Введение
В связи с ухудшением экологической обстановки и ростом числа гепатотоксических ксенобиотиков актуальной задачей является создание новых эффективных гепатопротекторных препаратов или расширение спектра фармакологического применения уже имеющихся зарегистрированных препаратов, нормализующих строение, метаболизм, функции паренхимы печени. Особенно велика потребность в гепатозащитных средствах при терапии заболеваний печени токсической этиологии, т.к. печень является основным органом, в котором осуществляется метаболическая биотрансформация ксенобиотиков, многие из которых обладают гепатотоксическими свойствами. Известно, по крайней мере, 80 000 гепатотоксических соединений, с которыми человек контактирует в течение всей жизни. В 30% случаев острых отравлений возникают клинические проявления химического повреждения печени, у 7% людей, получавших лекарственные препараты, развиваются медикаментозные поражения этого органа [5].
Повреждения печени могут вызывать различные группы лекарственных препаратов: противотуберкулезные, нестероидные противовоспалительные, противоопухолевые средства, антибиотики [7; 9]. Побочные эффекты лекарственных препаратов выступают в роли причинного фактора 40% гепатитов у пациентов старше 40 лет [6].
Кроме того, поражения печени довольно часто развиваются у больных токсикоманией и у лиц, злоупотребляющих алкоголем, что связано с его довольно выраженной гепатотоксичностью [8]. Отмечается [1], что после вирусов алкоголь является второй по частоте причиной хронических диффузных заболеваний печени.
Таким образом, в связи с неблагоприятной экологией, ростом потребления алкоголя, распространением токсикоманий, бесконтрольным применением медикаментов, недостаточной эффективностью существующих гепатопротекторов остаётся высокой потребность в изыскании гепатозащитных средств, повышающих резистентность печени к действию химических агентов, нормализующих её метаболизм в условиях напряжения детоксицирующей функции, а также внедрение этих препаратов в широкую медицинскую практику, что имеет особую социальную значимость.
Перспективными соединениями в качестве гепатопротектров следует считать флавоноиды, обладающие низкой токсичностью и широким спектром фармакологической активности, основой которой, по мнению большинства исследователей, считается установленное для данного класса веществ антиоксидантное действие.
В последние годы возрос интерес к роли гемодинамических и гемореологических нарушений в развитии заболеваний печени. Показано, что флавоноиды оказывают положительное влияние на эндотелиальную функцию и тонус сосудов, органный кровоток и реологические свойства крови [10]. Для гесперидина и диосмина, являющихся флавоноидами, установлено, что одним из основных их действий является капилляроукрепляющее, выражающееся в понижении пропускаемости стенок сосудов [4]. В настоящее время для лечения хронической венозной недостаточности хорошо зарекомендовал себя флебопротектор «Детралекс», основными компонентами которого и являются гесперидин и диосмин в соотношении 1:9, стабилизирующие структурные компоненты венозной стенки и повышающие её тонус [2; 6].
Одним из механизмов увеличения резистентности сосудов артерий и вен под действием гесперидина и диосмина является увеличение текучести липидов биомембран этих сосудов, что приводит к уменьшению их ломкости и увеличению гибкости. Уменьшение проницаемости сосудов связано с процессом упорядочения липидов в мембранах тканей под действием этих веществ, что соответствует литературным данным о механизме уменьшения проницаемости биомембран. Данное свойство флавоноидов имеет немаловажное значение в проявлении ими также и гепатозащитного действия.
Цель исследования
Изучение гепатозащитного действия гесперидина, диосмина и препарата «Детралекс», содержащего данные соединения.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования служили полученные на кафедре органической химии Пятигорского филиала ГБОУ ВПО «ВолгГМУ» под руководством доктора фармацевтических наук, профессора Э.Т. Оганесяна гесперидин – 7-О-рамноглюкозид гесперитина (5,7,3' – тригидрокси- 4¢-метоксифлавонон), выделенный из кожуры цитрусовых [3], диосмин - 7-О-рамноглюкозид диосметина (5,7,3' – тригидрокси- 4¢-метоксифлавон – из Vicia tanuifolia (variabilis) Roth и препарат «Детралекс» фирмы Сервье.
