Сетевое издание

Современные проблемы науки и образования

ISSN 2070-7428

"Перечень" ВАК

ИФ РИНЦ = 1,006

• Авторы
• Резюме
• Файлы
• Ключевые слова
• Литература

Кобыльченко Н.В. 1 Блинова Т.И. 1 Вдовенко-Мартынова Н.Н. 1

---

1 ГОУ ВПО Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава, г. Пятигорск

Целью исследования явилась разработка жидкого экстракта корней шиповника Rosacanina (L.) семейства Rosaceae. Рассчитаны технологические показатели сырья: коэффициенты поглощения, образования внутреннего сока, увеличения объема при растворении экстрактивных веществ. В качестве экстрагента следует использовать спирт этиловый 40 %, сырьё со степенью измельчения 2 мм, соотношение сырья и экстрагента – 1:2. Определены нормы качества разработанного экстракта. Установлено содержание спирта – 67,83 %, сухого остатка – 6,57 %, дубильных веществ – 4,91±0,02 %. В результате фитохимического анализа нами установлено присутствие в исследуемом сырье органических кислот, пектиновых веществ, водорастворимых полисахаридов, тритерпеновых сапонинов, дубильных веществ, аминокислот, определен макро- и микроэлементный состав. Результаты проведенных исследований показывают, что эффективность экстракции фактическая близка к теоретически вычисленной. Экспериментальные данные позволяют обосновать возможность получения жидкого экстракта корней шиповника Rosacanina (L.) в промышленном производстве по разработанной технологии. Предварительными фармакологическими исследованиями установлена его антибактериальное, антиоксидантное действие, и согласно комбинированной табуляции классов токсичности Hodge и Sterner разработанный экстракт жидкий отнесен к группе малотоксичных веществ, что показывает его перспективность в качестве лекарственного средства.

Статья в формате PDF

109 KB

технологические показатели

жидкий экстракт

корни шиповника

1. Государственная фармакопея СССР: Общие методы анализа. Лекарственное раст. сырье / МЗ СССР. – 11-е изд., доп. – М.: Медицина, 1990. – 400 с.

2. Государственный реестр лекарственных средств, разрешенных к медицинскому применению. – М., 2008. – 1005 с.

3. Вдовенко-Мартынова Н. Н. Морфолого-анотомическое изучение корневищ с корнями RosacaninaL. / С. Н. Пушкарский, Н. Н.Вдовенко-Мартынова, В. Н. Кисилёва// Университетская наука: теория, практика, инновации: сб. тр.73-й науч. конф. КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. – Курск: ГОУ ВПО КГМУ Росздрава, 2008. – С 48-50.

4. Донцов, А. А. Шиповники Среднего и Южного Урала: монография / А. А. Донцов, А. В. Хлебников, Г. И. Олешко. – Пермь, 2010. – 92 с.; ил.

5. Инновации в лекарственном ресурсоведении / Турышев А. Ю., Яковлев А. Б., Олешко Г. И., Согрина А. Н. // Вестник РУДН. Секция медицина. – Москва, 2010 – № 4. – С. 475-478.

6. Кобыльченко Н. ., Вдовенко-Мартынова Н. Н., Губанова Л. Б. и др. Разработка норм качества экстракта жидкого из корней шиповника собачьего RosacaninaL. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. – Пятигорск, 2010. – Вып. 65. – С. 328-329.

7. Овеснов С. А. Конспект флоры Пермской области / С. А. Овеснов. – Пермь: Изд-во Перм. ун-та, 1997. – 252 с.

8. Пшуков Ю. Г. Инженерные методы расчета промышленных способов экстрагирования. Пятигорск, 1996. – 30 с.

Нами были проведены фармакогностические исследования сырья. Корни Rosacanina (L.) для исследований  заготавливались осенью в пределах естественного ареала. Установлены показатели подлинности, доброкачественности и нормы качества сырья. Для установления показателей подлинности сырья проводился макроскопический и микроскопический анализ по методикам, изложенным в ГФ XI издания [2]. Были определены внешние и установлены микро-диагностические признаки сырья [4]. Для определения товароведческих показателей сырья использовали фармакопейные методики [2].  Наибольшее содержание экстрактивных веществ установлено при экстрагировании 40 % спиртом этиловым.  Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1. Товароведческие показатели корней Rosacanina L.

