Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Биттуева М.М. 1 Боготова З.И. 1 Даурова Л.В. 1 Гидова Э.М. 1 Паритов А.Ю. 1 Хандохов Т.Х. 1 Ситников М.Н. 1 Керефова М.К. 1

---

1 ФГБОУ ВПО «Кабардино-Балкарский государственный университет им. Х.М. Бербекова»

Проведено исследование по индивидуальному генотипированию здоровых и больных женщин в Кабардино-Балкарской Республике для определения групп риска с повышенной предрасположенностью развития наследственной формы рака молочной железы. Проведен анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов, а также ассоциаций генотипов с возможными рисками развития рака молочной железы. Собраны образцы крови и выделена ДНК более 300 человек (контрольная и опытная группа). На данной выборке выявлены случаи носительства мутаций гена 6174delT гена BRCA2 и мутаций 5382insC и 4154delA гена BRCA1 у женщин, больных раком молочной железы. Полученные данные дают возможность сделать вывод об установлении наследственных форм рака молочной железы. Проведение сравнительного анализа частот аллелей генов предрасположенности к наследственной форме данного заболевания даст возможность открыть генетические причины увеличения раковых заболеваний и определить группы наибольшего риска.

Статья в формате PDF

273 KB

Кабардино-Балкария

генетическая предрасположенность

ген BRCA2

ген BRCA1

рак молочной железы

1. Денисов Е.В. Изучение взаимосвязи ARG72PRO полиморфизма и соматических мутаций гена ТР53 у больных раком молочной железы // Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике.– Новосибирск: Альфа Виста Н, 2009. – Вып. 13. – С. 66.

2. Зинатуллина Г.З. Определение факторов прогноза течения рака молочной железы на основании молекулярно-генетичеких исследований: Автореф. дисс. канд. мед. наук. – Уфа, 2007. – 24 с.

3. Имянитов Е.Н. Наследственный рак молочной железы// Практическая онкология. – 2010. – Т. 11, №4. – C. 258-259.

4. Любченко Л.Н., Гарькавцева Р.Ф., Поспехова Н.И., Карпухин А.В. Медико-генетическое консультирование при наследственном раке молочной железы // Медицинская генетика. – 2008. – №10. – С.30-34.

5. Тарасов В.А., Асланян М.М., Цырендоржиева Е.С., Литвинов С.С., Гарькавцева Р.Ф., Алтухов Ю.П. Генетически обусловленная подразделенность популяций человека по риску развития рака молочной железы у женщин // Доклады Академии наук. – 2006.– Т. 406, №2. – С. 281-285.

6. Dunning A.M., Dowsett M., Healey C.S. et al. Polymorphisms associated with circulating sex homone levels in postmenopausal women // J. Natl. Cancer. Inst. – 2004. – Vol. 96. – p. 936 – 945.

7. Easton D.F., Steele L., Fields P. et al. Cancer risks in two iarge breast cancer families linked to BRCA2 on chromosome 13q 12-13 // Am. J. Hum. Genet. – 1995. V. 57. – P. 1284-1297.

8. Miki Y., Swensen J., Shattuck-Eidens D. et al. A strong candidate for the breast and ovarian cancer susceptibility gene BRCA1 // Science. – 1994. V. 266. – P. 66-71.

9. Wooster R. et al. Identification of the breast cancer susceptibility gene BRCA2// Nature. –1995. V. 378. – P. 789 – 792.

Рак молочной железы является одной из наиболее распространенных нозологических форм в структуре онкологических заболеваний у женщин во всем мире и в России. Интенсивному изучению подвергается молекулярный этиопатогенез злокачественных опухолей молочной железы. Уже установлено, что различного рода наследственные мутации, поддерживающие целостность генома (BRCA1, BRCA2, PTEN, TP53, CHEK2, MLH1, MSH2, LKB1/STK11, CDH1), вносят существенный вклад в развитие данного заболевания [1].

Разработка новых подходов в диагностике и лечении предраковых состояний связана с высокой актуальностью проблемы заболеваемости молочной железы.

