Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,737

ATOPOBIUM VAGINAE ВО ВЛАГАЛИЩНОЙ МИКРОБИОТЕ ДЕВОЧЕК ПРЕПУБЕРТАТНОГО ВОЗРАСТА

Рутинская А.В. 1 Чайка А.В. 1 Носенко Е.Н. 2
1 Научно-исследовательский институт медицинских проблем семьи Донецкого национального медицинского университета
2 Университетская клиника «Центр реконструктивной и восстановительной медицины» Одесского национального медицинского университета
Целью исследования стало изучение места и роли Atopobium vaginae в составе микробиоты влагалища у девочек препубертатного возраста как в норме, так и при наличии вагинального дисбиоза на современном этапе. Под наблюдением находилось 174 девочки в препубертатном периоде, которые были подразделены на две группы: основную группу О (n=134) с наличием дисбиоза влагалища различной степени, и контрольную группу К, представленную 40 девочками с нормальным влагалищным микробиоценозом и отсутствием каких-либо клинических проявлений вагинита. Исследование спектра влагалищной микробиоты проводили при помощи комплексной количественной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени при помощи тест-системы «Фемофлор-16» (Россия). Установлено, что во влагалищной микробиоте девочек препубертатного возраста условно-патогенный микроорганизм Atopobium vaginae встречается в норме в 7,50% случаев, при вагинальном дисбиозе – в 41,04%. В подавляющем числе случаев Atopobium vaginae сочетается с наличием Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., и является бактерией, ассоциированной с вагинальным дисбиозом у девочек препубертатного возраста.
Atopobium vadinae
вагинальный дисбиоз
вагинальная микробиота
препубертатный возраст
девочки
1. Возрастные особенности диагностики и лечения бактериального вагиноза в детском и подростковом возрасте / [Уварова Е.В., Латыпова Н.Х., Муравьева В.В. и др.] // Российский вестник акушера-гинеколога. – 2004. – Т. 6, № 4. – С. 57-61.
2. Садолина И.В. Клинико-иммунологические критерии оценки полового и физического развития девочек: Автореф. дис. … канд. мед. наук. – М.: 2000. – 24 с.
3. Фемофлор. Урогенитальные инфекции, обусловленные условно-патогенной ьиотой у женщин репродуктивного возраста (Клинико-лабораторная диагностика): пособие для врачей / [Липова Е.В., Болдырева М.Н., Трофимов Д.Ю., Витвицкая Ю.Г.] – М.: Российская академия последипломного образования, Научно-производственная фирма ДНК-технология, 2010. – 30 с.
4. Bacterial vaginosis (BV) candidate bacteria: associations with BV and behavioural practices in sexually-experienced and inexperienced women / [Fethers K., Twin J., Fairley C.K. et al.] // PLoS One. – 2012. – Vol.7, № 2. – e30633. doi: 10.1371/journal.pone.0030633.
5. Characterization of a novel Atopobium isolate from the human vagina: description of Atopobium vaginae sp. nov. / [Rodriguez Jovita M., Collins M.D., Sjödén B., Falsen E.] // Int. J. Syst. Bacteriol. – 1999. – Vol.4. – P. 1573-1576.
6. Cloning of 16S rRNA genes amplified from normal and disturbed vaginal microflora suggests a strong association between Atopobium vaginae, Gardnerella vaginalis and bacterial vaginosis / [Verhelst R., Verstraelen H., Claeys G. et al.] // BMC Microbiol. – 2004. – Vol. 4. – С. 16.
7. Collins M.D. Comparative sequence analyses of the 16S rRNA genes of Lactobacillus minutus, Lactobacillus rimae and Streptococcus parvulus: proposal for the creation of a new genus Atopobium / Collins MD, Wallbanks S. // FEMS Microbiol. – 1992. – Lett.74. – P. 235-240.
