Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

ABOUT GENETIC DETERMINANTS OF A PREEKLAMPSIYA OF VARYING SEVERITY

Kaganovich E.N. 1
1 The Belgorod state national research university
В статье приведены некоторые результаты ассоциаций молекулярно-генетических маркеров с морфологическими характеристиками плаценты у беременных с преэклампсией русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России. Проведен комплексный анализ частот аллелей и генотипов у беременных с преэклампсией и беременных с нормально протекающей беременностью. Группу беременных с преэклампсии различной степени тяжести составили 250 индивидуумов, а контрольную группу 245 беременных без преэклампсии. Среди беременных с преэклампсией 1-я степень тяжести наблюдалась у 95 женщин (38%), 2-я степень тяжести - у 100 индивидуумов (40%), а 3-я степень тяжести - у 55 беременных (22%). При сравнении частот отдельных генетических вариантов исследуемых цитокинов у беременных с преэклампсией различных степеней тяжести и в контрольной группе статистически достоверных различий выявлено не был.
Some results of associations of molecular and genetic markers with morphological characteristics of a placenta at the pregnant women from a preeklampsiya Russian nationality who are natives of the Central Chernozem region of Russia are given in article. The complex analysis of frequencies of alleles and genotypes at pregnant women with a preeklampsiya and pregnant women with normally proceeding pregnancy is carried out. The group of pregnant women from a preeklampsiya of varying severity was made by 250 individuals, and control group of 245 pregnant women without preeklampsiya. Among pregnant women with a preeklampsiya the 1st severity was observed at 95 women (38%), the 2nd severity - at 100 individuals (40%), and the 3rd severity - at 55 pregnant women (22%). When comparing frequencies of separate genetic options of the studied tsitokin at pregnant women with a preeklampsiya of varying severity and in control group of statistically reliable distinctions it wasn´t revealed.
preeklampsiya
arterial pressure
pregnancy
tsitokins
primers and probes
severity
Преэклампсия - это осложнение гестационного периода беременности, возникающее во второй ее половине. В основе патологии лежат расстройства функций эндокринной, сердечно-сосудистой центральной и вегетативной нервной систем, а также нарушения обменных процессов, микроциркуляции, иммунного ответа и других функций организма [4]. В настоящее время общепринятым считается полиэтиологичность ПЭ. Это специфичное для беременности осложнение и развитие его связано с особенностями самого гестационного процесса. Несмотря на высокий интерес к проблеме, генез данной патологии остается малоизученным. [2]. Важное значение в реализации патогенетических механизмов развития преэклампсии отводится цитокинам [1], что требует более детального рассмотрения их медико-биологических и молекулярно-генетических характеристик.

Цель исследования

Изучить генетические полиморфизмы цитокинов -308 G/ATNFα (rs1800629), +36 A/GTNFR1 (rs767455),+250 A/GLtα (rs909253), -403 G/ARANTES(rs2107538), -801 G/ASDF1 (rs1801157), C/GMCP-1 (rs 285765), +1931 А/Т MIP1β (rs1719153) и оценить их патогенетическую значимость при ПЭ различной степени тяжести.

Материалы и методы

Проведено молекулярно-генетическое исследование двух выборок женщин: 250 пациенток с преэклампсией и 245 женщин контрольной группы. Общий объем исследуемой выборки составил 495 человек. Средний возраст пациенток с преэклампсией равен 31,2±7,5 лет (варьирует от 18 лет до 42 лет), контрольной группы - 30,2±6,3 лет (варьирует от 16 до 42 лет, р>0,05). Критериями включения в исследуемые выборки являлись: русская национальность, уроженцы Центрально-Черноземного района Российской Федерации, не имеющие родства между собой. В группу пациенток с ПЭ включались индивидуумы с подтвержденным клиническими и клинико-лабораторными методами обследования диагнозом преэклампсия. Контрольная группа формировалась из женщин с физиологическим течением беременности. Обследование беременных проводилось в Перинатальном центре Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. Сбор клинического материала осуществлялся врачом - перинатологом, к.м.н. Добродомовой И.С.

Среди 495 беременных 245 пациенток было с физиологическим течением гестации и 250 беременных женщин с ПЭ: 95 беременных с преэклампсией I степени тяжести, 100 - с преэклампсией II степени тяжести и 55 - с III степенью тяжести преэклампсией. Степень тяжести ПЭ оценивалась по шкале Goecke в модификации Г.М. Савельевой [3].