В результате фитохимического анализа нами установлено присутствие в исследуемом сырье органических кислот, пектиновых веществ, водорастворимых полисахаридов, тритерпеновых сапонинов, дубильных веществ, аминокислот, определен макро- и микроэлементный состав.

Для получения качественного препарата из лекарственного растительного сырья и прогнозирования эффективности равновесных способов экстрагирования необходимо располагать сведениями о товароведческих и технологических показателях данного растительного сырья, о характере экстрагента и об условиях экстрагирования. Технологические показатели сырья включают информацию о коэффициентах поглощения (К_п) и образования внутреннего сока (К), о коэффициенте увеличения объема при растворении экстрактивных веществ (Z) и содержании экстрактивных веществ (X). Для определения К_п, К и Z использовали методику, разработанную Пшуковым Ю. Г. [1]. За окончательный результат показателя принимали среднее арифметическое трех параллельных определений.

Результаты оценки качества сырья по товароведческим и технологическим показателям были определены следующие: G - масса сырья - 49,98 г; В - влажность сырья - 9,63 %; X - содержание экстрактивных веществ в сырье - 25,97 %;  f - масса экстрагента, взятого для экстракции - 158,0 г; V - объем экстрагента, взятого для экстракции - 173 см³;  р - плотность экстрагента - 0,9736 г/см³; р_р - плотность растворителя - 0,948 г/см³; р_и - плотность извлечения - 0,9585 г/см³; p₁ - концентрация спирта в экстрагенте - 20,0 % по объему; р - концентрация спирта в экстрагенте - 33,33 % по массе; Р_р - концентрация спирта в растворителе - 32,37 % по массе;  а - объем слитого извлечения - 53,21 см³;  d - масса слитого извлечения - 51,0 г;   с - масса извлечения, взятого на анализ - 16,5145 г;  V₁ - объем извлечения, взятого на анализ - 17,23 см³;  b - привес бюкса - 1,1435 г;  К_п - коэффициент поглощения сырья, - 2,39 см³/г;  К - коэффициент образования внутреннего сока - 2,69 см³/г; Z - коэффициент увеличения объема - 0,89 см³/г.

Рассчитанные технологические показатели сырья: коэффициенты поглощения, образования внутреннего сока, увеличения объема при растворении экстрактивных веществ являются основой для теоретических расчетов эффективности экстракции и нормирования качества экстракта жидкого корней Rosacanina (L.).

С целью определения оптимальных размеров частиц сырья корней шиповникабыл проведён фракционный состав, с дальнейшим исследованием в каждой из фракций содержания дубильных веществ фармакопейной перманганатометрической методикой [2]. С целью извлечения суммы основных биологически активных соединений были использованы экстрагенты, обладающие различной растворяющей способностью, что обеспечило получение комплексов с различным содержанием дубильных веществ. Установлено, что для получения экстракта жидкогокорней Rosacanina (L.) следует использовать в качестве экстрагента спирт этиловый 40 % , сырьё со степенью измельчения 2 мм, соотношение сырья и экстрагента - 1:2. Для получения экстракта жидкого использовали способ реперколяции с завершенным циклом в модификации по Н.А. Чулкову, где число ступеней соответствует числу диффузоров в батарее. Нами рассчитаны условия, обеспечивающие высокую эффективность экстракции. Расчёт фактической эффективности экстракции проводили по формуле:

     , где

Q - масса сырья, введенного в производство (г);

х - содержание дубильных веществ в сырье - корнях    шиповника    собачьего (%);

ε - общий объем извлечения (см³);

с - содержание дубильных веществ в жидком экстракте из корней шиповника (%).

Количественно оценивали фактическую эффективность экстрагирования (S_ф), сравнивая ее с теоретической(S)  относительно  эффективности экстрагирования «So». Условия экстрагирования, при которых S₀ ≥ 0,9 могут считаться оправданными, а при более низких значениях «S₀» нуждаются в улучшении.

Результаты проведенных исследований показывают, что эффективность экстракции фактическая близка к теоретически вычисленной. Экспериментальные данные позволяют обосновать возможность получения жидкого экстракта корней шиповника Rosacanina (L.) в промышленном производстве по разработанной технологии.