Исследования проведены на 106 белых беспородных половозрелых крысах обоего пола, весом 200-220 г. Гесперидин, диосмин и детралекс вводили перорально в дозе 100 мг/кг в виде водной суспензии. В качестве препарата сравнения использовали официальный гепатопротектор флавоноидной природы «Карсил» в дозе 100 мг/кг.
Модель острого СС14-гепатоза воспроизводили путем введения per os с помощью зонда 3 раза через день 50%-ного раствора СС14 в вазелиновом масле в дозе 0,15 мл/100 г массы тела животного. Исследуемые вещества вводили перорально за 7 дней до ведения СС14 и затем на фоне воспроизведения СС14-поражения печени. Контролем служили животные, которым вводили такой же объём растворителя. Забой животных проводили путём декапитации под лёгким эфирным наркозом через сутки после последнего введения СС14 (контроль) или совместно с веществом (опыт).
Эффективность гепатозащитного действия оценивали по нормализации биохимических показателей функционального состояния печени. Активность аланинаминотрансферазы (АлАт) в сыворотке крови определяли по методу Reitman S. и Frankel S., щелочной фосфатазы (ЩФ) – методу Бессея, Лоури, Брока, содержание в сыворотке крови общего билирубина (ОБ) – по Йендрашику, используя стандартные наборы «La Chema», содержание гликогена в печени определяли по реакции с фенолом в кислой среде после щелочного гидролиза. Количество триглицеридов (ТРГ) в гомогенате печени измеряли по Gottfried S.P., Rosenberg B. в модификации Сентебовой, содержание фосфолипидов - по методу, основанному на определении концентрации неорганического фосфата (Рн), освободившегося при кислотном гидролизе. Определение белка в печени проводили по методу Лоури в модификации Miller G. L.
Статистическую обработку результатов проводили с помощью параметрического критерия t Стьюдента с определением средней арифметической (М) и ее стандартной ошибки (m).
Результаты исследования и их обсуждение
Полученные результаты показали, что острый ССl4-гепатоз сопровождался развитием холестаза (повышение активности ЩФ на 127%, ОБ – на 171%), цитолиза (повышение активности АлАт на 171%). Уменьшение содержания в печени ФЛ (-27%) явилось, вероятно, одной из причин жирового перерождения печени, что подтверждалось значительным увеличением (+389%) количества ТРГ в печени. У контрольных животных отмечалось нарушение белковосинтетической функции печени - уменьшение содержания белка (-22%), кроме того, наблюдалось снижение содержания гликогена в печени на 46%.
Лечебно-профилактическое введение гесперидина, диосмина, детралекса и карсила способствовало нормализации содержания общего белка в печени и ОБ (исключение карсил) в сыворотке крови. Активность ЩФ достоверно снизилась под влиянием гесперидина, диосмина и детралекса на 55, 48 и 43% соответственно, а под влиянием карсила оставалась на уровне контроля. Применение гесперидина, диосмина, детралекса и карсила способствовало достоверному снижению активности АлАт сыворотки крови (-35; -32; -43 и -26% соответственно), причём в наибольшей степени под влиянием детралекса, но полной нормализации не происходило во всех случаях. Содержание ТРГ в печени снизилось примерно в равной степени как под влиянием природных биофлавоноидов (гесперидина -63% и диосмина -65%), так и венотонизирующего препарата «Детралекс» (-61%), но при этом их содержание в печени не достигло уровня интактных животных. Официальный гепатопротектор «Карсил» в наименьшей степени препятствовал развитию жировой дистрофии в печени при CCl4-гепатозе, так как снижал содержание ТРГ в печени только лишь на 49%. Содержание гликогена в печени в наибольшей степени увеличилось под влиянием детралекса (+232%) таким образом, что превысило даже уровень интактных значений на 81%. Введение же животным отдельно гесперидина и диосмина в дозах 100 мг/кг также увеличивало содержание гликогена (+200% и +150% соответственно), но не так значительно, как в случае детралекса, представляющего собой сочетание диосмина и гесперидина, а карсил вообще не повлиял на данный показатель (Рк>0,1). Похожая картина наблюдалась и в отношении содержания ФЛ, основных субстратов ПОЛ, в печени: детралекс увеличил их содержание на 144% по отношению к контрольным животным и на 79% в сравнении с нормой (рисунок 1). Увеличение содержания гликогена в печени под влиянием детралекса гесперидина и диосмина до значений, превышающих таковые у интактных крыс, вероятно, можно объяснить тем, что в сложившейся в клетке метаболической ситуации данные объекты исследования, скорее всего, способствовали использованию в качестве энергосубстратов для аэробного пути окисления в митохондриях не глюкозы, а ТРГ, содержание которых в печени снижается, а глюкоза откладывается в данном органе в виде гликогена, содержание которого увеличивается.
