Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,940

ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ У ЖИВОТНЫХ НА ФОНЕ ИШЕМИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ: КОРРЕКЦИЯ АЛЛОГЕННЫМИ ГЕПАТОЦИТАМИ

Терехова С.В. 1 Быстрова Н.А. 1 Литвинова Е.С. 1 Чуева Т.В. 1
1 ГБОУ ВПО Курский государственный медицинский университет
В настоящее время вопросы патогенеза, диагностики и лечения острых заболеваний печени остаются одними из актуальных в медицине как ввиду сложности диагностики и выбора оптимальных методов лечения, так и вследствие тенденции к росту количества больных этими заболеваниями. Появление и развитие клеточных технологий создали серьезные научные предпосылки в этой области. Целью исследования явилось изучение иммунотропной и метаболической активности аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости у животных в условиях ишемического поражения печени. Эксперименты проведены на здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 180–200 г. Острое ишемическое поражение печени вызывали пережатием гепатодуоденальной связки после ее инфильтрации 0,5 мл 0,5 % раствора новокаина с помощью турникета в течение 20 минут. У экспериментальных животных в условиях ишемического поражения печени установлены выраженные изменения иммунной реактивности, функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов и гепатоцитов. Определена эффективность использования аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости в коррекции нарушений иммунной реактивности, функциональной активности гепатоцитов и нейтрофилов.
иммунометаболический статус
культуральная жидкость
аллогенные гепатоциты
ишемическое поражение печени
1. Антопольская Е. В. Коррекция ишемии печени при ее резекции в условиях обескровливания / Е. В. Антопольская: автореф. дис. … канд. мед. наук. – Харьков, 1988. – 21 с.
2. Кушманова О. Д., Ивченко Е. М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии / О. Д. Кушманова, Е. М. Ивченко. – М.: Медицина, 1983. – С. 98–99.
3. Коррекция иммунометаболических нарушений у больных с критической ишемией нижних конечностей атеросклеротического генеза / В. А. Лазаренко, С. Б. Николаев, Н. А. Быстрова, А. И. Конопля // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – 2010. – № 2. – С. 77-83.
4. Лакин Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. – М.: Высшая школа, 1980. – 243 с.
5. Мальберг К. Метод локального гемолиза / К. Мальберг, Э. Зигль // Иммунологические методы. – М.: Медицина, 1987. – С. 262–267.
6. Новиков В. В. Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы / В. В. Новиков, А. Ю. Барышников, А. В. Караулов // Иммунология. – 2007. – Т. 28, № 4. – С. 249-254.
7. Онищенко Н. А. Клеточные технологии и современная медицина / Н. А. Онищенко // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. – 2004. – № 4. – С. 2-11.
8. Подымова С. Д. Болезни печени (руководство для врачей) / С. Д. Подымова. – М.: Медицина, 1998. – 704 с.
9. Руководство по иммунологическим методам в гигиенических исследованиях / Т. В. Федосеева, Л. В. Порядин, Л. В. Ковальчук и др. – М., 1993. – С. 319.
10. Стальная Н. Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / Н. Д. Стальная, Т. Г. Гаришвилли // Современные методы в биохимии. – М., 1977. – С. 66-68.

Введение. Иммунные нарушения, возникающие при гипоксии различного генеза, и механизмы их развития остаются все еще мало изученными. Функции иммунной системы осуществляются на фоне метаболических процессов и их сдвигов, вызываемых действием на организм различных агентов, а также клеток печени - гепатоцитов. Типовые метаболические сдвиги, возникающие при гипоксии различного генеза, сочетаются и с определенными особенностями нарушений метаболизма в тех или иных органах и тканях, обусловленными спецификой их структурно-функциональной организации, природой индуцирующего агента и первичным звеном его воздействия на клетки и организм в целом [3]. Взаимосвязь многочисленных метаболических сдвигов, нарушений функциональной активности гепатоцитов, возникающих при гипоксии, с функцией иммунной системы до настоящего времени изучена недостаточно, так же как не установлены наиболее эффективные способы фармакологической коррекции [7].

В настоящее время вопросы патогенеза, диагностики и лечения острых заболеваний печени остаются одними из актуальных в медицине как ввиду сложности диагностики и выбора оптимальных методов лечения, так и вследствие тенденции к росту количества больных этими заболеваниями. Появление и  развитие клеточных технологий создали серьезные научные предпосылки в этой области [6, 7].

