно сказывающихся на общем прогнозе.
Есть наблюдения, что наличие у больного АГ и Д неизбежно приводит к нарушениям функционально-структурных характеристик форменных элементов крови [10], что в конечном итоге негативно отражается на процессе микроциркуляции. Высокая концентрация атерогенного холестерина в крови этих больных, сопровождающаяся гемодинамическими нарушениями и деспрессией антиоксидантной защиты организма ведет к активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) в их плазме [6]. Избыточное количество продуктов ПОЛ у любых биологических объектов и в любом возрасте дестабилизирует мембранно-рецепторные и пострецепторные структуры форменных элементов крови, негативно сказываясь на их функциональных параметрах [3,4,9]. Формирующиеся нарушения неизбежно усиливают агрегационные свойства всех клеток крови, что ухудшает ее реологические свойства, особенно в сосудах микроциркуляторного русла, и повышает риск тромбозов различной локализации [5,7]. Несмотря на доказанность значимой пользы в плане улучшения прогноза у больных АГ с Д от гиполипидемической диеты, дозированных физических нагрузок и длительного фармакологического воздействия с помощью статинов, далеко не все больные по разным соображениям готовы выполнять данные рекомендации. Представляет большой практический интерес развитие динамики агрегационных свойств клеток крови у этой категории больных, знание которой способно послужить основой для контроля результативности исследований по применению различных вариантов гиполипидемической терапии.
Цель работы: рассмотреть динамику агрегационных свойств форменных элементов крови у больных артериальной гипертонией с дислипидемией, сознательно отказавшихся от гиполипидемического воздействия.
Материалы и методы
Исследования выполнены на 34 больных АГ 1-2 степени, риск 3 с дислипидемией IIб типа, среднего возраста. Группа контроля представлена 26 клинически здоровыми людьми аналогичного возраста.
Концентрации общего холестерина (ОХС) и триглицеридов (ТГ) в плазме обследованных были оценены энзиматическим колориметрическим методом с помощью набора „Витал Диагностикум”. ХС липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) регистрировались при помощи набора „Ольвекс Диагностикум”. Количество общих липидов (ОЛ) выясняли с помощью набора „Эрба-Русс”. Содержание общих фосфолипидов (ОФЛ) в плазме определяли по содержанию в них фосфора, с последующим расчетом соотношения в плазме ОХС/ОФЛ. Количество ХС липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) выявляли расчетным путем по общепринятой методике. Уровень ХС липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП) определяли по формуле: ТГ/2,2. Коэффициент атерогенности рассчитывался по формуле ХС ЛПНП/ХС ЛПВП.
Уровень перекисного окисления липидов (ПОЛ) в плазме оценивался по количеству в ней ацилгидроперекисей (АГП) и тиобарбитуровой кислоты (ТБК)-активных продуктов набором „Агат-Мед” с учетом ее антиокислительной активности (АОА) общепринятым методом.
Активность ПОЛ в форменных элементах крови определяли по количеству в них после отмытия и ресуспендирования малонового диальдегида (МДА) в реакции восстановления тиобарбитуровой кислоты и по содержанию АГП. В отмытых и ресуспендированных форменных элементах крови количественно оценены уровни холестерина энзиматическим колориметрическим методом набором „Витал Диагностикум” и ОФЛ по содержанию в них фосфора с последующим расчетом отношения ХС/ОФЛ. В клетках крови также выявлялась активность каталазы и супероксиддисмутазы (СОД).
Спонтанная агрегация эритроцитов оценивалась на световом микроскопе путем подсчета в камере Горяева количества агрегатов эритроцитов, числа агрегированных и неагрегированных эритроцитов.
Активность агрегации тромбоцитов (АТ) исследовалась визуальным микрометодом в ответ на применение АДФ (0,5×10-4 М), коллагена (разведение 1:2 основной суспензии), тромбина (0,125ед/мл), ристомицина (0,8 мг/мл), адреналина (5,0×10-6 М.) и перекиси водорода (7,3× 10-3 М) со стандартизированным количеством тромбоцитов в исследуемой плазме 200×109 тр. Степень внутрисосудистого агрегатообразования тромбоцитов выяснялась при помощи фазовоконтрастного микроскопа.
