По оценкам Всемирной организации здравоохранения, около 2 млрд. человек в мире инвазированы геогельминтами. Вторым по распространенности геогельминтозом в Российской Федерации является токсокароз. Ежегодно в Российской Федерации выявляется до 5 тысяч случаев токсокароза. Истинное число больных значительно превышает данные официальной статистики, так как поправочный коэффициент при данной инвазии достигает 20. Риск заражения возбудителем токсокароза возрастает в связи с увеличением численности собак на территории и высокого уровня зараженности их токсокарами [2]. По мнению В.П.Сергиева и др. [4], распространенность токсокароза в связи с его динамизмом, а также сопряженностью с соматической патологией, существенно превосходит официально регистрируемые масштабы.
Токсокароз – паразитарное заболевание, вызываемое миграцией в организме человека личинок гельминтов собак – Toxocara canis (Werner, 1782), реже – кошек – Toxocara mystax (Zeder, 1800) и характеризующееся комплексом синдромов и симптомов, обозначаемых как visceral larva migrans.
Инвазия токсокарами широко распространена как среди животных, так и среди людей. Для человека токсокароз – зоонозная инвазия. При массивной инвазии токсокарами в иммунной системе человека возможно развитие тяжелых поражений органов дыхания, глаз, мозга. Она характеризуется тяжёлым, длительным и рецидивирующим течением, полиморфизмом клинических проявлений, обусловленных миграцией личинок токсокар по различным органам и тканям. Заражение человека происходит пpи проглатывании инвазионных яиц токсокаp.
Однако прямой контакт с псовыми не играет ведущей роли в заражении, поскольку выделяемые собаками яйца токсокар неинвазионны и нуждаются в созревании во внешней среде. Основную роль в передачи инвазии человеку играет загрязненная фекалиями инвазированных собак почва, в сельской местности – лесные ягоды, грибы. Возможна передача яиц токсокар с овощами и зеленью. Установлено, что в смывах с овощей, ягод и зелени с приусадебных участков яйца токсокар выявляются с частотой до 3 % от числа исследованных проб. Другими факторами передачи могут быть шерсть животных, загрязнённые продукты питания, вода, руки [1].
Эпидемиологически значимым является фактор загрязнения окружающей среды фекалиями собак, что приводит к значительной обсемененности почвы яйцами токсокар. В Астраханской области в 2004 г. яйца токсокар обнаружены в 6,6 % проб, в 2008 – 10,8 %. В Ростовской области интенсивность контаминации почвы яйцами данного возбудителя находилась в пределах от 1,2 до 16,67 экз. на 1 кг почвы. Показатели жизнеспособности яиц варьировали от 20 % до 84 % [3,5].
Большинство заражений, вызываемой Toxocara sp., происходит у маленьких детей от 1 до 4 лет, которые легко заражаются по методу «грязных рук», т.к. могут употребить в пищу то, что лежит на земле. Тем не менее среди гельминтозов токсокароз занимает второе место по частоте заражения людей в развитых странах [7].
После обнаружения личинок Тохосаrа canis у детей зарубежными учеными был изучен жизненный цикл возбудителя и миграция инвазионных личинок [6,8,13,14,15]. Эксперименты в основном ограничивались исследованием миграции личинок токсокар у грызунов и у высших млекопитающих, и есть лишь несколько сообщений о проведении подобных опытов у птиц и беспозвоночных хозяев [11,12].
В 2004 года в Бостоне, штате Массачусетс, в США описан случай заражения токсокарозом 16-ти летней девушки, непосредственно через дождевого червя (девушка его употребила в пищу), хотя авторы в качестве причины заражения указывали на землю, которая находилась на поверхности червя, не отрицая возможности заражения непосредственно через дождевого червя. Этот случай доказывает важную роль участия дождевых червей в распространении токсокароза [7].
Актуальность проведённых нами исследований состоит в том, что сведения о дождевых червях в роли паратенических (резервуарных) хозяев недостаточны, вопрос до сих пор является дискуссионным. В мировой практике вопрос участия дождевых червей в распространении токсокароза остаётся малоизученным, имеются лишь некоторые данные о проведении опытов с дождевыми червями видов Eisenia fetida и Pheretima posthuma [11,12].
Цель исследования – провести опыт по экспериментальному заражению дождевых червей Eisenia fetida инвазионными яйцами Тохосаrа canis. Установить период нахождения личинок в кожно-мускульном мешке и кишечнике дождевых червей.
Материал и методы. Яйца были получены путем вскрытия оплодотворённых самок нематод Т. canis, которые были собраны после дегельминтизации месячных щенков немецкой овчарки. Яйца инкубировали в 0,5% р-ре формалина при температуре 28 ± 1 °С в термостате в течение 4 недель.