У каждой беременной с преэклампсией тщательно собирался анамнез (наличие вредных привычек, психо-эмоциональных перенапряжений, наличие преэклампсии у родственников, данные о менструальном цикле, возраст начала половой жизни, наличие заболевания передающиеся половым путем до беременности и во время данной беременности, наличие гинекологических заболеваний, возраст наступления первой беременности, количество и исход предыдущих беременностей, наличие осложнений после родов, медицинских абортов, вид контрацепции до наступления данной беременности).

Молекулярно-генетическое исследование выполнялось в лаборатории "Молекулярной генетики человека" медицинского института НИУ БелГУ.

Материалом для исследования послужила ДНК, выделенная из венозной крови исследуемых индивидуумов. Выделение геномной ДНК из периферической крови производилось методом фенол-хлороформной экстракции [5]. Этапы выделения ДНК включали:

1. Лизирование осажденных в PBS (pH=8.4) лейкоцитов в ТЕ-буфере протеиназой К в течении 20 часов при 37°С.

2. Отмывка ДНК лизированных лейкоцитов. Сначала 1:1 фенолом, забуференным HCl (pH=7.4), потом забуференных в соотношении 1:1 объемами фенола и хлороформа на два объема надосадочной жидкости и после этого хлороформом (1:1).

3. Затем ДНК преципитировалась этанолом (-20°С), высушивалась, растворялась ТЕ-буфером и замораживалась (-20°С).

Методом ПЦР синтеза ДНК проводили анализ исследуемых генетических полиморфизмов -308 G/ATNFα (rs1800629), +250 A/GLtα (rs909253), +36 A/GTNFR1 (rs767455),-801 G/ASDF 1(rs1801157), +1931 А/Т MIP1β (rs1719153) на амплификаторе IQ5 (Bio-Rad). Использовали стандартные олигонуклеотидные праймеры и зонды с дальнейшим анализом полиморфизмов методом дискриминации аллелей. При проведении ПЦР реакционная смесь объемом 25 мкл  включала: геномная ДНК в количестве 0,1 мкг,2,5мМ MgCl2,67 мМтрис-HCl (pH=8,8), зонды в количестве по 5 пкмоль каждый, праймеры по 10 пМ каждый, dATP, dGTP, dCTP, dTTP в концентрации по 200 мкМ каждый, Taq-полимераза в количестве 1-2единицы активности.

После денатурации (при t 95°С 4 мин.) были выполнены 40 циклов амплификации по следующей схеме: отжиг праймеров - при t +49-66°С 1 мин.; денатурация - при t +95°С 15 сек.

Генотипирование ДНК-маркеров производили на амплификаторе «IQ5» с помощью метода детекцииTаqMаn зондов на основе уровня относительной флуоресценции каждого зонда c системой детекции в режиме реального времени. Для генотипирования локусов использовалась программа «Biо-Rаd IQ5-Stаndart Editiоn».

Результаты исследования

Проведен анализ распределения частот изучаемых полиморфных маркеров генов цитокинов в группах беременных с преэклампсии различной степени тяжести (n=250) и в контрольной группе (n=245). Среди беременных с преэклампсией 1-я степень тяжести наблюдалась у 95 женщин (38%), 2-я степень тяжести - у 100 индивидуумов (40%), а 3-я степень тяжести - у 55 беременных (22%). При сравнении частот отдельных генетических вариантов исследуемых цитокинов у беременных с преэклампсией различных степеней тяжести и в контрольной группе статистически достоверных различий выявлено не было

Далее проведено изучение роли сочетаний генетических полиморфизмов цитокинов в развитии преэклампсии различных степеней тяжести.

Установлено, что в формировании значимых комбинаций, отличающих беременных с ПЭ I степени тяжести от контрольной группы участвуют пять из восьми изученных генетических полиморфизмов: -308 G/ATNFα (rs1800629), +250 A/GLtα (rs909253), -403 G/ARANTES(rs2107538), -801 G/ASDF1 (rs1801157), C/GMCP-1 (rs 285765), +1931 А/Т MIP1β (rs1719153). При этом пять «значимых» локусов формируют и пять статистически значимых сочетаний генетических вариантов, отражающих особенности генетической конституции беременных с преэклампсией I степени тяжести.