Появление новых инструментальных методов обследования женского населения позволяют не только диагностировать, но и правильно интерпретировать полученные результаты. Наследственный рак молочной железы (РМЖ) является самой частой разновидностью семейных опухолевых заболеваний. Его вклад в общую встречаемость РМЖ составляет примерно 5-10% [3]. Большой резонанс в обществе и среди исследователей-онкологов вызвало открытие в 1994г. гена BRCA1 (от Breast cancer - рак молочной железы), который является в случае мутаций причиной около половины всех случаев наследственного РМЖ [8]. Годом позже был открыт второй ген (BRCA2), который также ассоциирован с наследственной предрасположенностью к раку молочной железы [7,9]. У женщин с мутациями в данных генах РМЖ развивается в 70-80% случаев, с мутацией в гене BRCA2 повышается риск развития рака яичников (РЯ) [4]. В настоящее время приоритетом современной медицины является ранняя преддиктивная диагностика заболеваний. От возможности выявить болезнь на начальном этапе зависит степень успешности лечения. В связи с этим весьма актуальна разработка и введение в медицинскую практику эффективных методов прогнозирования и ранней диагностики с применением молекулярно-генетических технологий. Данные технологии позволяют выявить мутации в генах, контролирующих клеточных цикл и репарацию повреждений ДНК, повышающих риск возникновения исследуемой патологии. В мире интенсивно изучается спектр мутаций в генах семейства BRCA. Этот спектр весьма специфичен в разных популяциях. С помощью ДНК-диагностики и знания спектра и частоты мутаций, характерных для страны или региона, можно выявлять группы риска людей с повышенной предрасположенностью к онкопатологиям. В России проводились исследования по изучению спектра мутаций гена BRCA1 и BRCA2 у больных с семейными формами заболевания Московской и Ленинградской областей, также исследованы популяции населения Башкирии и Читинской области [2,5]. Лидирующее положение по частоте встречаемости занимает мутация 5382insC. Полученные результаты имеют существенное значение для практической ДНК-диагностики наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников в России, главным образом, у женщин русского этнического происхождения, башкир и бурят. Литературных данных о проведении аналогичных работ по Северному Кавказу не имеется.

Целью настоящего исследования является проведение индивидуального генотипирования здоровых и больных женщин в Кабардино-Балкарской Республике для определения групп риска с повышенной предрасположенностью развития наследственной формы рака молочной железы.

Материалы и методы

Материалом для исследования служили образцы ДНК здоровых и больных раком молочной железы женщин Кабардино-Балкарии. Образцы венозной крови были собраны на базе ГБУЗ «Онкологический диспансер» МЗ КБР и ФГОУ ВПО «Кабардино-Балкарский Государственный университет им. Х.М. Бербекова», начиная с 2009 года. Данные представлены по материалам ГБУЗ «ОД» КБР и основаны на анализе результатов комплексного обследования и лечения 150 больных раком молочной железы в возрасте от 25 до 78 лет. Во всех случаях диагноз рака молочной железы был верифицирован морфологически. По настоящее время продолжается работа по пополнению банка ДНК из числа больных РМЖ и здоровых лиц. С информированного согласия о цели исследований производился забор крови. Методом анкетирования получены популяционно-генетические данные обследованных здоровых (контрольная группа) и больных РМЖ пациенток.

Выделение ДНК из цельной крови осуществляли при помощи набора реагентов «QIAamp DNA Blood Mini Kit» (фирмы «Qiagen», Германия). Аллель-специфичную ПЦР-реакцию проводили с использованием набора реагентов для ПЦР для выявления мутаций 5382insC и 4154delA, 185delAG гена BRCA1 и 6174delT гена BRCA2 (фирма «Изоген», Россия; фирма «Литех», Россия). ПЦР-фрагменты разделяли в 2% агарозном геле.

Результаты и обсуждения

Поскольку существует специфичность в распределении мутаций и полиморфных вариантов разных генов у разных народов, в генетических исследованиях различных заболеваний следует учитывать этническое происхождение группы больных и контроля. В ходе исследования уточнялись данные об этнической принадлежности пациенток путем опроса и выяснения национальной принадлежности родителей до третьего поколения. В контрольной, и опытной группе можно выделить три доминирующие нации, проживающие на территории республики: кабардинцы, балкарцы и русские.

