Журнал Современные проблемы науки и образования 2070-7428 Общество с ограниченной ответственностью "Издательский Дом "Академия Естествознания" 10.17513/spno.128-21840 ART-21840 ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТИ ВЫДЕЛЕНИЯ КЛЕТОК ТРОФОБЛАСТА ИЗ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ И ИХ АНАЛИЗА В УСЛОВИЯХ МОДЕЛЬНОГО ЭКСПЕРИМЕНТА Мусатова Е.В. Musatova E.V. liza_mus@mail.ru Маркова Ж.Г. Markova Zh.G. zhmark71@mail.ru Витязева И.И. Vityazeva I.I. vitiazeva@yandex.ru Шилова Н.В. Shilova N.V. nvsh05@mail.ru Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Медико-генетический научный центр» Federal State Budgetary Institution "Research Centre for Medical Genetics" Федеральное государственное бюджетное учреждение «Эндокринологический научный центр» Endocrinology Research Centre 28 05 2015 5 100 100 This is an open-access article distributed under the terms of the CC BY 4.0 license. https://science-education.ru/ru/article/view?id=21840

Изоляция и анализ клеток плодной природы, циркулирующих в крови беременных женщин, является заманчивой перспективой безопасного получения информации о генетическом статусе плода. Клетки трофобласта, присутствующие в материнском кровотоке во время беременности, являются потенциальным объектом неинвазивной пренатальной диагностики. В данной работе показана возможность выделения трофобластов из периферической крови и последующего метафазного CGH-анализа генетического материала единичных клеток. Материалом для исследования послужили искусственно созданные (артифициальные) смеси, имитирующие присутствие клеток трофобласта в периферической крови во время беременности. Выделение трофобластов из артифициальных смесей осуществлялось с помощью градиентного центрифугирования в растворах Перколл различной плотности. Клетки трофобласта детектировались с помощью иммуноцитохимического окрашивания с использованием моноклональных антител к цитоплазматическому белку цитокератину 7.

The trophoblast cells in the blood of pregnant women are the potential source of information about genetic status of developing fetus. In model experiment the 29 artificial mixtures were created. The artificial mixtures were prepared by mixing samples of peripheral venous blood of adult with cells’ samples of chorionic villus with known karyotype. Trophoblasts were isolated from artificial mixtures by gradient centrifugation on Percoll solutions with different densities. The isolated cell fraction was further depleted of lymphocytes using magnetic activated cell separation with anti-CD45 antibody. Detection of trophoblasts on the microscope slides was carried out by immunocytochemical staining with monoclonal antibodies to the cytoplasmic protein cytokeratin 7 (CK7). For the followed analysis three cells samples were selected. For their preparation was used chorionic cells with karyotypes 46,XX, 46,XY and 47,XX,+13. Isolation of single CK7-positive cells was performed by laser microdissection followed by a whole genome amplification step. Analysis of genetic material isolated CK7-positive cells was performed by comparative genomic hybridization. The profiles of hybridization of the genetic material isolated cells corresponded karyotype chorionic cells that were used for the preparation of respective artificial mixtures. Thus, we concluded that the isolated cells were fetal origin. These results may be used in the experiments with pregnant women’ blood samples. But steps of isolation and detection of trophoblast cells should be made consider with very low levels of fetal cells in the maternal blood and possible change of their antigen characteristics.

 трофобласты градиентное центрифугирование цитокератин 7 CGH-анализ trophoblast cells gradient centrifugation cytokeratin 7 CGH-analysis

1. Миньженкова М.Е., Шилова Н.В., Маркова Ж.Г., Антоненко В.Г., Лебедев И.Н., Козлова Ю.О., Землякова В.В., Золотухина Т.В. Получение и применение динамических стандартных референсных интервалов для анализа результатов сравнительной геномной гибридизации // Генетика. – 2013. – Т. 49, № 10. – С.1229-1235.

2. Шилова Н.В. Исследование клеток плода в крови матери: новый неинвазивный подход в пренатальной диагностике: автореф. дис. … канд. мед. наук. – М.,1999. – 26 с.

3. Fiddler M. Fetal Cell Based Prenatal Diagnosis: Perspectives on the Present and Future // J Clin Med. – 2014. – Vol.3(3). – P. 972-85.

4. Kølvraa S, Christensen B, Lykke-Hansen L, Philip J. The fetal erythroblast is not the optimal target for non-invasive prenatal diagnosis: preliminary results // J. Histochem. Cytochem. – 2005. –Vol. 53(3). – P. 331–336.

5. Krabchi K, Gros-Louis F, Yan J, Bronsard M, Masse J, Forest JC, Drouin R. Quantification of all fetal nucleated cells in maternal blood between the 18th and 22nd weeks of pregnancy using molecular cytogenetic techniques // Clin. Genet. – 2001. – Vol. 60(2). – P. 145-150.

6. Manoussaka MS, Jackson DJ, Lock RJ, Sooranna SR, Kumpel BM. Flow cytometriccharacterisation of cells of differing densities isolated from human term placentae and enrichment of villous trophoblast cells // Placenta. – 2005. – Vol.26 (4). – P. 308-318.

7. Ramaekers F, van Niekerk C, Poels L, Schaafsma E, Huijsmans A, Robben H, Schaart G, Vooijs P. Use of monoclonal antibodies to keratin 7 in the differential diagnosis of adenocarcinomas // Am J Pathol. – 1990. – Vol. 136 (3). – P. 641-55.

8. Schmorl G. Pathologisch-anatomische Untersuchungen über Puerperal-Eklampsie // Vogel. – 1893.

9. Tabor A, Alfirevic Z. Update on procedure-related risks for prenatal diagnosis techniques // Fetal DiagnTher. – 2010. – Vol. 27 (1). – P. 1-7