Получено, что в формировании двух комбинаций принимают участие по четыре генетических варианта исследуемых локусов цитокинов. Сочетание аллелей+1931 А MIP1β, +250 А Ltα, -403 GRANTESи-308 GTNFα встречается у 73,03% беременных с преэклампсией I степени тяжести, что меньше показателя контрольной группы (86,53%, р=0,004). Также выявлено, что среди беременных с преэклампсией I степени тяжести комбинация генетических маркеров +1931 А MIP1β, -801 GSDF1, +250 А Ltαи -308 GTNFα (73,63%) регистрируется в 1,17 раза реже, чем в контрольной группе, (86,53%, р=0,005). Данные сочетания имеют протективный характер (OR=0,42, 95% CI 0,23-0,76 и OR=0,43, 95% CI 0,24-0,78, соответственно).

В формировании трех других значимых комбинаций участвуют по три генетических варианта изучаемых полиморфных локусов. При этом все эти сочетания оказывают протективное действие на развитие преэклампсией I степени тяжести (OR=0,43-0,46). Установлено, что в контрольной группе распространенность комбинаций генетических вариантов +1931 А MIP1β, +250 А Ltαи -403 GRANTES(86,94%), +1931 А MIP1β ,+250 А Ltαи -308 GTNFα (88,57%) и +1931 А MIP1β, -801 GSDF1, +250 А Ltα (86,94%) превышает аналогичные показатели беременных с ПЭ I степени тяжести (74,73%, р=0,007, 76,92%, р=0,007, 75,27%, р=0,01, соответственно).

Выявлены особенности «генетической конституции» беременных с преэклампсией II - III степени тяжести по исследуемым генам цитокинам. Комбинация генетических вариантов -801 АSDF1,+36 GGTNFR1 и -308 А TNFα, встречается у 4,66% беременных с ПЭ с II - III степеней тяжести, что в 3,82 раза выше аналогичного показателя контрольной группы - 1,22%. Эта комбинация является фактором риска развития преэклампсией II - III степеней тяжести (p=0,04, ОR=3,95, 95% CI 1,01-15,51).

Наоборот, сочетание аллелей -801 GSDF1 и GMCP (rs 285765) имеет протективное значение для формирования преэклампсией II - III степеней тяжести (p=0,02, OR=0,59, 95% CI 0,36-0,98). Данная комбинация  генетических вариантов зарегистрирована у 21,43% беременных с преэклампсией II - III степеней тяжести и у 31,43%  женщин контрольной группы (p=0,02).

Выводы

Подводя итог полученным материалам, можно сделать вывод о значимой роли генетических полиморфизмов -308 G/ATNFα (rs1800629), +250 A/GLtα (rs909253), +36 A/GTNFR1 (rs767455), -403 G/ARANTES (rs2107538), -801 G/ASDF 1(rs1801157), C/GMCP-1 (rs 285765), +1931 А/Т MIP1β (rs1719153) в формировании преэклампсии различных степеней тяжести. Развитие преэклампсии I степени тяжести ассоциировано с комбинациями генетических вариантов +1931 АMIP1β, +250 А Ltα, -403 GRANTES, -308 GTNFα (OR=0,42), +1931 А MIP1β, -801 GSDF1, +250 А Ltα,-308 GTNFα (OR=0,43), +1931 А MIP1β, +250 А Ltα,-403 GRANTES(OR=0,44), +1931 А MIP1β ,+250 А Ltα, -308 GTNFα (OR=0,43) и +1931 АMIP1β, -801 GSDF1, +250 А Ltα (OR=0,46). Сочетания полиморфных вариантов -801 GSDF1 и GMCP (rs 285765) (OR=0,59), -801 АSDF1,+36 GGTNFR1 и -308 А TNFα (OR=3,95) маркируют развитие преэклампсии II - III степеней тяжести.

Рецензенты:

Чурносов М.И., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой медико-биологических дисциплин, медицинский факультет фгаоу впо «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», г. Белгород.

Сорокина И.Н., д.м.н., доцент, профессор кафедры медико-биологических дисциплин, медицинский факультет фгаоу впо «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», г. Белгород.