У интактных и эпифизэктомированных самцов белых крыс иммуногистохимически определялась активность ферментов – индукторов апоптоза в сперматогенных клетках. Определение ферментов осуществлялось в темное (1 ч) и светлое (13 ч) время суток на протяжении двух суток. Эпифизэктомия выполнялась по авторской методике. Активность ферментов оценивали спустя 40 суток после удаления эпифиза, когда влияние факта оперативного вмешательства становится незначимым. С помощью иммуногистохимического окрашивания парафиновых срезов семенников выявляли активность прокаспазы 3 и PARP-1 (p116/25) как ферментов, участвующих в репарации ДНК и активации апоптоза. У интактных животных выявлен циркадианный ритм активности исследуемых ферментов с повышением уровня их активности в ночные часы, что коррелирует с динамикой пролиферации сперматогоний. Отсутствие эпифизарного контроля в течение 40 суток привело к значительному росту уровня изучаемых ферментов в созревающих половых клетках и исчезновению циркадианного ритма их динамики. Данный факт свидетельствует о росте повреждений в структуре ДНК сперматогенных клеток после эпифизэктомии.
It was determined the enzyme activity - inducers of apoptosis in spermatogenic cells in intact male white rats and white rats after pinealectomy by immunohistochemistry. Determination of enzyme was carried out in the dark (1 h) and light (13 h) time of day for two days. The pinealectomy was performed by the authors´ methodology. The enzyme activity was evaluated after 40 days after the removal of the pineal gland, when the influence of the fact of surgery had become insignificant. It was identified the procaspase 3 and PARP-1 (p116/25) activity as the enzymes involved in DNA repair and apoptosis activation using immunohistochemical staining of paraffin sections of testes. In intact animals was revealed the circadian rhythm of activity of the studied enzymes with higher levels of activity in the night time, which correlates with the dynamics of proliferation of spermatogonia. The lack of epiphyseal control for 40 days resulted to a significant increase of the level of the these enzymes in maturing germ cells and the disappearance of the circadian rhythm of their dynamics. This fact indicates the growth of damages in the DNA structure of spermatogenic cells after pinealectomy.
1. Арав В. И., Слесарев С. М., Слесарева Е. В. Метод экстирпации эпифиза у белых крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2008. – № 9. – С. 385-387.
2. Арав В. И., Сыч В. Ф., Слесарева Е. В. Влияние эпифизэктомии на суточную ритмичность сперматогенеза // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2003. – Т. 136, №12. – С.683-685.
3. Астраханцев, А. Ф. Структура мужских половых желез в постнатальном онтогенезе: автореф. дисс. ... д-ра мед. наук / А. Ф. Астраханцев; Рязань, Рязанск. гос. мед. ун-т. им. ак. И. П.Павлова. – Рязань, 1996. – 48 с.
4. Линкольн, Д.А. Эпифиз. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих /Д.А. Линкольн – М.: Мир, 1987. – С.71-99.
5. Маянский, Н. А. Каспазозависимый механизм апоптоза нейтрофилов: апоптогенный эффект ТНФ-α/ Н. А. Маянский // Иммунология. – 2002. – № 1. – С.15-18.
6. Рузен-Ранге, Э. Сперматогенез у животных./ Рузен-Ранге Э. М.: Мир, 1980.
7. Bcl-x and Bax regulate mouse primordial germ cell survival and apoptosis during embryogenesis/ Rucker E. B., Dierisseau P., Wagner K. U. et al. // Mol. Endocrinol. – 2000. – Vol. 14, № 7. – P. 1038–1052.
8. Dieldrin promotes proteolytic cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase and apoptosis in dopaminergic cells: protective effect of mitochondrial anti-apoptotic protein Bcl-2. / Kitazawa M., Anantharam V., Kanthasamy A., Kanthasamy A. G. //Neurotoxicology. – 2004. – Vol. 25, №4. – Р. 589-598.
9. Melatonin protects against common deletion of mitochondrial DNA-augmented mitochondrial oxidative stress and apoptosis/ M. J. Jou, T. I. Peng, P. Z. Yu, S. B. Jou, R. J. Reiter, J. Y. Chen, H. Y. Wu, C. C. Chen, L. F. Hsu// J Pineal Res. – 2007. – Vol. 43, № 4. – Р.389-403.