Цель исследования - изучение иммунотропной и метаболической активности аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости у животных в условиях ишемического поражения печени.

Материал и методы исследования. Эксперименты проводили на 56 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 180-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986) и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.).

Острое ишемическое поражение печени вызывали оперативным методом под внутрибрюшинным гексеналовым наркозом (30 мг/кг веса). Операция выполнялась из верхнесрединного лапаротомного доступа. Ишемию печени вызывали пережатием гепатодуоденальной связки после ее инфильтрации 0,5 мл 0,5 % раствора новокаина с помощью турникета в течение 20 минут [1]. Аллогенные гепатоциты и их культуральную жидкость вводили внутрибрюшинно в объеме 0,1 мл по 10 000 000 клеток в 1 мл.

Для оценки неспецифической резистентности устанавливали фагоцитарно-метаболическую активность полиморфноядерных лейкоцитов по фагоцитарному числу (ФЧ) и фагоцитарному индексу (ФИ), показателям спонтанного и индуцированного зимозаном НСТ-теста опсонизированного зимозаном (о/з) и неопсонизированного (н/з) [9]. Оценка иммунологической реактивности основывалась на показателях гуморального иммунного ответа (ГИО) (количество антителообразующих клеток - АОК) и гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов - РМ и по разнице количества в них кариоцитов - РК) [5].

В сыворотке крови экспериментальных животных определяли концентрацию общего билирубина, общего белка, фибриногена и активность аспартат- и аланинаминотрансфераз (АЛТ и АСТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), γ-глутамилтранспептидазы (ГГТ), ставили тимоловую пробу (ТП) и определяли протромбиновый индекс (ПТИ). Величины всех перечисленных показателей определяли унифицированными методами с использованием стандартных наборов реактивов [8]. Выраженность перекисного окисления липидов оценивали по содержанию ацилгидроперекисей (АГП) и малонового диальдегида (МДА), кроме этого, в сыворотке крови определяли активность каталазы [2, 10]. Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрические и непараметрические методы [4].

Результаты исследования. В условиях ложной операции (без моделирования ИПП) достоверных различий между изучаемыми показателями иммунометаболического статуса получено не было (табл. 1, 2).

Таблица 1

Иммунная реактивность и функция полиморфноядерных лейкоцитов при введении аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости на фоне ишемического поражения печени (M±m)

Показатели

Единицы измерения

1

2

3

4

5

Интактные животные

Ложная операция

ИПП

АГ

Культура-льная жидкость АГ

АОК

103/сел.

19,7±1,4

21,6±2,1

8,4±0,93*1,2

9,1±1,2*1,2

14,2±1,2*1-4

РМ

мг

3,12±0,07

3,04±0,04

2,01±0,04*1,2

4,27±0,04*1-3

3,15±0,05*3,4

РК

106

1,83±0,08

1,8±0,21

0,92±0,02*1,2

2,24±0,03*1-3

1,93±0,12*3,4

ФИ

%

71,7±3,6

69,7±4,2

46,8±3,0*1,2

56,0±2,0*1-3

65,0±2,6*3,4

ФЧ

абс.

2,54±0,14

2,47±0,14

1,5±0,05*1,2

2,36±0,16*3

2,05±0,3

НСТ-сп.

mOD

0,79±0,05

0,77±0,03

0,49±0,02*1,2

0,58±0,09*1,2

1,1±0,1*1-4

НСТ-ст. н/з

mOD

0,89±0,07

0,87±0,04

0,54±0,04*1,2

0,79±0,08*3

1,29±0,13*1-4

НСТ-ст. о/з

mOD

0,93±0,04

0,95±0,03

0,55±0,05*1,2

0,96±0,05*3

1,62±0,12*1-4

Примечание: звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия.

Кроме этого у данной группы животных снижается как метаболическая, так и фагоцитарная активность полиморфноядерных лейкоцитов (табл. 1).

В условиях моделирования ИПП у экспериментальных животных супрессируется иммунная реактивность: гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана (снижение количества иммунных АОК) и гиперчувствительность замедленного типа (снижение РМ и РК) (табл. 1).