8. Colonization of the upper genital tract by vaginal bacterial species in non-pregnant women / [Mitchell C.M., Haick A., Nkwopara E. et al.] // Am. J. Obstet. Gynecol. – 2014. – Dec 15. pii: S0002-9378(14)02438-7. doi: 10.1016/j.ajog.2014.11.043.
9. Comparison of clinical and microbiological features of vulvovaginitis in prepubertal and pubertal girls / [Yilmaz A.E., Celik N., Soylu G. et al.] // J. Formos Med. Assoc. – 2012. – Vol. 111, № 7. – С. 392-396. doi: 10.1016/j.jfma.2011.05.013.
10. Composition of the vaginal microbiota in women of reproductive age--sensitive and specific molecular diagnosis of bacterial vaginosis is possible? / [Shipitsyna E., Roos A., Datcu R. et al.] // PLoS One. – 2013. – Vol. 8, № 4. – e60670. doi: 10.1371/journal.pone.0060670.
11. Correlation of Atopobium vaginae Amount With Bacterial Vaginosis Markers / [Marconi C., Cruciani F., Vitali B., Donders G.G. // J. Low Genit. Tract. Dis. – 2012. – Vol.16, № 2. – P. 127-132. doi: 10.1097/LGT.0b013e31823c79c4. 5
12. Disruption of urogenital biofilms by lactobacilli / [McMillan A., Dell M., Zellar M.P.et al.] // Colloids Surf. B. Biointerfaces. – 2011. – Vol. 86, № 1. – P. 58-64. doi: 10.1016/j.colsurfb.2011.03.016.
13. First report of Atopobium vaginae bacteremia with fetal loss after chorionic villus sampling / [Knoester M., Lashley L.E., Wessels E. et al.] // J. Clin. Microbiol. – 2011. – Vol. 49. – С. 1684-1686.
14. First report of spontaneous intrapartum Atopobium vaginae bacteremia // [Chan J.F., Lau S.K., Curreem S.O. et al.] // J. Clin. Microbiol. – 2012. – Vol. 50, № 7. – P. 2525-8. doi: 10.1128/JCM.00212-12.
15. Geissdörfer W, et al. 2003. Tuboovarian abscess caused by Atopobium vaginae following transvaginal oocyte recovery / [Geissdörfer W., Böhmer C., Pelz K. et ai.] // J. Clin. Microbiol. – 2003. – Vol.41, № 6. – P. 2788-90.
16. High vaginal concentrations of Atopobium vaginae and Gardnerella vaginalis in women undergoing preterm labor / [Menard J.P., Mazouni C., Salem-Cherif I. et al.] // Obstet. Gynecol. – 2010. – Vol.115, № 1. – P. 134-140. doi: 10.1097/AOG.0b013e3181c391d7.
17. Microbiological findings in prepubertal girls with vulvovaginitis / [Sikanić-Dugić N., Pustisek N,. Hirsl-Hećej V., Lukić-Grlić A.] // Acta Dermatovenerol Croat. – 2009. – Vol. 17, № 4. – С. 267-272.
18. Phylogenic and phenotypic evidence for the transfer of Eubacterium fossor to the genus Atopobium as Atopobium fossor comb. nov. / [Kageyama A., Benno Y., Nakase T.] // Microbiol. Immunol. – 1999. – Vol.43. – С. 389-395.
19. Vaginal microbiome in women from Greenland assessed by microscopy and quantitative PCR / [Datcu R., Gesink D., Mulvad G. et al.] //BMC Infect Dis. – 2013. – Vol.13. – С. 480. doi: 10.1186/1471-2334-13-480.
20. Wang K.D. Quantification of Atopobium vaginae loads may be a new method for the diagnosis of bacterial vaginosis / Wang K.D., Su J.R. // Clin Lab. – 2014. – Vol. 60, № 9. – С. 1501-8.
Данные о видовом составе вагинальной микробиоты девочек препубертатного возраста малочисленны и противоречивы. По данным И.В. Садолиной (2000) [2], изучившей микробиоценоз влагалища у здоровых девочек 5-8 лет, наиболее часто в качестве представителей аэробной и факультативно-анаэробной микрофлоры встречаются эпидермальный и сапрофитный стафилококки, реже – кишечная палочка и энтеробактерии, в единичных случаях – бифидобактерии.