После культивации яиц до инвазионной стадии перед заражением ставили биопробу на грызунах (восприимчивых хозяевах). Заражение проводили естественным скармливанием 50 инвазионных яиц Toxocara canis лабораторным мышам. На третий день после заражения личинки были обнаружены в печени, остальные личинки были обнаружены методом переваривания в искусственном желудочном соке [9]. Личинки были идентифицированы по методу Nichols [10] и Sprent [13].
Дождевых червей (Eisenia fetida) содержали в пластиковых цилиндрах, заполненных почвенным гумусом, глубиной 10 см, при комнатной температуре. Перед началом эксперимента случайным образом были выбраны 10 дождевых червей и исследованы методом трихинеллоскопии для обнаружения личинок токсокар, приобретённых в естественных условиях.
80 дождевых червей, приблизительно равных по размеру, были разделены на две группы: 60 (группа 1) и 20 (группа 2 – контрольная) и помещены в отдельные пластиковые цилиндры, заполненные 150 г почвы. Почву для заражения обсеменили 10000 инвазионных яиц Т.canis и тщательно перемешали смесь, затем добавили в неё дождевых червей из группы 1 и содержали их в этой почве 4 дня при комнатной температуре. Червей из группы 2 содержали в качестве контрольной группы с не обсемененной почвой. Через 40 дней из группы 1 было выбрано 20 червей и вновь посажено в инвазионную почву для повторного заражения. После заражения естественным путём инвазионными яйцами (через обсеменённую почву) на 5-й день дождевых червей переместили в чистую почву (предварительно обмыв их, чтобы предотвратить дальнейший контакт с яйцами).
Миграцию и распространение личинок Toxocara canis исследовали в тканях дождевых червей, начиная с 5-го дня опыта (1-й день опыта содержания червей в чистой почве). Извлекали по 2–3 червя, фиксировали в 1 % формалине, и проводили их исследование путём вскрытия. После вскрытия червей кожно-мускульный мешок разделяли визуально на три части: передний средний и задний отделы, подсчитывали количество личинок в каждой части. Кишечник отделяли и просматривали отдельно, также визуально разделяя его на три отдела. В течение 43 дней (с момента помещения в чистую почву) проводили вскрытие червей и просматривали их в компрессориях для трихинеллоскопа МИС-7 под микроскопом Микромед 3 вар. 3–20 для регистрации личинок в передней, средней и задней части кожно-мускульного мешка червя или кишечника.
Результаты исследования. В контрольной группе дождевых червей на протяжении всего опыта личинок не обнаружено. В опытной группе личинки Toxocara canis, вышедшие из яиц, регистрировались как в кожно-мускульном мешке, так и в кишечнике. Все личинки, попавшие в червей, вышли из яйцевых оболочек. В почве, которую выделяли черви в процессе их вскрытия, были обнаружены лишь оболочки от яиц. В дальнейшем часть личинок внедрялась через кишечник в кожно-мускульный мешок, где оставались жизнеспособными и подвижными в течение длительного времени. Личинки обнаруживались как в кожно-мускульном мешке, так и в кишечнике.
В первые дни исследования личинок преимущественно находили в передней и средней части кожно-мускульного мешка и кишечника. Интенсивность заражения червей личинками Toxocara canis была невысокой. Наибольшая интенсивность заражения отмечена в первую неделю после помещения червей в чистую почву (8). Наибольшее количество личинок, зарегистрированных в кожно-мускульном мешке червя, равно 7. Чаще личинки локализовались в средней части кожно-мускульного мешка, реже в передней. С 13 дня от начала опыта личинки в передней части кожно-мускульного мешка не регистрировались. Максимальное их количество в этой части мускулатуры – 2, чаще 1 личинка (1,17± 0,17).
В средней части кожно-мускульного мешка личинки регистрировались чаще и в большем количестве: максимально 5, минимум – 1, в среднем 2,44±0,58. Живые личинки регистрировались в первые две недели, в последующем, как погибшие, так и живые. В задней части кожно-мускульного мешка личинки также наблюдались. Живая личинка была отмечена на 29 день от начала опыта. Две неподвижные личинки в средней части кожно-мускульного мешка зарегистрированы на 37 день.
Живые личинки Toxocara canis выявлялись нами и в кишечнике. В передней части кишечника личинки отсутствовали. Наибольшее их количество регистрировалось в средней части кишечника от 1 до 6 (2,6±0,6). В задней части личинок было меньше, чем в средней, но они сохранялись в этом отделе самое продолжительное время. Они были подвижными и регистрировались в кишечнике до 31 дня (хотя освобождение кишечника от пищи у дождевых червей происходит в течение трех суток). Среднее количество личинок, зарегистрированных по ходу опыта, отражено на рисунке 1.
Личинки перестали регистрироваться с 38 дня от начала опыта. Среднее количество личинок сокращалось на протяжении опыта: с 1 по 15 день опыта - 4,01±0,63, а с 16 по 47 – 1,0 ± 0,3. С 16 дня опыта количество личинок в дождевых червях резко сократилось по сравнению с первыми днями заражения, но они обнаруживались и находились в подвижном состоянии в 50 % исследованных червей, в основном в кожно-мускульном мешке.
