Следует отметить, что внедрение в исследования системы HLA молекулярно-генетических методов не только позволило конкретизировать представления о системе HLA, но и значительно расширило представления о ее полиморфизме, при этом были открыты многие новые аллели классов I, II и III, и общее количество только известных специфичностей HLA классов I и II увеличилось более чем в 6 раз. Аллельные варианты HLA классов I и II входят в несколько генетических локусов. Так, в классе I имеется 3 локуса HLA: А, В и С, также к антигенам HLA класса I относятся гены локуса МIС - МНС class I chain - related gens (МIС - А и МIС - В) [9].
Эти гены локализуются на хромосоме 6 в непосредственной близости от HLA - В [10].
К настоящему моменту установлено 17 аллельных вариантов генов МIС - А и МIС - В [6; 9]. В настоящее время обнаружено, что антигены МIС - А участвуют в активации взаимодействия ТСR - молекулы МНС в развитии Т-клеточно-опосредованной цитотоксичности и активности НК-клеток, тем самым, в частности, играя роль в обеспечении противоракового иммунитета [7].
Успехи молекулярной биологии, в частности иммуногенетические методы изучения главного комплекса гистосовместимости человека (МНС), способствовали не только новому взгляду на этиологию и патогенез многих заболеваний, но и прогнозам ряда заболеваний в клинике. Исследование МНС стало одним из приоритетных направлений в иммуногенетике [6]. Изучение характера ассоциированности антигенных вариантов генов HLA со злокачественными солидными опухолями у детей в изученной нами литературе ранее не проводилось.
Заболеваемость детей злокачественными опухолями в России за последние 10 лет увеличилась на 20% и достигла 4,25 тысяч [1]. В настоящее время в России насчитывается около 12 500 детей до 15 лет, находящихся под врачебным наблюдением по поводу злокачественных новообразований (ЗН) всех локализаций [2]. Россию можно отнести к странам с высоким уровнем заболеваемости детской онкологической патологией. В 2002 году она составила 13-15 на 100 тысяч детского населения [3]. Солидные злокачественные новообразования (ЗН), включая опухоли ЦНС, занимают второе место в структуре заболеваемости детей злокачественными опухолями. На их долю, по данным различных отечественных и зарубежных авторов, приходится от 48,5 до 54% от всей онкопатологии. Среди солидных опухолей наиболее часто диагностируются опухоли центральной нервной системы - около 20%. Реже встречаются опухоли почек - 8%, костей и мягких тканей - 12%, глаз - 3,5%, половых органов - 0,7% [5].
Целью настоящей работы явилось исследование распределения антигенов главного комплекса гистосовместимости I класса у детей с солидными злокачественными опухолями.
Материалы и методы. Информация об обследованной популяции. Определение антигенов HLA I класса было проведено у 74 пациентов отделения детской онкологии РНИОИ: 12 пациентов с саркомой Юинга, 11 пациентов с остеогенной саркомой, 14 пациентов с нейробластомой, 14 пациентов с нефробластомой, 23 пациента с герминогенными опухолями (дисгерминома, тератома, тератобластома, эмбриональный рак яичка, семинома, герминогенная опухоль головного мозга). Контрольную группу составили 1215 доноров ГУЗ СПК РО. Средний возраст больных составил: с саркомой Юинга - 11,8 года, остеогенная саркома - 17,1 года, нейробластомой - 4,7 года, нефробластомой - 4,8 года, герминогенные опухоли - 14,2 года. Заболевание начиналось в среднем в возрасте: с саркомой Юинга - 11,6 года, остеогенная саркома - 16,4 года, нейробластомой - 4,4 года, нефробластомой - 4,2 года, герминогенные опухоли - 10,6 года. Из них при саркоме Юинга - 9 мальчиков, 3 девочки, при остеогенной саркоме - 7 мальчиков, 4 девочки, нейробластома - 8 мальчиков, 6 девочек, нефробластома - 9 мальчиков, 5 девочек, герминогенные опухоли - 10 мальчиков, 13 девочек.
Исследование HLA фенотипа I класса проводилось на базе ГУЗ СПК РО в иммунологическом отделении методом серологического типирования.
