Электронный научный журнал
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,737

ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ КОМБИНАЦИЙ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ВАРИАНТОВ ИНТЕРЛЕЙКИНОВ В РАЗВИТИИ ХРОНИЧЕСКОГО КАЛЬКУЛЕЗНОГО ХОЛЕЦИСТИТА

Демин С.С. 1 Черкашина О.В. 1
1 ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» (НИУ «БелГУ»)
Анализ связи сочетаний генетических полиморфизмов интерлейкинов с формированием хронического калькулезного холецистита (ХКХ) осуществлялся на выборке из 544 человек: 250 больных ХКХ и 294 человек популяционного контроля, являющихся уроженцами Центрального Черноземья России. Материалом для исследования послужила венозная кровь в объеме 4–5 мл. Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществлялось методом фенольно-хлороформной экстракции. Выделенную ДНК использовали для проведения полимеразной цепной реакции синтеза ДНК. Установлено, что носительство у мужчин аллелей -511Т IL-1В, -584Т IL-4, -113Т IL-9 и генотипа -511ТТ IL-1В, а также комбинаций генетических маркеров: -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5; -511Т IL-1В и -703С IL-5; -889Т IL-1А, -511Т IL-1В и -584Т IL-4; 889T IL-1А и -511T IL-1B обуславливает повышенный риск развития ХКХ. Наличие у женщин комбинаций генетических вариантов -889ТT IL-1А, -511Т IL-1В и -113Т IL-9; -511Т IL-1В, -703С IL-5 и -113ТТ IL-9; -511Т IL-1B, -113Т IL-9, -592C IL-10 и -251Т IL-8; -511Т IL-1B, -703Т IL-5 и -584C IL-4 определяет риск формирования ХКХ, а наличие сочетаний -889С IL-1А, -511С IL-1B и -703С IL-5; -511C IL-1B и -703С IL-5 обладает протективным действием.
хронический
калькулезный
холецистит
желчнокаменная
болезнь
интерлейкины
1. Григорьев П.Я. Желчнокаменная болезнь и последствия холецистэктомии: диагностика, лечение и профилактика / П.Я. Григорьев, И.П. Солуянова, А.В. Яковенко // Лечащий врач. – 2002. – № 6. – С. 26–32.
2. Григорьева И.Н. Основные факторы риска желчнокаменной болезни / И.Н Григорьева // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2007. – Т. 17. – № 6. – С.17–21.
3. Ильченко А.А. Желчнокаменная болезнь / А.А. Ильченко. – М.: Анахарсис, 2004. – 200 с.
4. Царегородцева Т.М. Цитокины при гастроэнтерологической патологии / Т.М. Царегородцева // Медицинская газета. – 2005. – № 63. – С. 3-4.
5. Beckingham I.J. ABC Of Liver, Pancreas and Gall Bladder // Edited by I.J. Beckingham.- BMJ Books, BMA House, Tavistock Square, London, 2001. – P. 54.
6. Bellows C.F. Management of gallstones / C.F. Bellows, D.H. Berger, R.A. Crass // Am Fam Physician. – 2005. – V. 72(4). – P. 637-642.
Хронический калькулезный холецистит (ХКХ) - это обменно-воспалительное заболевание системы органов пищеварения, которое характеризуется образованием камней в желчном пузыре и желчных протоках. Среди болезней органов пищеварения ХКХ встречается достаточно часто: он составляет до 90 % всех случаев желчнокаменной болезни (ЖКБ), заболеваемость которой в мире достигает 10 % [1].

По данным многочисленных литературных источников на протяжении XX века, в особенности второй его половины, происходило быстрое увеличение распространенности ЖКБ, преимущественно в промышленно развитых странах, в том числе в России. В конце XX века в ФРГ было зарегистрировано более 5 миллионов, а в США более 15 миллионов больных ЖКБ. Каждое десятилетие количество заболевших увеличивается, как минимум, вдвое. По данным медицинской статистики, холелитиаз встречается у женщин значительно чаще, чем у мужчин, причём с возрастом число больных существенно увеличивается и после 70 лет достигает 30 % и более в популяции. По количеству хирургических вмешательств ЖКБ вышла на второе место в мире после аппендэктомии [3].

В формировании ХКХ участвуют такие факторы, как: избыточная масса тела, возраст, женский пол, ятрогенные факторы и др. Значимую роль в формировании ЖКБ играют генетические факторы [2]. Показана роль отдельных генетических полиморфизмов, участвующих в регуляции воспаления, клеточной пролиферации, метаболизма липидов и желчных кислот в формировании ЖКБ [5, 6]. Среди генов-кандитатов, регулирующих преимущественно процессы воспаления, важное значение имеют интерлейкины. Интерлейкины представляют собой группу полипептидных медиаторов, участвующих в формировании и регуляции защитных реакций организма. Им принадлежит важная роль в развитии и течении различных заболеваний, в том числе и органов пищеварения. Интерлейкины, взаимодействуя со специфическими рецепторами, являются одними из главных звеньев в воспалительном каскаде при ЖКБ, изменяя интенсивность и длительность воспалительных, склеротических и литогенных процессов в желчном пузыре [4].