Выраженность агрегационных свойств нейтрофилов определяли на фотоэлектроколориметре в их суспензии, полученной после отмытия и ресуспендирования с лектином зародыша пшеницы 32 мкг/мл, конканавалином А 32 мкг/мл и фитогемагглютинином – 32 мкг/мл.
Все больные были информированы о наличии у них дислипидемии и о степени ее угрозы для здоровья, но по имеющимся у них убеждениям они отказались от любого гиполипидемического лечения. Гипотензивная терапия велась эналаприлом 10мг 2 раза в сутки. Регистрация клинических и лабораторных показателей проводилась при взятии в исследование и через 6, 12, 18, 52 и 104 недели наблюдения. Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась t-критерием Стьюдента (p<0,05).
Результаты исследования
У наблюдаемых пациентов в исходе количество ОЛ и ОХ в крови были повышены по сравнению с контролем почти в 1,6 и 1,3 раза, соответственно, при уменьшении ОФЛ в их плазме почти в 2,3 раза. Это обеспечивало превалирование у больных величины отношения ОХС/ОФЛ в 3 раза по сравнению с контролем. Атерогенные фракции холестерина – ХС ЛПНП и ХС ЛПОНП у наблюдавшихся больных также были достоверно повышены в 1,7 и 1,7 раз, соответственно. Это сопровождалось увеличением в их крови уровня ТГ в 1,7 раза, понижением ХС ЛПВП на 50 % и повышением коэффициента атерогенности плазмы в 2,5 раза.
В жидкой части крови у наблюдаемых лиц с АГ и Д отмечено превалирование количества АГП и ТБК-активных продуктов почти в 2,3 и 1,4 раза над значениями у лиц, составивших контрольную группу, вследствие ослабления у них величины антиоксидантного потенциала плазмы в 1,4 раза.
У обследованных больных в мембранах форменных элементов крови отмечено достоверное увеличение ХС, сопровождающееся уменьшением ОФЛ и нарастанием в них градиента ХС/ОФЛ (в эритроцитах на 75,5 %, в тромбоцитах в 2,2 раза, в нейтрофилах на 85,1 %). При этом во всех учитываемых форменных элементах крови у лиц с АГ и Д выявлена активация ПОЛ в результате ослабления их антиоксидантной защиты.
При этом у больных зарегистрировано достоверное усиление агрегации эритроцитов с повышением в крови уровня суммарного вовлечения эритроцитов в агрегаты (на 63,9 %), увеличением количества самих агрегатов (на 47,8 %) и уменьшением на 53,2 % содержания в ней свободно перемещающихся эритроцитов.
В исходе у больных найдено выраженное сокращение времени развития АТ с отдельными индукторами и их комбинациями. Наиболее рано АТ возникала под действием коллагена (ускорена на 44,3 %). Чуть позже она развивалась в ответ на АДФ (ускорена на 63,3 %). Еще позднее АТ наступала в ответ на ристомицин (ускорена на 77,2 %), Н2О2 (ускорена на 59,9 %), тромбин (ускорена на 40,0 %) и адреналин (ускорена на 41,9 %). Процесс АТ с сочетаниями индукторов так же был выраженно ускорен. При этом число свободноциркулирующих в крови больных тромбоцитарных агрегатов различного размера (количество малых агрегатов было повышено в 4,6 раза, средних и крупных было увеличено в 30 раз) и степень вовлеченности в них тромбоцитов (повышена на 86,1 %) у лиц с АГ и Д весьма существенно превышали значения контроля.
В исходе наблюдения у пациентов агрегация нейтрофилов превышала уровень таковой в контроле со всеми испытанными индукторами (с лектином на 60,2 %, с конканавалином А на 29,7 %, с фитогемагглютинином на 39,8 %).
В течение всего наблюдения (104 нед.) ллоу пациентов выявлена стабильность нарушения липидного спектра крови, ослабления функциональных возможностей АОА и повышенные количества в плазме АГП и ТБК-продуктов.