Серологическое типирование осуществляли в стандартном лимфоцитотоксическом тесте. Для определения HLA - антигенов I класса, локусов А и В, в качестве гистотипирующих стандартов использовали сыворотки Всероссийского банка гистотипирующих реагентов Санкт-Петербургского НИИ гематологии и переливании крови.
Статистическая обработка результатов. Достоверность различий и достоверность наблюдаемой ассоциации определяли с помощью общепринятого в иммуногенетике вычисления χ2.
Результаты и обсуждение. Первым этапом работы выполнена оценка распределения антигенов HLA I класса у детей с солидными злокачественными опухолями. Результаты исследования распределения антигенов HLA I класса представлены в таблицах 1-5.
Все основные антигены присутствуют в популяции: HLA I класса (локус А и В).
Таблица 1 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с нейробластомой
|
Антигены HLA I класса |
Здоровые лица(n = 1215) |
Больные (n = 14) |
χ2. |
|
А 1 |
25,19 |
21,42 |
0,09 |
|
А 2 |
48,06 |
50,0 |
00,2 |
|
А3 |
25,35 |
7,14 |
2,43 |
|
А23 |
4,36 |
7,14 |
0,25 |
|
А24 |
16,46 |
35,71 |
3,69 |
|
А25 |
4,52 |
7,14 |
0,22 |
|
А26 |
5,35 |
7,14 |
0,09 |
|
А11 |
12,59 |
14,28 |
0,04 |
|
А31 |
0,90 |
7,14 |
5,56 |
|
В 51 |
12,35 |
14,28 |
0,40 |
|
В7 |
19,67 |
1,14 |
1,38 |
|
В8 |
10,86 |
21,42 |
1,58 |
|
В44 |
14,07 |
14,28 |
0,001 |
|
В13 |
11,60 |
35,71 |
8,2 |
|
В62 |
6,99 |
7,14 |
0,001 |
|
В38 |
8,97 |
7,14 |
0,06 |
|
В39 |
1,73 |
7,14 |
2,31 |
|
В 18 |
13,50 |
7,14 |
0,48 |
|
В 49 |
5,10 |
7,14 |
0,12 |
|
В 55 |
0,82 |
7,14 |
0,01 |
|
В 27 |
10,70 |
28,57 |
4,55 |
|
В 35 |
14,90 |
14,28 |
0,004 |
|
В 60 |
6,34 |
14,28 |
2,32 |
|
В 61 |
2,47 |
7,14 |
1,27 |
Примечание. В таблице 1 - частота встречаемости антигена в (%).
Из представленных данных (табл. 1), при нейробластоме по сравнению с контролем повышена частота антигенов - А24 - 35,71%, А31 - 7,14%, В8 - 21,42%, В13 - 35,71%, В27 - 28,57, В60 - 14,28%. Достоверно повышена только частота антигена В13 (χ2 - 6,02, р<0,05). Снижена частота антигенов В7 - 7,14% и В18 - 7,14%. Число гомозигот при нейробластоме - 7 случаев.
Таблица 2 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с нефробластомой
|
Антигены HLA I класса |
Здоровые лица (n = 1215) |
Больные (n = 14) |
χ2. |
|
А 1 |
25,19 |
14,28 |
0,86 |
|
А 2 |
48,06 |
50,0 |
0,02 |
|
А3 |
25,35 |
35,71 |
0,78 |
|
А24 |
16,46 |
14,28 |
0,05 |
|
А25 |
4,52 |
7,14 |
0,22 |
|
А26 |
5,35 |
21,42 |
6,85 |
|
А11 |
12,59 |
14,28 |
3,60 |
|
А28 |
5,10 |
14,28 |
2,36 |
|
А29 |
1,48 |
7,14 |
2,91 |
|
А31 |
0,90 |
7,14 |
5,56 |
|
В 51 |
12,35 |
28,57 |
3,32 |
|
В7 |
19,67 |
7,14 |
1,36 |
|
В8 |
10,86 |
14,28 |
0,17 |
|
В44 |
14,07 |
14,28 |
0,001 |
|
В13 |
11,60 |
7,14 |
2,69 |
|
В38 |
8,97 |
7,14 |
0,06 |
|
В 18 |
13,50 |
28,57 |
2,66 |
|
В 49 |
5,10 |
14,28 |
2,36 |
|
В 35 |
14,90 |
35,71 |
3,17 |
|
В 60 |
6,34 |
7,14 |
0,02 |
|
В 41 |
4,12 |
14,28 |
3,13 |
Примечание. В таблице 2 - частота встречаемости антигена в (%).