Цель исследования: изучение роли сочетаний генетических полиморфизмов -889Т/С IL-1А, -511С/Т IL-1В, -584С/Т IL-4, -703С/Т IL-5, -174G/С IL-6, -251А/Т IL-8, -113Т/М IL-9, -592С/А IL-10 в формировании ХКХ в зависимости от пола.

Материалы и методы. Группу исследования составили 544 человека: 250 больных ХКХ и 294 человека популяционного контроля. В выборки больных и популяционного контроля включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья России и не имеющие родства между собой. Среди 250 больных ХКХ мужчин было 42 человека (16,80 %), женщин - 208 (83,20 %). В популяционной выборке (294 человека) распределение по полу было аналогичным: мужчины - 50 человек (17,00 %), женщины - 244 (83,00 %). Средний возраст больных составил 54,66±13,08 лет (варьировал от 23 до 85 лет), популяционной выборки - 48,20±6,28 лет (варьировал от 18 до 79 лет). Таким образом, группа популяционного контроля не отличалась от группы больных по полу, возрасту, национальности и месту рождения.

Материалом для исследования послужила венозная кровь в объеме 4-5 мл, взятая из локтевой вены пробанда. Забор венозной крови осуществлялся в пробирки с консервантом, содержащим 0,5М раствор ЭДТА (рН=8.0).

Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществлялось методом фенольно-хлороформной экстракции.

Генотипирование ДНК-маркеров производилось методом анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции производства фирмы «Сибэнзим» (Новосибирск) (локусы -889Т/С IL-1А, -511С/Т IL-1В, -703С/Т IL-5, -113Т/М IL-9, -592С/А IL-10).

Генотипирование локусов -590C/T IL-4, -174G/C IL-6, -251А/Т IL-8 осуществлялось методом детекции TagMan зондов по данным величин RFU (уровень относительной флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе IQ5 c детектирующей системой в режиме реального времени. Для дискриминации аллелей использовалась программа «Bio-Rad IQ5-Standart Edition».

Ассоциации аллелей и генотипов с качественными признаками ХКХ оценивали с помощью показателя отношения шансов (ОR).

Для сравнения частот аллелей и генотипов между различными группами использовали критерий χ2 с поправкой Йетса на непрерывность.

С целью решения проблемы множественных сравнений, связанной с получением ложноположительных результатов (ошибка 1-го рода), использовали пермутационный тест.

Результаты: При проведении сравнительного анализа распределения генетических полиморфизмов -889Т/С IL-1А, -511С/Т IL-1В, -584С/Т IL-4, -703С/Т IL-5, -174G/С IL-6, -251А/Т IL-8, -113Т/М IL-9, -592С/А IL-10 в исследуемых выборках в зависимости от пола установлены различия в концентрациях генотипов и аллелей молекулярно-генетических маркеров интерлейкинов, между больными ХКХ и контролем.

Установлена более высокая частота маркеров -511Т IL-1В (51,47 %) и -511ТТ IL-1В (29,41 %), и низкая распространённость генотипа -511СС IL-1В (26,47%) среди мужчин больных ХКХ в сравнении с контрольной группой мужчин, где данные показатели составили 23,08 % (χ2=11,47, р=0,002), 5,13% (χ2=6,13, р=0,01) и 58,97% (χ2=6,5, р=0,01) соответственно. Выявлены более высокие концентрации аллелей -584Т IL-4 (28,21%) и -113Т IL-9 (90,79%) в группе мужчин больных ХКХ по сравнению с контролем, где анализируемые показатели составили 15,31 % (χ2=3,61, р=0,06) и 80,0% (χ2=0,9, р=0,34) соответственно. Таким образом, наличие маркеров -511Т IL-1В и -511ТТ IL-1В, а также аллелей -584Т IL-4 и -113Т IL-9 обусловливает повышенный риск развития данного заболевания (OR=3,54; OR=7,71; OR=2,17 и OR=2,46 соответственно). Тогда как генетические маркеры -511С IL-1В, -511СС IL-1В, -584С IL-4 и -113М IL-9 являются протективными факторами развития хронического калькулезного холецистита у мужчин (OR=0,28; OR=0,25; OR=0,46 и OR=0,41 соответственно).

Между женщинами, больными ХКХ и контролем, достоверных различий по частоте генотипов и аллелей молекулярно-генетических маркеров интерлейкинов не выявлено.

В результате анализа носительства комбинаций аллелей и генотипов исследуемых локусов интерлейкинов в зависимости от пола, также установлен ряд достоверных отличий больных от контроля.

