Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,813

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЯ И ЧАСТОТА РАСПРОСТРАНЕННОСТИ СРЕДИ БОЛЬНЫХ ДЕТЕЙ ОСТРОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА

Баратова Д.А. 1, 2 Маматысаева У.А. 3, 2
1 АНМНО «Евразийский центр онкогематологии, иммунологии и терапии»
2 АНО «Национальный регистр гемопоэтических стволовых клеток Киргизии»
3 ГУ Национальный центр онкологии и гематологии
В статье представлены результаты исследований иммунофенотипирования (ИФТ) с помощью метода проточной цитофлуориметрии и частоты выявляемости среди больных детей острых лимфобластных лейкозов: В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/лимфома) и Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома). По частоте распространенности в Кыргызской Республике (Киргизии) среди больных детей выявляется В-ОЛЛ/лимфома в 83% случаев, для сравнения: Т-ОЛЛ/лимфома в 17% случаев. При дифференциальной диагностике выявляются чаще варианты иммунофенотипа В-common (BII) в 91% случаев и пре Т-ОЛЛ(ТII) в 69% случаев. Среди больных детей кыргызской национальности выявлены в 11% случаев Т-ОЛЛ/лимфома и в 63% случаев В-ОЛЛ/лимфома, а среди больных детей жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики в 6% случаев Т-ОЛЛ/лимфома и в 20% случаев В-ОЛЛ/лимфома. По частоте выявляемости более распространенный В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/ лимфома): и среди больных детей женского пола в 88% случаев, и среди больных детей мужского пола в 80% случаев. В сравнении преобладает среди мужского пола Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома) в 20% случаев, a у детей женского пола несколько реже - в 12% случаев. В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/лимфома) выявляется чаще cреди больных детей мужского пола кыргызской национальности - в 67% случаев, а среди больных детей жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики в 94% случаев. Встречается Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома) чаще среди больных детей мужского пола кыргызской национальности в 87% случаев, а среди больных детей мужского пола жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики - в 88% случаев. Проведенные исследования методом проточной цитофлуориметрии позволяют определить вариант линейности иммунофенотипа и при правильной постановке диагноза и своевременно подобранной ПХТ-терапии, и при наличии HLA-идентичного здорового донора или плацентарной крови, провести близкородственную, неродственную трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток.
иммунофенотипирование
проточная цитофлуориметрии
острый лимфобластный лейкоз у детей
киргизская национальность
1. Baratova D.А., Mamatysaeva U.А. Diagnosis immunophenotype at patients children with acuteleukemia by dint of methods flow cytofluorimetry. International journal of applied and fundamental research. 2018. № 6. [Электронный ресурс]. URL http://www.science-sd.com/478 (дата обращения: 30.05.2019).
2. Van Dongen J.M., Lhermitte I., Bottcher S. EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes.14th EHA Congress. Berlin. 2009. Р. 10-155.
3. Dohner H., Estey E., Grimwade D. Diagnosis and management of AML in adults:2017 ELN recommendations from an international expert panel. Blood. 2017. vol. 129. P. 421-447.
4. Bene M.C., Gastoldi G., Knapp W. Proposals for the immunological classification of acute leukemia European Group for the Immunological Characterization of Leukemia (EGIL)Leukemia 1995. vol. 9. P. 1783 -1786.
5. Swerdlow S.H., Compo E., Harris N. World Health Organization(WHO)Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues.International Agency for Research on cancer. 2017. P. 1-100.
6. Баратова Д.А. Исследование пуповинной крови на цитомегаловирусную инфекцию и наличие вируса Эпштейна-Барр методом ПЦР // Идеи Пастера в борьбе с инфекциями: материалы IV международной конференции, посвященной 85летию Санкт-Петербургского института имени Пастера и 120 летию Парижского института Пастера (Санкт- Петербург, 2- 4 июня 2008 г.). СПб.: Издательство ООО «Литография», 2008. C. 76.

На сегодняшний день заболевание острый лейкоз волнует всех, встречается и в развивающихся, и в развитых странах и выявляется у людей всех рас, как среди взрослого населения, так и среди детей.

Острый лейкоз – это острое злокачественное заболевание системы крови, с поражением на уровне детерминированных родоначальных - стволовых клеток или ранних клеточных предшественников, характеризующимся наличием опухолевых (бластных) клеток в костномозговом пунктате или в периферической крови от 20% и более.