100% - контрольные животные; ^ - достоверно по отношению к интактным животным; * - достоверно по отношению к контрольным животным.
Рисунок 1 - Влияние лечебно-профилактического введения гесперидина, диосмина и детралекса на биохимические показатели функционального состояния печени при остром CCl4-гепатозе у крыс
Таким образом, близкие по структуре флавоноидные соединения гесперидин и диосмин в дозе 100 мг/кг на фоне CCl4-гепатоза оказали сравнимое по своей эффективности гепатозащитное действие. При применении детралекса, содержащего диосмин и гесперидин в соотношении 1:9, наблюдалось усиление гепатозащитной активности по ряду показателей (содержание гликогена, ФЛ в печени). Необходимо отметить, что введение детралекса практически по всем показателям оказалось также более эффективным, чем лечебно-профилактическое применение карсила.
Выявленный синергизм между диосмином и гесперидином, как это имеет место в препарате «Детралекс», в проявлении гепатозащитного действия, возможно, связан с повышением антиоксидантной активности при их совместном действии и способности более эффективно сдерживать усиление ПОЛ, вызванное CCl4, о чём свидетельствует восстановление содержания фосфолипидов в печени, являющихся основными составными компонентами биомембран, и восстановление их целостности (снижение активностей АлАт в сыворотке крови). Имеются сведения о том, что действие комбинации антиоксидантов, один из которых является более сильным, а другой – более слабым, значительно превышает действие одного антиоксиданта, поскольку более слабый выступает в качестве протондонатора, способствуя восстановлению активности другого антиоксиданта, что усиливает совместный ингибирующий эффект. Как показано нашими исследованиями, агликон диосметин обладает большей антиоксидантной активностью, а гесперитин значительно уступает ему в способности тормозить Fe2+-аскорбатзависимое ПОЛ.
Выводы
Изучение комплекса биохимических показателей, характеризующих функциональное состояние печени, позволило установить, что гесперидин, диосмин и детралекс обладают выраженным гепатозащитным действием при лечебно-профилактическом применении в эффективной дозе на фоне острого токсического поражения печени СС14, превышающим по своей эффективности таковое действие референтного препарата карсила в эквивалентной дозе.
Усиление гепатозащитного эффекта диосмина и гесперидина в соотношении 1:9, как в препарате «Детралекс», может быть объяснено с позиции того, что, как более слабый антиоксидант, гесперидин способствует восстановлению расходуемых на обезвреживание радикалов ×ОН и О2.- более активных молекул диосмина, выступая в качестве синергиста последнего в реакциях обрыва цепей свободнорадикального ПОЛ.
Можно предположить, что сосудистые эффекты, которыми обладают гесперидин, диосмин и детралекс, такие как улучшение микроциркуляции и метаболизма сосудистой стенки, имеют также немаловажное значение для проявления ими гепатозащитной активности.
Рецензенты:
Ивашев Михаил Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, зав. каф. клинической фармакологии, Пятигорский филиал ГБОУ ВПО «ВолгГМУ» МЗ РФ, г. Пятигорск.
Погорелый Василий Ефимович, доктор биологических наук, профессор кафедры фармакологии и патологии, Пятигорский филиал ГБОУ ВПО «ВолгГМУ» МЗ РФ, г. Пятигорск.