При нефробластоме (табл. 2) повышена частота антигенов: А26 - 21.42%, А31 - 7,14%, В51 - 28,57%, В18 - 28,57%, В35 - 35,71%, В41 - 14,28%. Достоверно повышена только частота антигена А26 (χ2 - 6,85, р<0,05). Снижена частота антигена В13 - 7,14%. Число гомозигот при нефробластоме - 5 случаев. Повышение частоты HLA А31, вероятнее всего, обусловлено низкой частотой антигена в популяции и небольшим числом пациентов в обследуемой группе.
Таблица 3 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с саркомой Юинга
|
Антигены HLA I класса |
Здоровые лица (n = 1215) |
Больные (n = 12) |
χ2. |
|
А 1 |
25,19 |
33,33 |
0,11 |
|
А 2 |
48,06 |
50,0 |
0,02 |
|
А3 |
25,35 |
33,33 |
0,89 |
|
А24 |
16,46 |
41,66 |
3,77 |
|
А25 |
4,52 |
8,33 |
0,004 |
|
А26 |
5,35 |
8,33 |
0,03 |
|
В 51 |
12,35 |
33,33 |
3,05 |
|
В7 |
19,67 |
25,0 |
0,01 |
|
В8 |
10,86 |
25,0 |
0,57 |
|
В44 |
14,07 |
8,33 |
0,02 |
|
В13 |
11,60 |
8,33 |
0,02 |
|
В62 |
6,99 |
8,33 |
0,15 |
|
В 18 |
13,50 |
8,33 |
0,01 |
|
В 27 |
10,70 |
8,33 |
0,04 |
|
В 35 |
14,90 |
16,67 |
0,06 |
|
В 60 |
6,34 |
8,33 |
0,09 |
|
В 61 |
2,47 |
8,33 |
0,13 |
|
В 41 |
4,12 |
8,33 |
0,001 |
Примечание. В таблице 3 - частота встречаемости антигена в (%).
При саркоме Юинга (табл. 3) значительно повышена частота антигенов А24 - 41,66%, В51 - 33,33%, В61 - 8,33%. Достоверных различий не выявлено.
Таблица 4 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с остеогенной саркомой
|
Антигены HLA I класса |
Здоровые лица (n = 1215) |
Больные (n = 11) |
χ2. |
|
А 1 |
25,19 |
18,18 |
0,03 |
|
А 2 |
48,06 |
45,45 |
0,02 |
|
А3 |
25,35 |
36,36 |
0,22 |
|
А24 |
16,46 |
36,36 |
1,84 |
|
А26 |
5,35 |
9,00 |
0,01 |
|
А28 |
5,10 |
9,00 |
0,01 |
|
В 51 |
12,35 |
36,36 |
3,83 |
|
В7 |
19,67 |
9,0 |
0,25 |
|
В8 |
10,86 |
18,18 |
0,08 |
|
В44 |
14,07 |
18,18 |
0,01 |
|
В13 |
11,60 |
27,27 |
1,25 |
|
В14 |
5,60 |
9,0 |
0,02 |
|
В62 |
6,99 |
9,0 |
0,10 |
|
В38 |
8,97 |
9,0 |
0,27 |
|
В 56 |
1.97 |
9,0 |
0,28 |
|
В 35 |
14,90 |
27,27 |
0,52 |
|
В 60 |
6,34 |
9,0 |
0,07 |
|
В 61 |
2,47 |
9,0 |
0,18 |
|
В 41 |
4,12 |
9,0 |
0,004 |
Примечание. В таблице 4 - частота встречаемости антигена в (%).
У пациентов с остеогенной саркомой (табл. 4) повышена частота антигенов А24 - 36,36%, В51 - 36,36%, В61 - 9,0%, также отмечено повышение частоты антигенов В13, В56, В35 (27,27%, 9,0%, 27,27%) по сравнению с контрольной группой. Снижена частота антигенов В7 - 9,0%, однако эти различия недостоверны из-за небольшого числа наблюдений. Число гомозигот в группе с остеогенной саркомой составило 5 случаев, число гомозигот у пациентов с саркомой Юинга - 7.
