Сетевое издание
Современные проблемы науки и образования
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,006

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КУМАРИНОВ В КОРНЕВИЩАХ И КОРНЯХ ЛЮБИСТКА ЛЕКАРСТВЕННОГО

Овчинникова С.Я. 1 Губанова Л.Б. 1 Орловская Т.В. 2
1 Пятигорский медико-фармацевтический институт – филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России
2 Северо-кавказский федеральный университет
Разработана и валидирована методика количественного определения суммы кумаринов в пересчете на ангелицин в корневищах и корнях любистка лекарственного (Levísticum officinále Koch.) методом спектрофотометрии. Спектры поглощения спиртовых извлечений из сырья, полученных с помощью 96% спирта этилового, имеют полосы поглощения от 250 до 300 нм, а максимум поглощения при 270±2 нм, что соответствует максимуму поглощения СО ангелицина. Изучены валидационные характеристики новой методики определения кумаринов, что позволяет использовать ее для достоверной оценки качества сырья по параметрам специфичность, линейность, предел количественного определения, правильность, прецизионность. Содержание кумаринов в пересчете на ангелицин в корнях и корневищах любистка лекарственного, определённое данной методикой, составило 6,67% в пересчёте на воздушно-сухое сырьё.
валидация
количественное определение
идентификация
спектрофотометрия
корневища и корни
любисток лекарственный
кумарины
ангелицин
1. Овчинникова С.Я., Орловская Т.В. Изучение спазмолитической активности экстракта корневищ и корней любистока лекарственного // Научные ведомости Белгородского гос. университета. Серия: Медицина. Фармация. 2012 . № 4 (123). С. 275-277.
2. Овчинникова С.Я., Орловская Т.В. Морфолого-анатомическое изучение корневищ и корней любистока лекарственного // Фармация. 2013. № 2. С. 14-17.
3. Овчинникова С.Я., Орловская Т.В., Маликова М.Х. Изучение углеводов Levisticum officinale // Химия природных соединений. 2013. № 5. С. 788-789.
4. Овчинникова С.Я., Орловская Т.В., Оганова М.А. Изучение диуретической активности экстракта корневищ и корней любистока лекарственного // Научные ведомости Белгородского гос. университета. Серия: Медицина. Фармация. 2012. № 10 (129). С. 158-159.
5. Орловская Т.В., Овчинникова С.Я. Определение антибактериальной активности субстанций, полученных из корневищ с корнями любистка лекарственного // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. №10. 2013. С. 474-475.

Введение. Любисток лекарственный (Levisticum officinale Koch.) – многолетнее травянистое растение с толстым корневищем с длинными ветвистыми корнями семейства сельдерейных (Apiaceae). Подземные органы любистка лекарственного содержат комплекс биологически активных соединений, среди которых основные – кумарины, фталиды, ароматические соединения. В научной медицине нашей страны любисток не применяется, но включен в Европейскую и Британскую травяную фармакопеи (БТФ), а также в фармакопею России I издания [3]. Несмотря на широкую популярность за рубежом, в нашей стране это растение известно лишь в народной медицине. Особо актуальным представляется поиск лекарственных средств с направленным фармакологическим действием, например, спазмолитической, диуретической и антимикробной активностями в сочетании с антиоксидантным эффектом, которые связаны с содержанием полифенольного комплекса [1, 4, 5].

Ограниченность производимой из данного сырья отечественной продукции объясняется не только недостаточностью химических исследований, но и отсутствием современной нормативной документации, для разработки которой необходимо установить показатели подлинности и качества сырья [2].

Цель работы: разработка методики количественного определения суммы кумаринов в сырье любистка лекарственного, в пересчете на ангелицин.

Материал и методы исследования. Объект исследования – воздушно-сухие измельченные корневища и корни культивируемых растений (Россия).