Как отмечают авторы [1], при постановке диагноза «острый лейкоз» цитогенетические, цитохимические, морфологические исследования остаются мощным инструментом в клинической практике, но для подробного изучения клеток костного мозга метод проточной цитофлуометрии и при правильном сборе материала имеет, несомненно, большие преимущества.

В обосновании иммунофенотипического диагноза при острых лейкозах c помощью метода проточной цитофлуориметрии необходимо оценить особенности иммунофенотипических характеристик опухолевых клеток и определить вариант направленности Т и В, и исключить миелоидную и редкие варианты неясной линейности.

При В-лимфобластном лейкозе к В-клеточным маркерам относят CD19, CD79a, (cyCD79a), CD22(cyCD22), CD10,CD20. Фенотипы CD19+CD10+ при остром В- лимфобластном лейкозе являются наиболее распространенными.

При острых лимфобластных лейкозах (Т-лимфобластный лейкоз/лимфома) опухолевые клетки имеют фенотип, сходный с Т-линейными предшественниками. К ранним маркерам при T-ОЛЛ относятся CD 99,CD34, CD1a, терминальная дезоксинуклеотидил трансфераза (TdТ), cyCD3, CD7.

При диагностике необходимо в первую очередь оценить цитоплазматическую экспрессию CD3, который является единственным линейно-специфическим антигеном Т-линии.

Для определения линейной принадлежности опухолевых клеток применяются наборы антител, по рекомендации консорциума Еврофлоу [2], Европейской сети лейкемии [3], а также иcпользуются для дифференциальной диагностики классификации Европейской группы иммунологической характеристики острых лейкозов (EGIL) [4] и Всемирной организации здравоохранения (WHO) [5].

Однако нам, клиницистам, после постановки диагноза и определения варианта клеточной линейности необходимо сделать правильный подбор терапии (ПХТ).

Для целенаправленного лечения при онкогематологических заболеваниях у больных детей и у взрослых и для достижения хорошего результата от проведенной полихимиотерапии необходимо проводить иммунофенотипирование по системе HLA - главного комплекса гистосовместимости. Проведение близкородственной, неродственной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток позволяется при наличии HLA – идентичного здорового донора или плацентарной крови [6].

На сегодняшний день трансплантация костного мозга дает лучшие результаты для увеличения выживаемости при лечении онкогематологических заболеваний.

Целью нашего исследования является определить частоту распространенности и провести ранний диагностический анализ иммунофенотипа опухолевой клеточной линейности при острых лимфобластных лейкозах у больных детей в Кыргызской Республике (Киргизии).

Материал и методы исследования

В группу исследования с ноября 2016 года по декабрь 2018 года вошли с острым лимфобластным лейкозом - 70 пациентов-детей (женского пола - 25, мужского пола - 45), все граждане Кыргызской Республики (Киргизии), в возрасте от 1,5 года до 16 лет, из них 52 кыргызской национальности и жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики (Киргизии) - 18 пациентов-детей (женского пола - 3, мужского пола - 15), проходившие обследование в отделении детской онкологии Национального центра онкологии и гематологии Министерства здравоохранения Кыргызской Республики и в отделении детской гематологии Ошской межобластной клинической детской больницы г. Ош; в г. Санкт-Петербург на базе Евразийского центра онкогематологии, иммунологии и терапии больные консультированы врачами-гематологами. Иммунофенотипирование с помощью проточной цитофлуориметрии проводилось в г. Бишкек, Кыргызская Республика (Киргизия) [1].

Иммунофенотипирование с помощью метода проточной цитофлуориметрии

Материалом для исследования был костный мозг. Больным произведена пункция грудины. При получении материала необходимо соблюдать технику сбора. И для информативного, качественного результата пункционный анализ не должен быть с примесью крови и механически в пробирках с ЭДТА не разрушать клетки во время пробоподготовки к иммунофенотипированию. Иммунофенотипирование лейкозных (бластных) клеток проводят на проточном цитофлуометре Cytomics FC500 (Beckman Coulter, США) с использованием моноклональных антител Beckman Coulter.

