Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

THE USE OF HPLC IN THE ANALYSIS OF SUPPOSITORIES WITH FENOTROPIL AND CINNARIZINE

Dukkardt L.N. 1 Senchenko S.P. 1 Markova O.M. 1 Khartyunova E.I. 1
1 Pyatigorsk Medical – Pharmaceutical Institute - branch of PBEI of HPT to VolgGMU
Разработана методика анализа суппозиториев, содержащих циннаризин и фенотропил. Для качественного и количественного анализа циннаризина и фенотропила использован метод ВЭЖХ. Исследование проведено на жидкостном хроматографе «Стайер» фирмы Аквилон (Россия – США - Чехия), снабженного колонкой Luna С-18 4,6×150 мм (Phenomenex, США), с содержанием углерода 16%. Установлено, что оптимальным является градиентный режим элюирования. В качестве подвижной фазы использовали ацетонитрил и раствор муравьиной кислоты 2%. Детектирование проводили при длине волны 254 нм. Проведенная валидационная оценка предложенной методики по критериям: линейность, правильность, прецизионность подтвердила возможность использования ее для количественного определения циннаризина и фенотропила в суппозиториях.
The method of analysis suppositories containing cinnarizine and fenotropil was developed. The method of HPLC used for qualitative and quantitative analysis of cinnarizine and fenotropil. The study was conducted on a liquid chromatograph "Stayer" firm Aquilon (Russia - USA - Czech Republic) equipped with a column Luna C-18 of 4.6×150 mm (Phenomenex, USA), with a carbon content of 16%. It is established that the optimum is the gradient elution mode. Acetonitrile and formic acid 2% were used as the mobile phase. Detection was performed at a wavelength of 254 nm. Conducted a validation assessment of the proposed methodology criteria: linearity, accuracy, precision confirmed the possibility of its use for the quantitative determination of cinnarizine and fenotropil in suppositories.
HPLC
suppositories
cinnarizine
fenotropil
nootropic drugs

Сосудистые поражения мозга в экономически развитых странах в последние десятилетия выдвинулись в число ведущих причин смертности населения, составляя в её структуре около 14%. Мозговой инсульт определяет более 30% всех случаев смерти от сердечно-сосудистых заболеваний.

Факторами, способствующими развитию сосудистых заболеваний сердца и мозга, являются условия современной жизни, прежде всего экологическое неблагополучие, урбанизация и автоматизация, нервное перенапряжение в трудовых процессах, недостаточная двигательная активность, особенности современного питания, повышение потребления алкоголя [1].

Для лечения заболеваний, связанных с нарушением мозгового кровообращения, широко применяются ноотропные лекарственные средства.

Ноотропы - это вещества, оказывающие специфическое влияние на высшие интегративные функции мозга, улучшающие память, облегчающие процесс обучения, стимулирующие интеллектуальную деятельность, повышающие устойчивость мозга к повреждающим факторам, улучшающие кортикально-субкортикальные связи. Ноотропные препараты способны улучшать когнитивные (познавательные) функции как у здоровых людей, так и, в особенности, нарушенные при различных заболеваниях [1,2].

С целью расширения ассортимента ноотропных лекарственных средств была разработана оптимальная технология суппозиториев на гидрофильной основе, содержащих два ноотропных препарата - циннаризин и фенотропил. Циннаризин (транс-1-циннамил-4-дифенилметилпиперазин) избирательно влияет на мозговое, периферическое и коронарное кровообращение [2]. Фенотропил (N-карбамоил-метил-4-фенил-2-пирролидон) – ноотропный препарат нового поколения, отличающийся широким спектром действия и высокой активностью. Известно, что фенотропил может усиливать действие препаратов, стимулирующих ЦНС, антидепрессантов и ноотропных препаратов [3, 4].

Целью данного исследования явилась разработка методик анализа суппозиториев, содержащих циннаризин и фенотропил.

Материалы и методы

Материалом для исследования служили субстанции, соответствующие требованиям НД: фенотропил (ФСП 42-0348-4414-03) и циннаризин (НД 42-11672-06).

Для разработки методикb анализа и ее валидационной оценки были изготовлены суппозитории с циннаризином и фенотропилом состава:

Циннаризина 0,05

Фенотропила 0,05

Основы (ПЭО) необходимое количество для получения суппозиториев массой 2,0 г.

Полученные суппозитории имели торпедообразную форму белого цвета со слегка кремоватым оттенком. Масса одного суппозитория находилась в пределах 2,0±0,01 г.

Для качественного и количественного анализа циннаризина и фенотропила в суппозиториях использовали метод ВЭЖХ.

Исследование проводили с использованием жидкостного хроматографа «Стайер» фирмы Аквилон (Россия – США - Чехия), снабженного колонкой Luna С-18 4,6×150 мм (Phenomenex, США), с содержанием углерода 16%.

В результате предварительных исследований было установлено, что оптимальным является градиентный режим элюирования. В качестве подвижной фазы использовали ацетонитрил и раствор муравьиной кислоты 2%. Содержание ацетонитрила первые три минуты составляло 30%, а с третьей до пятнадцатой минуты его концентрация возрастала до 100%, при расходе подвижной фазы 1 мл/мин. Объём пробы - 20 мкл. Детектирование проводили при длине волны 254 нм.

Для приготовления испытуемого раствора один суппозиторий помещали в термостойкую колбу с обратным холодильником, добавляли 100 мл спирта этилового 96% и нагревали на кипящей водяной бане до его полного растворения. Полученное извлечение охлаждали, фильтровали, переносили в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводили спиртом этиловым 96% до метки и перемешивали. Полученный раствор перед вводом в хроматограф центрифугировали при 7000 мин-1 в течение 5 мин.