Спектрофотометрическое количественное определение суммы кумаринов проводили по следующей методике. Около 0,5 г сырья (точная масса) помещали в колбу емкостью 100 мл и прибавляли 50 мл спирта этилового 96%, содержащего 1% концентрированной кислоты хлористоводородной. Содержимое колбы кипятили однократно с обратным холодильником в течение 30 минут, затем полученное извлечение фильтровали и упаривали. Остаток растворяли в спирте этиловом и количественно переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, после чего доводили тем же растворителем до метки. Затем 2,5 мл полученного извлечения переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили до метки спиртом, после чего тщательно перемешивали. Спектры поглощения извлечений из сырья и раствора СО ангелицина регистрировали на спектрофотометре СФ-2000 относительно спирта этилового. Остаток количественно переносили и растворяли в мерной колбе вместимостью 25 мл в 20 мл спирта этилового 96%, объем раствора в колбе доводили до метки тем же растворителем. Аликвоту в количестве 1 мл переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл и объем раствора в колбе доводили до метки спиртом этиловым 96%. Оптическую плотность полученного раствора измеряли при длине волны 270 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – спирт этиловый 96%.

В качестве стандартного образца использовали СО ангелицина. Для этого 0,1 г СО ангелицина (точная навеска) помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл и растворяли в 40 мл спирта этилового 96%, после чего содержимое колбы доводили до метки тем же растворителем (раствор А). 1мл раствора А переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили объем раствора до метки тем же растворителем. Оптическую плотность полученного раствора измеряли при длине волны 270 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – спирт этиловый 96% Содержание кумаринов (Х,%) в пересчете на ангелицин и абсолютно сухое сырье рассчитывали по формуле:

Содержание кумаринов (Х,%) в пересчете на ангелицин и абсолютно сухое сырье рассчитывали по формуле:

A0 и Ax – значения оптических плотностей растворов СО ангелицина и анализируемого образца соответственно;

a0 и ax – массы навесок СО ангелицина и извлечения любистка лекарственного соответственно, г;

W0 и Wx – мерные колбы, использованные для разведения навесок СО ангелицина и анализируемого образца соответственно, мл;

Va0 и Vax – аликвоты растворов СО и анализируемого образца соответственно, мл.

В – влажность сырья, 9,70%.

Определение линейности методики проводили с помощью оценки градуировочного графика, отражающего зависимость величины оптической плотности от количества кумаринов в 1 мл извлечения из экстракта любистка лекарственного. Для этого были приготовлены 5 извлечений по вышеописанной методике, но из разных навесок сырья: 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 и 0,7 г.

Количественное содержание кумаринов в 1 мл извлечения рассчитывали по формуле:

, где

A0 и Ax – значения оптических плотностей растворов СО ангелицина и анализируемого образца соответственно;

– масса навески СО ангелицина, г;

W0 и Wx – мерные колбы, использованные для разведения навесок СО ангелицина и анализируемой аликвоты соответственно, мл;

Va0 и Vax – аликвоты растворов СО и анализируемого образца соответственно, мл.

В – влажность сырья, 9,70%.

Результаты исследования и их обсуждение. Разработке оптимальной методике количественного анализа и выбору аналитического вещества предшествовала работа по изучению поглощений в УФ-области спектра спиртовых извлечений, полученных из сырья любистка лекарственного.

Полученные данные свидетельствуют о том, что спектры поглощения спиртовых извлечений из сырья с помощью 96% спирта этилового, имеют полосы поглощения от 250 до 300 нм, а максимум поглощения при 270±2 нм соответствует максимуму поглощения СО ангелицина.

По результатам эксперимента построен градуировочный график зависимости значений оптической плотности от содержания кумаринов в исследуемом растворе (Рис. 1).

Рисунок 1 – Градуировочный график зависимости оптической плотности от содержания кумаринов в исследуемом извлечении, уравнение регрессии, коэффициент корреляции

Наличие линейной зависимости между х и у подтверждали расчетным путем. Коэффициенты а и b и метрологические характеристики зависимости рассчитывали с использованием регрессионного анализа методом наименьших квадратов по экспериментально измеренным значениям переменной у для заданных значений аргумента х (Табл. 1).

Рассчитанное значение коэффициента корреляции составило 0,999.

Коэффициенты а и b 0,2668 и 0,00005 соответственно. Таким образом, уравнение линейной зависимости имеет вид: y = 0,2668×x + 0,00005.