Статистическая обработка полученных результатов включала в себя анализ стандартных критериев. χ2 -квадрат использовали для оценки достоверности различий по встречаемости определенных признаков между исследуемой группой. Определение величины «р», соответствующей найденному значению χ2–квадрат, велось на компьютерной программе с учетом одной степени свободы. Все математические расчеты и общий статистический анализ полученных исследований проводили с помощью персонального компьютера с использованием пакета прикладных программ для электронных таблиц Microsoft - ExcelM Версия 7,0 для Windows 95, для Windows 2010, Statistica 5.

Результаты исследования и их обсуждение

При проведении нами исследований диагноз «острый лимфобластный лейкоз» устанавливался на основании общих клинических данных и комплексных лабораторно-диагностических показателей. Диагностирование иммунофенотипированием с помощью метода проточной цитофлуориметрии даёт возможность определить вариант Т- и В-линейной направленности.

Сравнительная характеристика частоты встречаемости варианта иммунофенотипа при

В-лимфобластном лейкозе/лимфоме (В-ОЛЛ) и Т-лимфобластном лейкозе/лимфоме (Т-ОЛЛ) в Кыргызской Республике (Киргизии) (по классификации Европейской группы иммунологической характеристики острых лейкозов) [4]

В-ОЛЛ п=58

Т-ОЛЛ п=12

pro В-ОЛЛ(ВI)

5%

pro Т-ОЛЛ(ТI)

0%

В-common (BII)*

91%

pre Т-ОЛЛ(ТII)*

67%

pre В-ОЛЛ(ВIII)

0%

кортикальный (ТIII)

25%

В-ОЛЛ(BIV)

4%

T-ОЛЛ(ТIV)

8%

Примечание:*p< 0,001.

Как видно из представленной таблицы, в Кыргызской Республике (Киргизии) по частоте распространенности выявляется В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ): про В-ОЛЛ (ВI) в 5% случаев, В-common (BII) в 91% случаев, прe В-ОЛЛ (ВIII) в 0% случаев, В-ОЛЛ (BIV) в 4% случаев и Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ): прo Т-ОЛЛ (ТI) в 0% случаев, пре Т-ОЛЛ (ТII) в 67% случаев, кортикальный (ТIII) в 25% случаев, T-ОЛЛ (ТIV) в 8% случаев.

По значимости отличий между встречаемостью В-лимфобластного лейкоза/лимфомы (В-ОЛЛ): В-common (BII), прe В-ОЛЛ (ВIII) и Т-лимфобластного лейкоза/лимфомы (Т-ОЛЛ): прo Т-ОЛЛ (ТI), пре Т-ОЛЛ (ТII), и имеются статистически высоко достоверные различия, где р< 0,001.

Рис. 1. Частота распространенности в Кыргызской Республике (Киргизии) среди больных детей острых лимфобластных лейкозов:

В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/ лимфома), Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома), *р<0,0001

Как видно из представленного рисунка 1, при сравнительной характеристике частоты распространенности острых лимфобластных лейкозов в Кыргызской Республике (Киргизии) среди больных детей в 83% случаев выявляется В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/лимфома) и в 17% случаев Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома).

По значимости отличий в Кыргызской Республике распространен В-лимфобластный лейкоз/лимфома по сравнению с контрольной группой (Т-лимфобластным лейкозом/ лимфомой) и имеет статистически достоверные различия, где *р<0,0001.

Рис. 2. Распространенность в Кыргызской Республике (Киргизии) острых лимфобластных лейкозов (В-лимфобластный лейкоз/лимфома и Т-лимфобластный лейкоз/лимфома) среди больных детей женского и мужского пола

По данным из представленного рисунка 2, в Кыргызской Республике (Киргизии) острый В-лимфобластный лейкоз/лимфома выявляется несколько чаще и среди женского и мужского пола по сравнению с острым Т-лимфобластным лейкозом/лимфомой. По распространенности выявляется среди детей женского пола в 12% случаев Т-лимфобластный лейкоз/лимфома и в 88% случаев В-лимфобластный лейкоз/лимфома, а у детей мужского пола Т-лимфобластный лейкоз/лимфома в 20% случаев и В-лимфобластный лейкоз/лимфома в 80% случаев.

По значимости отличий чаще выявляется у больных детей женского и мужского пола острый В-лимфобластный лейкоз/лимфома по сравнению с контрольной группой (острым Т-лимфобластным лейкозом/лимфомой) и имеет статистически достоверные различия, где р<0,0001.

