В настоящее время растет интерес исследователей к молочнокислым бактериям, которые вследствие своих физиолого-биохимических и технологических свойств являются определяющими микроорганизмами для создания биологических консервантов различного назначения. В качестве источников выделения изолятов молочнокислых бактерий использованы филосфера многолетних бобовых трав (клевер луговой – TrifoliumpratenseL., сорт Ранний-2 и люцерна изменчивая – MedicagovariaMartyn, сорт Айслу) и растительный сок из надземной части указанных культур. Из 40 изолятов молочнокислых бактерий были отобраны семь штаммов гомоферментативных лактобацилл со стабильными биотехнологическими признаками. Культуры молочнокислых бактерий рода Lactobacillus классическими микробиологическими методами, генотипированием на основе анализа нуклеотидных последовательностей генов 16SrRNA и pheS, а также методом время-пролетной масс-спектрометрии (MALDI–TOF MS) были идентифицированы как Lactobacillusplantarum. Штаммы молочнокислых бактерий депонированы во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина под номерами: ВКМ В-2342 Д. Lactobacillussp. RS3, ВКМВ-2343 Д. Lactobacillus sp. RS4, ВКМВ-2344 Д. Lactobacillus sp. RS7 и нуклеотидные последовательности генов четырех идентифицированных штаммов аннотированы в GenBank.
Now interest of researchers in lactic acid bacteria, which owing to physiology-biochemical and technological properties are defining microorganisms for creation of biological preservatives of different function, grows. As sources of release of isolates of lactic acid bacteria of an used phyllosphere of long-term bean herbs (a red clover- Trifoliumpratense L., cultivar grade Early-2 and a alfalfa changeable – MedicagovariaMartyn, Ayslu´scultivar) and plant juice from elevated part of the specified cultures. From 40 isolates of lactic acid bacteria seven strains, the homofermentative of lactobacilli with stable biotechnological signs selected. Cultures of lactic acid bacteria of the genus Lactobacillus by classical microbiological methods, genotyping based on the analysis of nucleotide sequences 16S rRNA and pheSand by method time of flying mass spectrometry (MALDI–TOF MS) were identified as Lactobacillus plantarum. Strains of lactic acid bacteria are deposited in the All-Russian collection of microorganisms of Institute of biochemistry and physiology of microorganisms of G. K. Scriabin at numbers: RCM V-2342 D Lactobacillus sp. RS3, RCM V-2343 D Lactobacillus sp.RS4, RCM V-2344 D Lactobacillus sp. RS7 and nucleotide sequences of genes of four identified strains are annotated in GenBank.
1. Азаров В.Н. Основы микробиологии и санитарии: учебник. – М., 1986. – 207 с.
2. Беспоместных К.В. [и др.] Конструирование родоспецифичных и видоспецифичных праймеров для индикации и идентификации Lactobacillusbulgaricus // Техника и технология пищевых производств. – 2010. – Т.16. – №1. – С.64– 68.
3. ГОСТ 10444.11-2013. Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Метод выявления и подсчета количества мезофильных молочнокислых микроорганизмов. – М., 2014. – 24 с.
4. Лукашов В.В. Молекулярная эволюция и филогенетический анализ. – М., 2009. – 256 с.
5. Методы бактериологии / под ред. Ф. Герхарда. – М., 1983. – Т.1. – 254 с.
6. Определитель бактерий Берги / под ред. Хоулта Дж. и др. – М.,1997. – С.303–309.
7. Припутневич Т.В. Оптимизация микробиологической диагностики оппортунистических инфекций у беременных и новорожденных на основе протеометрических и молекулярно-генетических методов: дис. ... д-ра мед. наук. – М., 2014. – 293 с.
8. Чуканов Н.К., Попенко А.К. Микробиология консервирования трудносилосуемых растений. – Алма-Ата, 1986. – 197 с.
9. Шевцов А.Б. [и др.] Идентификация фенотипически и генетически близких видов Lactobacillus на основе анализа нуклеотидной последовательности генов 16SrRNA, groEL,rpoBиrplB // Микробиология. – 2011. – Т.80. – №5. – С.659–668.
10. Шендеров Б. А. Современное состояние и перспективы развития концепции. Пробиотики, пребиотики и синбиотики // Пищевые ингредиенты. Сырье и материалы. – 2005. – № 2. – С.23–26.
11. Axelsson L.T. Lactic Acid Bacteria: Classification and Physiology. In: Lactic Acid Bacteria. Microbiology and Functional Aspects. – New York, 1998. – P.1–72.
12. Claesson M.J., van Sinderen D., O'Toole P.W. The genus Lactobacillus – a genomic basis for understanding its diversity // FEMS Microbiol. Let. – 2007. – Vol. 269.– P.22–28.
13. Kandler O., WeissN.,SneathP.H.A.et al. Regular, non-sporing gram-positive rods. In: Bergley’s Manual of Systematic Bacteriology. – Baltimore, 1986. – Vol.2. – P. 1208–1234.
14. Kozaki M., Uchimura T., Okada S. Experimental manual of lactic acid bacteria. – Tokyo, 1992. – P.34–37.
15. Man J.C.,RogosaM., Sharpe M.E. A medium for the cultivation of lactobacilli // J. Appl. Bacteriol. – 1960.– Vol.23. – P.130–135.
16. Naser S.M., Thompson F.L., Hoste B.et al.Application of multilocus sequence analysis (MLSA) for rapid identification of Enterococcus species based on rpoA and pheS genes // Microbiology. – 2005. – Vol.151. – P.2141–2150.
17. Naser S.M., Dawyndt P., Hoste B. et al. Identification of lactobacilli by pheS and rpoA gene sequence analyses // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. – 2007.– Vol.57. – P.2777–2789.
18. Rogosa M., Mitchell J.A, Wiesman R.F. A selective medium for isolation and enumeration of oral and fecal lactobacilli // J. Appl. Bacteriol. – 1951. – Vol.62. – P.132–133.
19. Soro-Yao A.A., Schumann P., Thonart P. et al. The Use of MALDI-TOF mass spectrometry, ribotyping and phenotypic tests to identify lactic acid bacteria from fermented cereal foods in Abidjan (Côte d’Ivoire) // J. Open Microbiol. – 2014. – Vol.8. – P.78–86.
20. Weisburg W.G., Barns S.M., Pelletier D.A. et al.16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study // J. Bacteriol. – 1991. – Vol. 173. – № 2. – P.697–703.