В ходе наблюдения за пациентами во всех случаях отмечено сохранение исходно нарушенного липидного состава мембран эритроцитов. Аналогичная картина отмечена в мембранах тромбоцитов и нейтрофилов. Это было вызвано сохранением в них высокого содержания ХС и пониженного количества ОФЛ на уровнях близких к исходным до конца наблюдения.
На фоне отсутствия гиполипидемического лечения у наблюдаемых больных с АГ и Д также отмечено сохранение избыточного ПОЛ во всех форменных элементах крови за счет пониженной активности их антиоксидантной защищенности. Так, в течение 104 нед. наблюдения в эритроцитах, тромбоцитах и нейтрофилах пациентов отмечено сохранение исходно ослабленного уровня ферментативной активности СОД и каталазы.
В группе лиц, отказавшихся от гиполипидемического лечения, отмечена стабильность исходно усиленной агрегационной способности учитываемых форменных элементов крови. Так у пациентов, не получавших гиполипидемического воздействия, отмечено сохранение повышенных значений суммарного числа эритроцитов в агрегате и количества самих агрегатов при пониженном количестве в крови свободных эритроцитов в течение всех 104 нед. наблюдения.
Отсутствие гиполипидемического лечения сопровождалось у пациентов сохранением у них на уровне исхода процесса агрегации тромбоцитов in vitro и in vivo в течение всех 104 нед. наблюдения. Так у всех пациентов в эти сроки наиболее активным индуктором сохранялся коллаген, время развития АТ с которым к концу наблюдения оказалось наименьшим (22,4±0,31с). Второе место по скорости развития АТ принадлежало АДФ. Чуть позднее возникала АТ с ристомицином и Н2О2, еще позднее с тромбином и адреналином. Длительность АТ с сочетаниями индукторов на фоне отсутствия гиполипидемической терапии также достоверно не менялось. Наиболее ранняя АТ к концу наблюдения возникала под действием сочетания АДФ и коллагена (17,7±0,10с). При этом комбинация адреналина и коллагена вызвала агрегацию через 12,5±0,15с, а в ответ на АДФ и адреналин она наступала спустя 19,4±0,14с. Это сопровождалось неизменностью высокого числа свободно перемещающихся в крови тромбоцитарных агрегатов на фоне повышенного уровня включения в них тромбоцитов, оставшихся на уровне исхода до 104 нед. наблюдения.
У пациентов, отказавшихся от гиполипидемического лечения, найдено сохранение избыточной выраженности агрегации нейтрофилов со всеми примененными индукторами в течение всего контроля их состояния. Так, к концу наблюдения отмечено превалирование над контролем выраженности их агрегации в ответ на лектин на 58,3 %, на конканавалин А на 25,6 %, на фитогемагглютин на 39,8 %.
Обсуждение
Несмотря на разработанность схем лечебного воздействия на организм с помощью лечебной одежды [1,2], физических нагрузок [4] или медикаментов [6,10] и доказанность их пользы, далеко не все пациенты согласны выполнять даваемые им рекомендации. Проведенная работа была посвящена как раз именно таким больным. На фоне сознательного отказа от гиполипидемической терапии у лиц с АГ и Д было отмечено сохранение пониженной антиоксидантной защиты плазмы с неизменно усиленной в ней ПОЛ. Избыточность в течение 104 нед. наблюдения количества холестерина в их крови сопровождалась чрезмерным содержанием в течение этих сроков ХС и высокого уровня градиента ХС/ОФЛ в мембранах учитываемых форменных элементов крови.
У больных, отказавшихся от гиполипидемического лечения, отмечена неизменно высокая агрегационная способность эритроцитов, что в значительной мере является основой для сохранения у них нарушенных реологических характеристик крови. Очевидно, усиленная агрегация эритроцитов у больных АГ с Д, не принимавших гиполипидемического лечения, во многом вызвано стабильно низкой электроотрицательностью поверхности этих форменных элементов крови вследствие сохранения невысокого количества на их мембранах протеинов, имеющих отрицательный заряд [4]. Это вызвано стабильно высокой генерацией активных форм кислорода, сохраняющей не только чрезмерную оксидативную альтерацию электроотрицательных белков мембраны, но и глобулярных белков плазмы, осуществляющих роль «мостиков» между отдельными эритроцитами, что поддерживает на высоком уровне силы сцепления клеток в возникающих агрегатах. Усиленная агрегация эритроцитов на фоне отсутствия гиполипидемической терапии, видимо, также обеспечивается за счет стабильно низкой активности в них аденилатциклазы. Это ведет к сохранению в цитоплазме красных кровяных телец пониженного уровня цАМФ, повышению входа внутрь клетки Са2+ и повышению активности фосфодиэстеразы [5].