Рис. 3. Сравнительная характеристика частоты распространенности

В-лимфобластного лейкоза/лимфомы (В-ОЛЛ/лимфома) и Т-лимфобластного лейкоза/лимфомы (Т-ОЛЛ/ лимфома) среди детей кыргызской национальности и жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики (Киргизии), *р<0,005

Как видно из представленного рисунка 3, выявляется Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/ лимфома) среди больных детей кыргызской национальности в 11% случаев и В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/лимфома) в 63% случаев, а среди больных детей жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики (Киргизии) выявляется в 6% случаев Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома) и В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/лимфома) в 20% случаев.

По значимости отличий острый В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/лимфома) и острый Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома) чаще преобладают среди больных детей кыргызской национальности по сравнению с контрольной группой и имеют статистически достоверные различия, где р<0,005.

Рис. 4. Частота распространенности острых лимфобластных лейкозов среди больных детей женского и мужского пола кыргызской национальности и жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики (Киргизии)

По результатам из представленного рисунка 4, среди больных детей кыргызской национальности женского пола выявляется В-ОЛЛ/лимфома в 33% случаев и среди мужского пола в 67% случаев и Т-ОЛЛ/лимфома среди женского пола в 13% случаев и среди мужского пола в 87% случаев.

В сравнении: у больных детей женского пола жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики (Киргизии) выявляется В-ОЛЛ/лимфома в 6% случаев и среди мужского пола в 94% случаев и Т-ОЛЛ/лимфома среди женского пола в 12% случаев и среди мужского пола в 88% случаев.

По значимости отличий В-лимфобластный лейкоз/лимфома (В-ОЛЛ/лимфома) и Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома) выявляются чаще среди больных детей мужского пола кыргызской национальности и жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики (Киргизии) по сравнению с контрольной группой (больных детей женского пола кыргызской национальности и жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики (Киргизии), и имеются статистически достоверные различия р< 0,0001.

Заключение

Таким образом, при острых лимфобластных лейкозах (В-лимфобластный лейкоз/лимфома и Т-лимфобластный лейкоз/лимфома) основная роль иммунофенотипирования с помощью метода проточной цитофлуориметрии - выявить вариант Т- и В-линейной направленности опухолевых (бластных) клеток.

По данным наших результатов, в Кыргызской Республике (Киргизии) среди больных детей из острых лимфобластных лейкозов чаще выявляется В-лимфобластный лейкоз/лимфома по сравнению с Т-лимфобластным лейкозом/лимфомой. Выявляется В-лимфобластный лейкоз/ лимфома (В-ОЛЛ/лимфома) и Т-лимфобластный лейкоз/лимфома (Т-ОЛЛ/лимфома) среди детей и женского и мужского пола. По частоте распространенности В-ОЛЛ/лимфома и Т-ОЛЛ/лимфома выявляется реже среди больных детей женского пола кыргызской национальности, так и среди больных детей жителей русскоязычного населения Кыргызской Республики (Киргизии).

Для выявления особенностей течения и частоты распространенности острых лейкозов у детей в Кыргызской Республике (Киргизии) необходимо дальнейшее исследование, что даст возможность для своевременной постановки диагноза и варианта линейности, подбора терапии и целенаправленного лечения при планировании неродственной, близкородственной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

На сегодняшний день пересадка гемопоэтических стволовых клеток при острый лимфобластных лейкозах дает наилучшие результаты, в частности у детей.

Выводы

1. Необходимо исследовать костный мозг у больных детей при острых лимфобластных лейкозах с помощью метода проточной цитофлуометрии.

2. Скрининговое исследование опухолевых (бластных) клеток для определения линейной направленности.

3. Выявить иммунологический вариант при остром лимфобластном лейкозе.

4. Иммунофенотипирование с помощью метода проточной цитофлуориметрии дает возможность своевременно выявить характерный иммунофенотип опухолевой (бластной) клетки и подобрать эффективную программу химиотерапии.


Библиографическая ссылка

Баратова Д.А., Маматысаева У.А. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ИММУНОФЕНОТИПИРОВАНИЯ И ЧАСТОТА РАСПРОСТРАНЕННОСТИ СРЕДИ БОЛЬНЫХ ДЕТЕЙ ОСТРОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА // Современные проблемы науки и образования. – 2019. – № 3.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=28948 (дата обращения: 31.05.2020).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074