Е.В.Уварова и соавт. (2006) считают, что характерным отличием вагинальной микрофлоры здоровой девочки препубертатного возраста от таковой пубертатного являются: отсутствие лактобактерий, преобладание бифидобактерий – до 84% [1], низкая обсемененность влагалищного содержимого микробами – в среднем 104-105 КОЕ/мл, большее содержание кокковой флоры – стафило- и стрептококки до 78%. При микробиологическом и бактериологическом исследовании во влагалище определяются более 20 видов микроорганизмов при низкой общей микробной обсемененности (103-105 КОЕ/мл). Притом микроорганизмы сосуществуют в виде ассоциаций из 4-5 видов. В составе микроорганизмов доминируют бифидобактерии (84,2%). Лактобациллы в умеренном количестве появляются в возрасте после 8 лет. Среди факультативных анаэробов превалируют коагулазоотрицательные стафилококки (78,9%), стрептококки (78,9%) и коринебактерии (63,2%). Авторы отмечают низкое содержание строгих анаэробов (26,3% бактероидов и пептострептококков), других факультативных анаэробов (по 10,5% энтерококков и кишечной палочки), гарднерелл (10,5%) и микоплазм (5,3%).

Противоречивый характер исследований, проведенных по изучению влагалищной микробиоты у девочек препубертатного возраста связан как в норме, так и при дисбиозе в связи со сложностями диагностики [17].

Квалифицированное комплексное лабораторное обследование, полное выявление этиологической структуры заболевания позволяет своевременно устанавливать топический клинический диагноз, выявлять осложненные формы течения заболевания, и, соответственно, проводить направленную адекватную этиотропную терапию, в соответствии с принципом «необходимости и достаточности». В этой связи, в качестве скринингового метода диагностики состава биоты урогенитального тракта женщин предложена комплексная количественная оценка биоты методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с проведением сравнительного анализа конкретных представителей нормо- и условно-патогенной биоты с общим количеством микроорганизмов с целью выявления дисбаланса биоты, степени его выраженности и определения этиологической роли конкретных микроорганизмов в его развитии при условии контроля качества получения клинического образца для исследования [3]. Нами предложено использование этой методики оценки вагинальной микробиоты у девочек. Данный метод позволяет количественное определение такого условно-патогенного организма вагинальной микробиоты как Atopobium vaginae.

Слово «Atopobium», означающее по-гречески "странно живущее существо", был использован M.D. Collins, S. Wallbanks для описания нового бактериального рода в 1992 г., который переквалифицировал Lactobacillus Minutum, Lactobacillus rimae и Streptococcus parvulus на основе их филогенетического родства, установленного при секвенировании гена 16S рРНК [7]. Виды Atopobium – грамположительные, анаэробные, неподвижные, неспорообразующие, эллиптические кокки или палочки, которые производят большое количество молочной кислоты [9, 15]. Бактерии этого рода встречаются в десневых щелях человека и были описаны при различных инфекционных поражениях, в том числе при стоматологических абсцессах, брюшных раневых инфекциях, абсцессах малого таза и бактериемии, а также как причина преждевременных родов и спонтанной родовой бактериемии [5, 10, 13, 14, 16].

В настоящее время установлено, что род состоит из пяти видов: A. rimae, А. parvulus, А. minutum, А. fossor, А. vaginae [5, 7, 18]. А. vaginae впервые был выделен из вагинальной флоры здоровой женщины в 1999 году [9]. Впоследствии бактерию также обнаруживали у пациентов с бактериальным вагинозом, как правило, сосуществующую с другими анаэробными бактериями, такими как G. vaginalis [8, 10, 19] и считают одной из основных бактерий, ассоциированных с бактериальным вагинозом у женщин. Интересно, что среди бактерий, ассоциированных с бактериальным вагинозом у женщин, только G. vaginalis и А. vaginae были широко обнаружены у сексуально-неэкспонированных женщин [4]. Считается, что количественное определение А. vaginae особенно полезно при наиболее тяжелых случаях бактериального вагиноза [11], так как этот микроорганизм не отвечает на традиционную антианаэробную терапию метронидазолом.

Процесс, который изменяет относительно редкую вагинальную микрофлору здоровых женщин в плотную биопленку патогенных и условно-патогенных бактерий, мало изучен. Однако, проведенные экспериментальные исследования показали, что уропатогенные кишечные палочки формируют относительно тонкие биопленки в течение пяти дней (высостой 6 мкм), в то время как А. vaginae и G. vaginalis формируют биопленки толщиной 12 мкм в высоту в течение двух дней. Применение метронидазола приводит к формипррванию отверстий во влагалищных биопленках с А. vaginae и G. vaginalis, но не искореняет эти микроорганизмы [12].

В связи с тем, что процесс идентификации А. vaginae затруднен при проведении традиционных методик выявления вагинальных бактерий, особенно в присутствии сосуществующих колонизирующих организмов, частота колонизации и инфицирование женских половых органов А. vaginae была, вероятно, недооценена в прошлом. В доступной литературе мы не нашли сведений о А. vaginae в микробиоте девочек, в том числе препубертатного возраста.

Целью исследования стало изучение места и роли А. vaginae в составе микробиоты влагалища у девочек препубертатного возраста как в норме, так и при наличии вагинального дисбиоза на современном этапе.