По возрастному составу контрольная и опытная группа несколько отличались. В контрольной группе возраст женщин колеблется от 20 до 69 лет (средний возраст 31,3 лет) (рис.1).

Рис.1. Возрастной состав контрольной группы

В группе больных РМЖ - от 25 до 78 лет (средний возраст 52 года) (рис.2).

Рис. 2. Возрастной состав обследованных больных РМЖ

При распределении больных по возрасту возникновения и развития РМЖ, пик манифестации заболевания отмечается в возрасте от 50 до 59 лет, что составило 40% от всей выборки больных.

Случаи онкопатологий в семьях у исследуемых лиц

При сборе и обработке клинического материала особое внимание уделялось выявлению случаев заболевания раком, в частности раком молочной железы, в семьях исследуемой выборки. Среди больных было отмечено наличие случаев различных онкопатологий в анамнезе у представителей разной степени родства (табл. 1).

Таблица 1

Процентное соотношение формы рака молочной железы и другой онкопатологии

в исследуемой выборке больных

Распределение больных раком молочной железы по характеру менструально-овариальной функции

В результате множества научных исследований отмечено повышение риска возникновения и развития рака молочной железы в раннем возрасте менархе, поздней менопаузе, что риск развития данной патологии связан с нарушением гормональной функции яичников, надпочечников, щитовидной железы, гипофиза, гипоталамической системы [6]. Среди исследуемой группы пациенток с РМЖ средний возраст менархе 13,6 лет. Распределение больных по состоянию репродуктивной функции отражено в таблице 2.

Таблица 2

Распределение больных раком молочной железы по характеру

менструально-овариальной функции

У 90% пациенток имеются дети, из них 86% кормили ребенка грудью. При проведении анкетирования нами было выявлено, что 98% из исследуемой опытной группы не курит, не принимает гормональные контрацептивы, у 82% работа не связана с вредным воздействием производства, и только у 18% работа ранее была связана с химическими реактивами и изотопами. Неоднократное раннее прерывание беременности выявлено у 80% женщин в опытной группе.

Среди контрольной группы средний возраст менархе 12,8 лет. У 61% имеются дети, из них 97% кормили ребенка грудью. Распределение женщин контрольной группы по состоянию репродуктивной сферы показан в таблице 3.

Таблица 3

Распределение контрольной группы по характеру

менструально-овариальной функции

Выявляется клинической особенностью рака молочной железы у больных, проживающих на территории Кабардино-Балкарии, в зависимости между возрастом возникновения заболевания и состоянием репродуктивной функции организма женщины.

Исследуется наличие мутаций 5382insC, 185delAG, 4154delA гена BRCA1 и 6174delТ гена BRCA2. У больных раком молочной железы выявлена высокая частота носительства (4%) мутации 5382insC гена BRCA1. Обнаружен более ранний возраст манифестации заболевания у носителей данной мутации. Обнаружены случаи носительства мутации 6174delТ гена BRCA2 (2,7%).

Заключение

Наличие мажорной мутации в гене BRCA1 (5382insC) позволяет проводить скрининговые исследования в группах повышенного риска и у женщин с неотягощенным семейным анамнезом с целью своевременной первичной профилактики возникновения и развития данной патологии.

Продолжается работа по генотипированию контрольной и опытной групп с целью выявления носительства других мутаций.

Сопоставление частот аллелей перечисленных генов предрасположенности к наследственной форме РМЖ в группах больных и здоровых женщин позволит выявить генетические причины роста онкозаболеваемости, а также определить группы повышенного риска.

Рецензенты:

Кетенчиев Х.А., д.б.н., профессор Кабардино-Балкарского Государственного университета им. Х.М. Бербекова, г. Нальчик.

Арсанукаев Д.Л., д.б.н., профессор Чеченского Государственного университета, г. Грозный.

Библиографическая ссылка