Значение коэффициента корреляции максимально приближено к 1, поэтому можно утверждать о наличии линейной зависимости значений оптической плотности от содержания кумаринов в исследуемом извлечении.

Таблица 1 – Промежуточные данные для вычисления коэффициента корреляции

xi

yi

xi× yi

xi2

yi2

0,5884

0,157

0,09238

0,3462

0,0246

1,0194

0,272

0,2773

1,0392

0,0740

1,4091

0,376

0,5298

1,9856

0,1414

1,7539

0,468

0,8208

3,0762

0,2190

2,2186

0,592

1,3134

4,9222

0,3505

6,9894

3,0337

Для определения внутрилабораторной воспроизводимости (прецизионности) методики содержание кумаринов определяли в шести разных навесках сырья по разработанной методике. Результаты эксперимента представлены в табл. 2.

Таблица 2 – Результаты количественного определения кумаринов в экстракте любистка лекарственного (в пересчете на ангелицин и абсолютно сухое сырье) (A0 = 0,591; В=9,70%)

Масса навески, г

Значение оптической плотности, А (λ = 270 нм)

Найдено кумаринов, %

Метрологические характеристики

0,5048

0,376

6,9785

RSD=3,04%

0,5116

0,368

6,7393

0,4997

0,347

6,5060

0,5005

0,342

6,4020

0,4990

0,354

6,6466

0,5028

0,362

6,7454

Как следует из представленных данных, содержание кумаринов в извлечении любистка лекарственного, найденное спектрофотометрическим методом, составило 6,67%, а относительная погрешность определения – 3,04%.

Для оценки правильности методики готовили модельный препарат с содержанием кумаринов в исследуемом извлечении 2,155 мг/мл, полученном из навески 0,7 г сырья, так как это содержание находится на верхнем пределе линейности методики.

Чтобы получить смеси с тремя уровнями концентраций – 1:0,5; 1:1 и 1:2, полученное извлечение разводили спиртом этиловым 96%.

На каждом уровне концентраций проводили определение содержания кумаринов, рассчитывали открываемость и оценивали правильность методики (Табл. 3).

Таблица 3 − Результаты оценки правильности методики количественного определения кумаринов в экстракте любистка лекарственного (исходное содержание 2,155 мг/мл)

Разведение модельного препарата

Расчетное содержание суммы кумаринов, мг/мл

Найденное содержание суммы кумаринов, мг/мл

Открываемость, R,%

Метрологические характеристики

1: 0,5

1,4370

1,4771

102,79

RSD=2,32%

1: 0,5

1,4370

1,5027

104,57

1: 0,5

1,4370

1,4101

98,13

1: 1

1,0775

1,0536

97,78

1: 1

1,0775

1,0917

101,32

1: 1

1,0775

1,0773

99,98

1: 2

0,7183

0,7409

103,15

1: 2

0,7183

0,7129

99,25

1: 2

0,7183

0,7196

100,18

Из представленных результатов следует, что на всех трех уровнях концентраций анализируемого объекта получаются сопоставимые результаты, а относительная погрешность определения правильности методики равна 2,32%.

Вывод. В результате проведённых исследований разработана методика количественного определения кумаринов в пересчете на ангелицин в растительном сырье методом спетрофотометрии. Методика количественного определения отвечает необходимым требованиям по показателям линейность, прецизионность и правильность.

Содержание кумаринов в пересчете на ангелицин в корнях и корневищах любистка лекарственного, определённое данной методикой, составило 6,67% в пересчёте на воздушно- сухое сырьё.

Рецензенты:

Компанцев В.А., д.ф.н., профессор кафедры неорганической химии Пятигорского медико-фармацевтический института – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г.Пятигорск.

Кодониди И.П., д.ф.н., доцент кафедры органической химии Пятигорского медико-фармацевтический института – филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г.Пятигорск.


Библиографическая ссылка

Овчинникова С.Я., Губанова Л.Б., Орловская Т.В. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КУМАРИНОВ В КОРНЕВИЩАХ И КОРНЯХ ЛЮБИСТКА ЛЕКАРСТВЕННОГО // Современные проблемы науки и образования. – 2014. – № 1. ;
URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=11543 (дата обращения: 19.03.2024).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1,674