Стабильно раннее наступление АТ у пациентов, не получавших гиполипидемической терапии, оказалось возможным во многом за счет сохранения нарушенности липидного состава и избыточного уровня ПОЛ в плазме и в кровяных пластинках. Эти факторы мощно нарушали в течение длительного времени их рецепторные и пострецепторные механизмы реализации агрегации [9]. Раннее наступление АТ в ответ на ристомицин у больных, не получавших гиполипидемического лечения, можно также объяснить высокой концентрацией в крови фактора Виллебранда и большого числа рецепторов к нему на поверхности тромбоцитов. Ускоренное наступление АТ с Н2О2 подтверждало отсутствие динамики ослабленной системы антиокисления в тромбоцитах, в т.ч. выявленное при прямом исследовании активности каталазы и супероксиддисмутазы. Быстрое развитие АТ в случае применения сочетаний индукторов доказывало сохранение нарушенности целостного функционирования у больных рецепторных систем кровяных пластинок во внутрисосудистых условиях [8].
Отсутствие динамики у пациентов избыточной агрегации нейтрофилов за 104 нед. наблюдения обеспечивалось сохранением в их мембранах высокого соотношения ХС/ОФЛ и избыточного количества в составе гликопротеиновых рецепторов локусов, связывающих лектины. Так, фитогемагглютинин способен взаимодействовать в основном с участками bD-галактозы гликопротеинов, лектин зародыша пшеницы – с N-ацетил-D-глюкозамином и N-ацетил-нейраминовой (сиаловой) кислотой, а конканавалин А – с содержащими маннозу N-гликанами. Найденное стабильно высокая лектинстимулированная агрегация нейтрофилов у больных АГ с Д, не получавших гиполипидемического лечения, была вызвана избыточной экспрессией рецепторов адгезии, имеющих повышенное содержание в их составе количества участков, содержащих N-ацетил-D-глюкозамин, N-ацетил-нейраминовую кислоту и маннозу, о чем можно было судить по высокой агрегационной активности нейтрофилов на действие лектина зародыша пшеницы и конканавалина А. Чрезмерная выраженность индуцированной фитогемагглютинином агрегация нейтрофилов, видимо, связана с сохранением у больных стабильно высокого содержания в их рецепторах участков гликопротеинов, содержащих bD-галактозу.
Таким образом, сознательное невыполнение гиполипидемических рекомендаций в течение 104 нед. больными АГ и Д сопровождается сохранением у них высокой агрегации эритроцитов, тромбоцитов и нейтрофилов, что способствует стабильностью у них высокого риска тромбообразования.
Заключение. Отказ от гиполипидемической терапии сопровождается у пациентов с АГ и Д стабильно нарушенным липидным составом и избыточным уровнем ПОЛ в плазме и форменных элементах крови в течение всех 104 недель наблюдения. Отсутствие гиполипидемической терапии сохраняет в эти сроки у больных с АГ и Д избыточно высокие агрегационные возможности эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов.
Библиографическая ссылка
Скорятина И.А., Медведев И.Н. ОЦЕНКА АГРЕГАЦИОННОЙ АКТИВНОСТИ ОСНОВНЫХ ФОРМЕННЫХ ЭЛЕМЕНТОВ КРОВИ У БОЛЬНЫХ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТОНИЕЙ С ДИСЛИПИДЕМИЕЙ, ОТКАЗАВШИХСЯ ОТ ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ // Современные проблемы науки и образования. – 2016. – № 4. ;URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=25000 (дата обращения: 19.04.2024).