Раствор СО готовили по методике: около 0,05 г (точные навески) фенотропила и циннаризина помещали в мерную колбу вместимостью 200 мл, растворяли в 100 мл спирта этилового 96% и доводили до метки тем же растворителем.

Результаты и их обсуждение

Полученные хроматограммы раствора сравнения и испытуемого раствора представлены на рисунках 1 и 2.

Идентификацию проводили, сравнивая времена удерживания пиков на хроматограммах испытуемого раствора и раствора сравнения. Исходя из предложенных хроматограмм, следует, что время удерживания циннаризина и фенотропила в исследуемом растворе совпадает со временем удерживания этих веществ при анализе раствора стандартных образцов. Кроме того, методом добавок было установлено, что площади пиков увеличиваются пропорционально количеству добавленных стандартов, а асимметричность и эффективность остается на прежнем уровне, что свидетельствует о способности методики специфично определить циннаризин и фенотропил в суппозиториях.

Рис. 1. Хроматограмма раствора СО, содержащего циннаризин и фенотропил

Рис.2. Хроматограмма испытуемого раствора из суппозиториев

с циннаризином и фенотропилом

Предложенная методика количественного определения циннаризина и фенотропила в суппозиториях была подвергнута валидационной оценке по критериям прецизионность (воспроизводимость), линейность и правильность [5].

Изучение зависимости между площадями пиков анализируемого раствора и содержанием в нем фенотропила и циннаризина показало, что она имела линейный характер при содержании фенотропила в интервале от 0,1 до 0,5 мг/мл, а циннаризина – от 0,05 до 0,4мг/мл. Линейная зависимость выражается уравнениями: y=870,8x–8,3 (для фенотропила) и y=10854,7x–201,3 (для циннаризина), коэффициенты корреляции при этом составляли 0,999 и 0,998 соответственно.

Для установления прецизионности методики проводили 6 параллельных определений циннаризина и фенотропила. Определялась величина стандартного отклонения (SD) и относительного стандартного отклонения (RSD). Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1

Результаты испытания прецизионности методики определения фенотропила и циннаризина в суппозиториях

Найдено фенотропила, г/суппозиторий

Метрологические характеристики

 

Найдено

циннаризина, г/суппозиторий

Метрологические характеристики

 

0,0500

 

 

= 0,0498

SD = 0,000286

RSD = 0,57%

0,0489

 

 

= 0,0493

SD = 0,000490

RSD = 0,99%

0,0498

0,0498

0,0496

0,0500

0,0501

0,0492

0,0499

0,0495

0,0494

0,0488

Для обоих веществ значение RSD составляет менее 1%, что свидетельствует о низком значении случайной погрешности.

Правильность разработанной методики определяли на модельной смеси циннаризина и фенотропила. Содержание активных веществ определяли предложенным методом ВЭЖХ. С этой целью был построен трехуровневый эксперимент по 3 опыта на каждом уровне. Для оценки полученных результатов наиболее простым и наглядным критерием служит открываемость (R). Полученные данные представлены в таблицах 2 и 3.

Таблица 2

Результаты установления правильности методики количественного определения фенотропила

Уровень

Взято

Найдено фенотропила,

г

R, %

Навеска суппозитория, г

Расчетное содержание фенотропила, г

1

1,53

0,0383

0,0378

98,69

1

1,56

0,0390

0,0391

100,26

1

1,51

0,0378

0,0380

100,53

2

2,03

0,0508

0,0507

99,80

2

2,02

0,0505

0,0509

100,79

2

2,05

0,0513

0,0511

99,61

3

2,58

0,.645

0,0651

100,93

3

2,52

0,0630

0,0633

100,48

3

2,55

0,0638

0,0633

99,22

 

 

 

 

=100,03

 

Таблица 3

Результаты установления правильности методики количественного определения циннаризина

Уровень

Взято

Найдено циннаризина, г

R, %

Навеска суппозитория, г

Расчетное содержание циннаризина, г

1

1,53

0,0383

0,0382

99,74

1

1,56

0,0390

0,0391

100,26

1

1,51

0,0378

0,0377

99,74

2

2,03

0,0508

0,0506

99,61

2

2,02

0,0505

0,0506

100,20

2

2,05

0,0513

0,0514

100,19

3

2,58

0,.645

0,.647

100,31

3

2,52

0,0630

0,0635

100,79

3

2,55

0,0638

0,0635

99,53

 

 

 

 

=100,04

Согласно данным таблиц 3 и 4 величина средней открываемости () для обоих веществ находится в пределах 99–101%, что свидетельствует об отсутствии влияния систематической погрешности на результаты эксперимента.

Выводы:

1. Разработана методика ВЭЖХ определения фенотропила и циннаризина в суппозиториях.

2. Проведена валидационная оценка предложенной методики по критериям: линейность, правильность, прецизионность.

3. Результаты валидационной оценки методики количественного определения циннаризина и фенотропила в суппозиториях показали, что этот метод позволяет достоверно определять данные вещества при их совместном присутствии.

Резензенты:

Компанцев Д.В., д.фарм.н., профессор кафедры технологии лекарств Пятигорского медико-фармацевтического института, филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ, г.Пятигорск;

Попова О.И., д.фарм.н., профессор кафедры фармакогнозии Пятигорского медико-фармацевтического института, филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ, г. Пятигорск.