Материал методы исследования

Под наблюдением находилось 174 девочки в препубертатном периоде, которые были поразделены на две группы : основную группу О (n=134) с наличием дисбиоза влагалища различной степени, и контрольную группу К, представленную 40 девочками с нормальным влагалищным микробиоценозом и отсутствием каких-либо клинических проявлений вагинита. Критериями отбора были: возраст от 5 до 13 лет; отсутствие менструаций; отсутствие хламидиоза, трихомониаза, гонореи, сифилиса, ВИЧ, гепатита В, эндокринных заболеваний.

Исследование спектра влагалищной микробиоты проводили при помощи комплексной количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени при помощи тест-системы «Фемофлор-16» (ДНК-технологии, Россия) в сертифицированной лаборатории ООО «Надия» (Украина).

Материалом для исследования методом комплексной количественной ПЦР был соскоб эпителиальных клеток, который забирался одноразовыми стерильными инструментами типа «Cytobrush» из заднего свода влагалища через гименальные кольца. С помощью комплексной количественной ПЦР оценивали: общую бактериальную массу (ОБМ), количество Lactobacterium spp. (ЛБ), количество условно-патогенных микроорганизмов (УПМ) (факультативных и облигатных аэробов), Candida spp., а также патогенного возбудителя Mycoplasma genitalium. Результаты микробиологического исследования оценивались по референсным нормам для тест-системы «Фемофлор-16» [4]. Рассчитывали абсолютные (в логарифмах полученных показателей ОБМ и УПМ (Lg10ОБМ и Lg10УПМ) показатели и частоту встречаемости микроорганизмов.

Статистическая обработка данных проводилась при помощи компьютерного программного пакета Excel.

Результаты исследования и их обсуждение

Средний возраст девочек в группе О составил 8,93±0,24 лет, в группе К – 8,75±0.34 лет, p>0,05. В основной группе избыточные или патологические выделения из половых путей наблюдались у 56,72% пациенток, а в контроле только 6,15% девочек имели выделения из половых путей в виде незначительных белей, p<0,01.

При анализе вагинальной микробиоты было установлено, что в основной группе ОБМ была больше по сравнению с контролем в 1,22 раза (Lg10ОБМ: 4,86±0,10 против 3,98±0,07, p<0,01) (рис.1). ЛБ определялись у 7,50% девочек группы К (рис.2), при этом количественный показатель варьировал от 102,2 до 104,1 КОЕ и в среднем Lg10ЛБ составил 0,23±0,13. В группе О лактобактерии были обнаружены у 8,96%, при этом Lg10ЛБ в среднем был 0,28±0,08 (p>0,05).

Рис. 1 Абсолютное содержание ОБМ, ЛБ, Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., А. vaginae в вагинальной микробиоте обследованных девочек препубертатного возраста, M±m (в Lg10).

Примечание. к – достоверная разница с показателем группы К (p<0,05).

Рис. 2 Частота встречаемости ЛБ, Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., А. vaginae и сочетания Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp. и А. vaginae в вагинальной микробиоте обследованных девочек препубертатного возраста (в %).

Примечание. к – достоверная разница с показателем группы К (p<0,05).

Среди девочек с вагинальным дисбиозом по сравнению с пациентками контрольной группы А. vaginae в вагинальной микробиоте регистрировался чаще в 5,47 (р<0,01) раза (см. рис. 2), а количественное его содержание было выше в 6,73 (p<0,01) (см. рис. 1).

Среди девочек с наличием А. vaginae в вагинальной микробиоте в группе О он в 96,37% сосуществовал с Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., в группе К – в 100%.

Выводы

Во влагалищной микробиоте девочек препубертатного возраста условно-патогенный микроорганизм А. vaginae встречается в норме в 7,50% случаев, при вагинальном дисбиозе – в 41,04%. В подавляющем числе случаев А. vaginae сосуществует с Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., и является бактерией, ассоциированной с вагинальным дисбиозом у девочек препубертатного возраста.

Рецензенты:

Яковлева Э.Б., д.м.н., профессор, профессор кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии, Донецкий национальный медицинский университет, г. Донецк;

Говоруха И.Т., д.м.н., профессор, профессор кафедры акушерства, гинекологии и перинатологии, Донецкий национальный медицинский университет, г. Донецк.


Библиографическая ссылка

Рутинская А.В., Чайка А.В., Носенко Е.Н. ATOPOBIUM VAGINAE ВО ВЛАГАЛИЩНОЙ МИКРОБИОТЕ ДЕВОЧЕК ПРЕПУБЕРТАТНОГО ВОЗРАСТА // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 6.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=17022 (дата обращения: 21.08.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252