Нами определены нормы качества полученного экстракта. Экстракт представляет собой жидкость тёмного цвета, своеобразного запаха и терпкого вкуса. Жидкие экстракты согласно нормативной документации оценивают по содержанию действующих веществ, тяжёлых металлов, сухого остатка, спирта или плотности [2]. В соответствии с этим полученный экстракт жидкий был подвергнут всем перечисленным испытаниям. Установлено содержание спирта - 67,83 %, сухого остатка - 6,57 %. Используя химические и физико-химические методы (БХ, ТСХ, ВЭЖХ) разработаны способы качественного и количественного определения биологически активных веществ, содержащихся в фитопрепарате. Для установления подлинности   полученного экстракта использован ряд цветных реакций на основные биологически активные вещества, наличие которых определили в сырье. Так как в доминирующем количестве содержатся: дубильные вещества, органические кислоты и тритерпеновые сапонины, провели испытания на указанные биологически активные вещества. Готовили водный раствор экстракта (1:10). Присутствие дубильных веществ доказывали  по реакциям с железоаммонийными квасцами (черно-синее окрашивание), раствором ацетата свинца 10 %, с желатином и бромной водой; сапонины - по реакции пенообразования в щелочной и кислой среде, реакции Сальковского, Лафона, спиртовым раствором холестерина 1 %. Для подтверждения наличия органических кислот проводили хроматографический анализ на бумаге восходящим методом в системе н - бутанол - кислота муравьиная - вода (250:25:297). В качестве свидетелей использовали 1 спиртовые растворы щавелевой, янтарной, винной, лимонной, яблочной кислот. Проявляли хроматограммы 0,1 % раствором бромфеноловогосинего в 96 % спирте этиловом (рН 6,7). При проявлении органические кислоты окрашиваются в ярко-желтый цвет на голубовато-синем фоне. Идентификацию органических кислот проводили по величинам R_f, сопоставляя с R_fаутентичными образцами.

Количественное определение дубильных веществ проводили фармакопейным перманганатометрическим методом [2], содержание в экстракте жидком корней шиповника собачьего Rosacanina L. составляет 4,91±0,02 % .Относительная ошибка при доверительной вероятности не превышает ±0,47 %. В связи с тем, что перманганатометрический метод по ГФ ХI позволяет определить не только содержание дубильных веществ, а сумму всех легко окисляемых соединений, переходящих в водное извлечение, нами для стандартизации жидкого экстракта из корней шиповника собачьего был использован метод высокоэффективной жидкостной хроматографии как более точный и информативный метод качественного и количественного анализа. Для определения танина в экстракте использовали микроколоночный жидкостный хроматограф «Милихром А-02», снабжённый колонкой из нержавеющей стали размером 2х75 мм, заполненный адсорбентом Prontosil 120-5CAQ. Анализ проводили методом изократического элюирования при комнатной температуре. В качестве подвижной фазы использовали систему растворителей кислота муравьиная 2 % - ацетонитрил (60:40). При хроматографировании в предложенных условиях раствора РСО танина 0,1 %  фиксировались два симметричных пика со временем удерживания 1,85 и 2,45 мин, коэффициент разделения пиков составил 2,1.

Метрологические характеристики количественного определения танина методом ВЭЖХ в исследуемом экстракте  были следующие:N=5; f=4; =0,744%; S=0,0096; S =0,0043; ΔX=0,009558; ε=±1,28 %. На основе полученных данных были предложены условия хроматографического анализа и проверена пригодность разработанной методики по параметрам: точность, воспроизводимость, линейность. В результате исследований, в исследуемом экстракте содержание танина составило 0,744 %.

Предварительными фармакологическими исследованиями установлена его антибактериальное, антиоксидантное действие, и согласно комбинированной табуляции классов токсичности Hodge и Sterner разработанный экстракт жидкий отнесен к группе малотоксичных веществ, что показывает его перспективность в качестве лекарственного средства [3].

Рецензенты:

Ившина И. Б., д.б.н., зав. кафедрой алканотрофных микроорганизмов ИЭГМ УрО РАН, профессор кафедры микробиологии и иммунологии ПГНИУ, г. Пермь.

Солонинина А. В., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой управления и экономики фармации факультета дополнительного профессионального образования ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия», г. Пермь.

Библиографическая ссылка