Таблица 5 - Распределение антигенов HLA I класса у детей с герминогенными опухолями
|
Антигены HLA I класса |
Здоровые лица (n = 1215) |
Больные (n = 23) |
χ2. |
|
А 1 |
25,19 |
17,39 |
1,20 |
|
А 2 |
48,06 |
56,52 |
0,65 |
|
А3 |
25,35 |
26,09 |
0,006 |
|
А24 |
16,46 |
26,09 |
1,51 |
|
А25 |
4,52 |
4,34 |
0,22 |
|
А26 |
5,35 |
17,39 |
3,98 |
|
А11 |
12,59 |
26,09 |
2,42 |
|
А30 |
2,39 |
4,34 |
0,75 |
|
А23 |
4,36 |
4,34 |
0,26 |
|
В 51 |
12,35 |
21,74 |
1,08 |
|
В7 |
19,67 |
17,39 |
0,001 |
|
В8 |
10,86 |
8,69 |
0,001 |
|
В44 |
14,07 |
21,74 |
0,56 |
|
В13 |
11,60 |
4,34 |
0,57 |
|
В14 |
5,60 |
8,69 |
0,03 |
|
В62 |
6,99 |
13,04 |
1,14 |
|
В39 |
1,73 |
4,34 |
0,02 |
|
В 18 |
13,50 |
21,74 |
0,71 |
|
В57 |
6,91 |
4,34 |
0,55 |
|
В49 |
5,10 |
4,34 |
0,10 |
|
В50 |
1,24 |
4,34 |
1,45 |
|
В55 |
0,82 |
4,34 |
0,45 |
|
В 27 |
10,70 |
4,34 |
1,78 |
|
В 35 |
14,90 |
26,09 |
2,24 |
Примечание. В таблице 5 - частота встречаемости антигена в (%).
При герминогенных опухолях (табл. 5) повышена частота антигенов А24 - 26,09%, А26 - 17,39%, А11 - 26,09%, В51 - 21,74%, В18 - 21,74%, В39 - 4,34%, В50 - 4,34%, В55 - 4,34%. Достоверные различия по сравнению с контрольной группой отмечены в частоте встречаемости антигена А26 (χ2 - 3,98, р<0,05). Повышение частоты антигенов В39, В50, В55, вероятнее всего, обусловлено небольшим числом обследованных пациентов данной патологии и низкой частотой этих антигенов среди здоровых лиц.
Проведение сравнительного анализа HLA I класса позволило выявить различия между антигенным составом у больных с саркомой Юинга и остеогенной саркомой, с нейробластомой, нефробластомой, герминогенными опухолями. Так, у больных с нейробластомой, нефробластомой, герминогенными опухолями встречается антиген А11, а у больных с саркомой Юинга и остеогенной саркомой не выявляются данные антигены. В тоже время, у больных с саркомой Юинга и остеогенной саркомой чаще встречается антиген В51, нежели при нейробластоме, нефробластоме, герминогенных опухолях.
Выводы
1. В исследованных нами группах детей с солидными злокачественными опухолями: нефробластомой, нейробластомой, саркомой Юинга, остеогенной саркомой, герминогенными опухолями отмечено достоверное увеличение частоты встречаемости ряда антигенов HLA I класса. Так достоверно повышена частота антигена HLA В13 при нейробластоме (р<0,05), HLA А26 при нефробластоме и герминогенных опухолях (р<0,05).
Необходимо продолжить исследование пациентов с данными патологическими процессами для уточнения результатов.
2. Для дальнейшего изучения ассоциативных связей системы HLA со злокачественными опухолями у детей целесообразно провести HLA типирование по II классу (локус - DRB I).
Рецензенты:
Каймакчи О.Ю., д.м.н., ассистент кафедры онкологии Ростовского государственного медицинского университета, г. Ростов-на-Дону.
Нестерова Ю.А., к.м.н., ассистент кафедры онкологии Ростовского государственного медицинского университета, врач-педиатр отделения детской хирургии ФГБУ «Ростовский научно-исследовательский онкологический институт», г. Ростов-на-Дону.