На 5-е сутки после моделирования ИПП в плазме крови экспериментальных жи-вотных происходит повышение активности АЛТ, АСТ, ЩФ и ГГТ, возрастает тимоловая проба, концентрация общего билирубина и снижается ПТИ. Эти изменения свидетельствуют о возникновении у отравленных животных синдрома холестаза, цитолиза, снижении синтетической активности гепатоцитов и возникновении иммунного воспаления (табл. 2).

Кроме этого в данной группе животных возрастает в плазме крови  уровень продуктов ПОЛ (МДА и АГП) при повышении активности каталазы (табл. 2).

Таблица 2

Функциональная активность гепатоцитов, состояние процессов ПОЛ и активность каталазы при введении аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости на фоне ишемического поражения печени (M±m)

Показа-тели

Единицы измерения

1

2

3

4

5

Интактные животные

Ложная операция

ИПП

АГ

Культураль-ная жидкость АГ

АСТ

Е/л

41,4±4,2

42,7±4,4

56,8±3,7*1,2

49,8±2,1*1-3

51,2±3,0*1,2

АЛТ

Е/л

36,3±3,4

35,6±3,0

49,5±4,0*1,2

46,0±4,7*1,2

50,7±6,3*1,2

ГГТ

Е/л

10,7±1,3

11,3±1,4

14,0±0,8*1,2

14,0±0,7*1,2

15,1±3,8*1,2

ЩФ

Е/л

295,0±18,4

251,3±33,7

1136,3±95,6*1,2

426,8±65,3*1-3

382,5±22,3*1-3

Билирубин

мкмоль/мл

13,1±2,1

12,6±3,4

19,6±2,3*1,2

18,3±1,4*1,2

19,1±1,2*1,2

ПТИ

%

51,3±5,3

48,6±4,8

37,8±3,3*1,2

42,2±2,9*1,2

54,8±2,3*3,4

ТП

ед. S-H

2,96±0,13

2,8±0,3

3,71±0,08*1,2

3,8±0,11*1,2

2,77±0,11*3,4

АГП

усл. ед.

1,71±0,3

1,7±0,21

2,57±0,18*1,2

1,67±0,19*3

1,81±0,2*3

МДА

мкмоль/л

3,64±0,9

3,71±0,27

8,13±0,9*1,2

6,23±0,23*1-3

4,27±0,11*3,4

Каталаза

кат/л

10,6±1,7

12,4±3,0

14,2±1,9*1

15,2±1,7*1,2

12,7±1,3*4

Примечание: звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия.

Полученные результаты свидетельствуют о выраженных изменениях иммунной реактивности и функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов и гепатоцитов в условиях ишемического поражения печени.

Применение аллогенных гепатоцитов позволило у животных в условиях ИПП нормализовать ФЧ полиморфноядерных лейкоцитов и их кислородзависимую активность, корригировать, но не до уровня контрольной группы животных, количество АОК и ФИ нейтрофилов периферической крови (табл. 1, 2).

Культуральная жидкость АГ у животных с ИПП нормализует показатели гиперчувствительности замедленного типа, фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови, а в плазме крови ПТИ, значения ТП и концентрацию продуктов ПОЛ (АГП и МДА) (табл. 1, 2).

Обсуждение результатов исследования. Полученные результаты свидетельствуют о выраженных изменениях иммунной реактивности и функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов и гепатоцитов в условиях ишемического поражения печени и возможности использования аллогенных гепатоцитов и их культуральной жидкости в коррекции выявленных иммунометаболических нарушений.

Следует отметить, что применение культуральной жидкости оказывает более выраженное влияние на показатели иммунометаболического статуса в условиях ишемического поражения печени.

Рецензенты:

Снимщикова Ирина Анатольевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой иммунологии и специализированных клинических дисциплин ФГБОУ ВПО «Орловский государственный университет», г. Орел.

Афанасьев Юрий Иванович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой внутренних болезней № 1 ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», г. Белгород.


Библиографическая ссылка

Терехова С.В., Быстрова Н.А., Литвинова Е.С., Чуева Т.В. ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ У ЖИВОТНЫХ НА ФОНЕ ИШЕМИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ: КОРРЕКЦИЯ АЛЛОГЕННЫМИ ГЕПАТОЦИТАМИ // Современные проблемы науки и образования. – 2012. – № 6. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=7897 (дата обращения: 21.09.2021).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074