Из образцов донных осадков озера Байкал методом скрининга на селективных средах отобран штамм бактерии, обладающий высокой нуклеазной активностью. Для анализа использовали метод высева на плотные среды, содержащие ДНК и метод электрофореза в агарозном геле с использованием в качестве субстратов фаговые ДНК и РНК. Выделенный штамм идентифицирован как Aeromonas bestiarum Bp-1010. Бактерия содержит метаболиты, обладающие противовирусной активностью в профилактической схеме в культуре клеток MDCK относительно вируса гриппа: A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) и A/Aichi/2/68(H3N2) (индексы нейтрализации in vitro составили 2,5–6,0 и 2,4–5,0 lg соответственно). Метаболиты штамма Aeromonas bestiarum Bp-1010 также подавляют репродукцию вируса оспы мышей и вируса простого герпеса 2-го типа в культуре клеток Vero в профилактической схеме. Индексы нейтрализации репродукции вируса простого герпеса 2-го типа и вируса оспы мышей в культуре клеток Vero под действием метаболитов составили 2,0 и 2,9 lg соответственно. Штамм Aeromonas bestiarum Bp-1010 может быть использован для разработки на его основе лекарственных форм препаратов для лечения и профилактики вирусных заболеваний.
Strain with high nuclease activity was selected from the samples of bottom sediments of lake Baikal used screening method for selective media. The method of seeding in a dense medium containing DNA and a method of electrophoresis in agarose gel as substrates phage DNA and RNA was using for the analysis. The selected strain was identified as Aeromonas bestiarum Bp-1010. The bacterium contains metabolites with antiviral activity in the prevention scheme in cell culture MDCK regarding the avian influenza virus A/chicken/Kurgan/05/2005 (H5N1) virus and the virus of human influenza A/Aichi/2/68(H3N2) (indices in vitro neutralization was 2.5 to 6.0 and 2.4 and 5.0 lg, respectively). The metabolites of strain Aeromonas bestiarum Bp-1010 also inhibit the replication of the virus of smallpox mice and herpes simplex virus 2 type in the culture of Vero cells in preventive scheme. Indexes neutralize the reproduction of herpes simplex virus 2-type and virus of smallpox mice in the culture of Vero cells under the action of metabolites was 2.0 and 2.9 lg, respectively. Strain Aeromonas bestiarum Bp-1010 can be used for development on its basis of dosage forms of drugs for the treatment and prevention of viral diseases.
1. Аликин Ю. С., Масычева В. И., Клименко В. П. Эндоглюкин – препарат против вирусных заболеваний // Пчеловодство. – 1996. – № 4. – C. 17-19.
2. Грибенча С. В., Поцелуева Л. А., Баринский И. Ф., Деев С. М., Баландин Т. Г., Лещинская И. Б. Защитная активность РНКазы Bacillus intermedius у морских свинок и кроликов, зараженных уличным вирусом бешенства // Вопросы вирусологии. – 2006. – Т. 5. – С. 41–43.
3. Грипп: Руководство для врачей / Под ред. Г. И. Карпухина. – СПб., 2001. – 360 с.
4. Королева Л. С., Свищева Н. С., Буракова Е.А., Грибкова Н. В., Шмелева Н. П., Рустамова Л. М., Сабынин В. М., Сильников В. Н. Синтез и противогриппозная активность искусственных рибонуклеаз // Химикофармацевтический журнал. – 2010. – Т. 44. – № 12. – С. 31-34.
5. Куриненко Б. М., Алексеева И. И., Ильинская О. Н. Способ использования рибонуклеазы Bacillus intermedius // Патент России № 2509801. 2014. Бюл. № 8.
6. Лещинская И. Б., Варламов В. П., Куриненко Б. М. Нуклеазы бактерий. – Казань.: Изд-во КГУ, 1991. – 231 с.
7. Лещинская И. Б., Балабан Н. П., Капранова М. Н., Голубенко И. А. Методы определения активности нуклеаз и родственных ферментов. Современные методы изучения нуклеиновых кислот и нуклеаз микроорганизмов. – 1980. – С. 53-60.
8. Пучкова Л. И., Калмыкова Г. В., Бурцева Л. И., Репин В. Е. Энтомопатогенные бактерии Bacillus thuringiensis-продуценты эндонуклеаз рестрикции // Прикл. биохимия и микробиология. – 2002. – Т. 38. – С. 140 – 144.
9. Пучкова Л. И., Ушакова Т. А., Михайлова В. К., Репин В. Е. Тестирование и выделение высокоочищенных эндонуклеаз рестрикции // Прикл. биохимия и микробиология. – 2002. – Т. 38. – С. 20–24. Чижов Н.П. // Вопросы вирусологии. – 1974. – Т. 6. – С. 647-652.
10. Li K.S., Guan Y., Wang J. et al. Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia // Nature. – 2004. – V. 430. – P. 209 –213.