Рис.1. Среднее количество личинок T. canis в дождевом черве
Опыты с дождевыми червями были проведены японскими исследователями S.Okoshi и М. Usui в 1968 году и индийскими учёными Т.К.Pahari, N.K. Sasmal в 1991 году [11, 12]. Okoshi и Usui проводили опыты на дождевых червях Eisenia fetida, чтобы подтвердить восприимчивость грызунов и кур к заражению их личинками токсокар через дождевых червей. О продолжительности сохранения живых личинок в дождевых червях в их работе не упоминается [11]. Т.К.Pahari, N.K. Sasmal проводили исследование на другом виде дождевых червей – Pheretima posthuma. Они изучали период времени нахождения личинок в дождевых червях: на 15–20-й день и далее личинок в червях они не находили [12].
Результаты наших исследований преимущественно совпадают с данными зарубежных учёных, т.к. дождевые черви действительно заражаются инвазионными яйцами T. сanis, но период нахождения живых личинок зависит от вида дождевых червей и других факторов. Как следует из наших опытов, личинок Toxocara canis мы находили в кожно-мускульном мешке на 37 день опыта, в контрольной группе дождевых червей личинок обнаружено не было ни в кишечнике, ни в кожно-мускульном мешке.
При повторном заражении дождевых червей инвазионными яйцами токсокар, резко снизилось проникновение личинок в кожно-мускульный мешок. Опыт длился 48 дней. Лишь у трех червей зарегистрировано в мускулатуре по 1-й личинке (за весь период опыта). Попавшие с почвой личинки оставались в кишечнике. На 48 день от начала повторного опыта в кишечнике находили до 24 живых и подвижных личинок Т.сanis. Среднее количество личинок в кишечнике составило 10,2±1,85 (6-24), что превосходит среднее количество личинок при первоначальном заражении. По-видимому, проникнув в кожно-мускульный мешок, личинка через некоторое время погибает, поэтому общее количество их к концу опыта уменьшается. Мы находили погибших личинок в кожно-мускульном мешке при первом опыте. Этот факт объясняет исчезновение личинок в кожно-мускульном мешке.
При повторном заражении можно говорить о приобретении дождевым червем определенного иммунитета к проникновению инвазионных личинок Т.сanis в кожно-мускульный мешок. При повторном заражении гибель личинок наблюдалась только в кожно-мускульном мешке в единичных случаях. В кишечнике, по-видимому, личинки остаются жизнеспособными в течение длительного времени. Дождевые черви Eisenia fetida некоторый период времени (в нашем случае 48 дней и более) могут служить источником заражения для собак и других паратенических хозяев, что подтверждается данными японских ученых Okoshi и Usui, которые успешно заражали личинками T. сanis, полученными от дождевых червей, мышей и кур [11].
Выводы. Дождевые черви Eisenia fetida способны заражаться инвазионными яйцами Т.сanis, заглатывая почву, обсемененную яйцами токсокар. Наименьшее количество личинок обнаружено в передней части кишечника и кожно-мускульного мешка дождевых червей (1,17± 0,17), наибольшее – в средней части кожно-мускульного мешка (2,44±0,58) и кишечника (2,6±0,6). Среднее количество личинок Т.сanis в дождевом черве было максимальным до 15 дня опыта – 4,01±0,63, в последующем снизилось до 1,0 ± 0,3. С 38-го дня опыта личинки не регистрировались.
При повторном заражении дождевых червей Eisenia fetida инвазионными яйцами Т.сanis у червей вырабатывается иммунитет, и личинки, при заглатывании заражённой почвы, проникают в кишечник дождевого червя, но внедрения в кожно-мускульный мешок в дальнейшем практически не происходит. При этом количество личинок в кишечнике на протяжении опыта оставалось постоянным. Среднее количество личинок в кишечнике составило 10,2±1,85 (6–24), что превосходит среднее количество личинок при первоначальном заражении. Таким образом, дождевые черви могут выступать в качестве паратенических или транспортных хозяев в какой-то промежуток времени для птиц, грызунов и даже человека, которые, употребляя червей, могут заразиться.
Рецензенты:
Козлов В.М., д.б.н., профессор кафедры охотоведения и биологии диких животных ФГБОУ ВПО «ВГСХА», г. Киров;
Заболотских Ю.С., д.б.н., профессор кафедры охотоведения и биологии диких животных ФГБОУ ВПО «ВГСХА», г. Киров.
Библиографическая ссылка
Ерофеева В.В., Масленникова О.В. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ЗАРАЖЕНИЕ ДОЖДЕВЫХ ЧЕРВЕЙ ИНВАЗИОННЫМИ ЯЙЦАМИ ТОХОСАRА CANIS // Современные проблемы науки и образования. – 2015. – № 3. ;URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=19010 (дата обращения: 19.04.2024).