В группе мужчин сочетания генетических вариантов, отличающих больных ХКХ от контрольной группы, включают 4 полиморфизма (-889Т/С IL-1А, -511С/Т IL-1В, -584С/Т IL-4, -703С/Т IL-5) из 8 рассмотренных, они образуют четыре комбинации, причем все являются факторами повышенного риска формирования ХКХ. Сочетания -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5; -511Т IL-1В и -703С IL-5 отмечаются у 71,43 % и 66,67 % мужчин с данным заболеванием, а в группе контроля они составляют 33,33 % (ОR=5,0; 95 % CI 1,67-14,93) и 36,36 % (ОR=4,8; 95 % CI 1,64-14,12) соответственно. Следующие два сочетания у пациентов с ХКХ наблюдаются в несколько раз чаще (35,48 % и 71,88 %), чем в контрольной группе - 8,33 % (ОR=6,6; 95% CI 1,65-26,46) и 38,46 % (ОR=4,1; 95 % CI 1,5-11,17) соответственно.

У женщин в формировании значимых комбинаций генетических вариантов, отличающих больных ХКХ от контрольной группы, участвуют 7 полиморфизмов (-889Т/С IL-1А, -511С/Т IL-1В, -584С/Т IL-4, -703С/Т IL-5, -251А/Т IL-8, -113Т/М IL-9, -592С/А IL-10) из 8 рассмотренных, они образуют шесть сочетаний. Четыре комбинации определяют риск развития данного заболевания. В формировании трех таких сочетаний принимают участие по три генетических маркера: -889ТT IL-1А, -511Т IL-1В и -113Т IL-9; -511Т IL-1В, -703С IL-5 и -113ТТ IL-9; -511Т IL-1B, -703Т IL-5 и -584C IL-4. Их частота значительно выше (42,69 %; 48,28 % и 38,16 %) среди женщин больных ХКХ, чем в контрольной группе - 19,54 % (ОR=3,1; 95 % CI 1,67-5,65); 19,15 % (ОR=3,9; 95 % CI 1,78-8,74) и 23,66 % (ОR=1,99; 95 % CI 1,18-3,34) соответственно. Еще одно сочетание, являющееся фактором повышенного риска развития ХКХ, образовано из четырех генетических вариантов -511Т IL-1B, -113Т IL-9, -592C IL-10 и -251Т IL-8. В группе женщин с ХКХ частота данной комбинации составила 48,8 %, что в 1,7 раз выше, чем в контрольной группе - 28,4 % (ОR=2,4; 95 % CI 1,36-4,25).

Сочетания генетических маркеров -889С IL-1А, -511С IL-1B и -703С IL-5; -511C IL-1B и -703С IL-5 являются протективными факторами формирования ХКХ. Они наблюдаются у 20,65 %; 71,15 % женщин с данным заболеванием, тогда как в контрольной группе у 38,46 % (ОR=0,42; 95 % CI 0,25-0,7) и 84,21 % (0,46; 95 % CI 0,26-0,83) соответственно.

Выводы: обобщая полученные данные можно заключить, что изученные полиморфные маркеры играют важную роль в развитии хронического калькулезного холецистита. Причем, наличие у мужчин аллелей -511Т IL-1В, -584Т IL-4, -113Т IL-9 и генотипа -511ТТ IL-1В, а также комбинаций генетических маркеров: -889T IL-1А, -511T IL-1B и -703С IL-5; -511Т IL-1В и -703С IL-5; -889Т IL-1А, -511Т IL-1В и -584Т IL-4; 889T IL-1А и -511T IL-1B обуславливает повышенный риск развития ХКХ. Наличие у женщин комбинаций генетических вариантов -889ТT IL-1А, -511Т IL-1В и -113Т IL-9; -511Т IL-1В, -703С IL-5 и -113ТТ IL-9; -511Т IL-1B, -113Т IL-9, -592C IL-10 и -251Т IL-8; -511Т IL-1B, -703Т IL-5 и -584C IL-4 определяет повышенный риск формирования ХКХ, а наличие сочетаний -889С IL-1А, -511С IL-1B и -703С IL-5; -511C IL-1B и -703С IL-5 обладает протективным действием. Это согласуется с литературными данными, свидетельствующими о значимой роли генов интерлейкинов в патогенезе ХКХ.

Рецензенты:

Чурносов М.И., д.м.н., профессор, заведующий кафедрой медико-биологических дисциплин, медицинский факультет, ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», г. Белгород;

Сорокина И.Н., д.м.н., доцент, профессор, заведующий кафедрой медико-биологических дисциплин, медицинский факультет, ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», г. Белгород.


Библиографическая ссылка

Демин С.С., Черкашина О.В. ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ КОМБИНАЦИЙ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ВАРИАНТОВ ИНТЕРЛЕЙКИНОВ В РАЗВИТИИ ХРОНИЧЕСКОГО КАЛЬКУЛЕЗНОГО ХОЛЕЦИСТИТА // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 6.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=15817 (дата обращения: 23.08.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252