Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

THE ROLE OF CSK GENE IN THE DEVELOPMENT OF ISCHEMIC STROKE

Platunova I.M. 1 Nikulina S.Yu. 1 Chernova A.A. 1 Prokopenko S.V. 1 Nikulin D.A. 2
1 Krasnoyarsk State Medical University
2 Federal State-Funded Healthcare Institution Siberian Clinic Center of Russian Federal Bio-Medical Agency
С целью изучения прогностической роли ОНП-маркера rs1378942 гена CSК в развитии ишемического инсульта проведено обследование 194 пациентов с ишемическим инсультом (118 мужчин и 76 женщин, средний возраст 55,06±9,40 лет) и 157 здоровых лиц (106 мужчин и 51 женщина, средний возраст 58,2±7,09 лет). Диагноз острого нарушения мозгового кровообращения устанавливался на основании совокупности данных, полученных в ходе сбора анамнеза, данных физикального осмотра, исследования соматического и неврологического статуса, биохимических показателей крови и клинико-инструментальной диагностики, согласно национальному стандарту Российской Федерации. Группа контроля была сформирована НИИ СО РАМН в ходе международного проекта HAPIEE. В результате исследования установлено статистически значимое преобладание гетерозиготного генотипа АС rs1378942 гена CSK в группе больных с инсультом по сравнению с группой контроля. Носительство гомозиготного распространенного генотипа АА и аллеля А полиморфизма rs 1378942 гена CSK имеет протективное значение в генезе развития ишемического инсульта.
To study the prognostic role of SNP-marker rs1378942 CSK gene in development of ischemic stroke were examined 194 patients with ischemic stroke (118 men and 76 women, average age 55,06±9.40 years) and 157 healthy individuals (106 men and 51 women, average age 58.2±7.09 years). The diagnosis of stroke were established on the anamnesis data, data of physical examination, investigation of somatic and neurological status, blood biochemical indicators and clinical and instrumental diagnosis, according to the national standard of the Russian Federation. The control group was formed by the research Institute of SD RAMS during the international project HAPIEE. The study showed a statistically significant predominance of the heterozygous genotype of AC rs1378942 CSK gene in the group of patients with stroke compared with control group. Carriers of the homozygous common genotype AA and allele A of polymorphism rs 1378942 CSK gene has protective significance in the development of ischemic stroke.
gene csk
ischemic stroke
atherothrombotic stroke
genetic predisposition
single nucleotide polymorphism
multifactorial disease.

Заболеваемость инсультом и смертность от него в Сибири являются одними из самых высоких в мире [2]. Тенденция роста заболеваемости направлена с запада на восток и с юга на север [3, 7].

Понятие «инсульт» невозможно определить как самостоятельное заболевание, так как в основе его лежит множество причин, влияющих на его развитие. К ним относятся как внешние (средовые) факторы, так и индивидуальные генетические особенности. Сложность патогенеза инсульта обусловлена его многофакторной природой [1, 6].

Поиск генетических предикторов развития инсультов в настоящее время ведется активно во всех развитых странах, и данное направление признано приоритетным, о чем свидетельствуют многочисленные исследования, направленные на выявление генетических факторов риска развития мультифакторных заболеваний [5, 4, 11, 15].

В качестве генетического предиктора развития ишемического инсульта (ИИ) у больных ГБ был изучен однонуклеотидный полиморфизм (ОНП) rs1378942 гена CSK. Этот ген расположен на 15-й хромосоме в локусе 15q24.1. ОНП маркер rs 1378942 гена CSK локализован в интроне. Данный ген кодирует различные семейства тирозинкиназ [14]. Ферменты тирозинкиназ играют важную роль в регуляции клеточного роста и дифференцировке нормальных клеток. Нарушение экспрессии гена CSK влечет за собой увеличение активности sck-тирозинкиназы. Тирозинкиназы представляют собой семейство протеинкиназ — натрийуретических пептидов, катализирующих перенос концевого фосфата с молекулы АТР на гидроксильную группу остатка тирозина в молекулах клеток-мишеней, которые представлены клетками сердечно-сосудистой системы, почек, эндокринных органов и центральной нервной системы [10, 13].

В нескольких крупных исследованиях изучалось влияние полиморфизма rs1378942 гена CSK на развитие различных патологических процессов [9]. Исследования, проведенные на популяциях Японии, Восточной Азии и Европы, выявили взаимосвязь полиморфизма rs1378942 гена CSK с развитием ГБ [12]. В Российской Федерации также подтверждена роль данного полиморфизма гена CSK в формировании ГБ [8].

Однако изучение влияния указанного полиморфизма на развитие ишемического инсульта в России ранее не проводилось.

Цель исследования: изучить прогностическую роль ОНП-маркера rs1378942 гена CSК в развитии ишемического инсульта.

Материал и методы исследования

С целью изучения прогностической роли ОНП-маркера rs1378942 гена CSК в исследование были включены 194 пациента с ишемическим инсультом (основная группа) и 157 пациентов без артериальной гипертензии (контрольная группа). Все пациенты основной группы были взяты в исследование в остром периоде инсульта – до 20 суток от момента начала сосудистого события. Основную группу составили представители европеоидной расы, жители города Красноярска, госпитализированные в первичный территориальный сосудистый центр «КГБУЗ КМКБ № 20 им. И.С. Берзона» за период 2010–2011 гг. В исследование были включены 194 больных с инсультом (118 мужчин, средний возраст 54,56±9,52 лет, и 76 женщин, средний возраст 55,84±9,23 лет) в возрасте от 21 до 70 лет (средний возраст 55,06±9,40 лет). Диагноз «острый инсульт» устанавливался на основании совокупности данных, полученных в ходе сбора анамнеза, данных физикального осмотра, исследования соматического и неврологического статуса, биохимических показателей крови и клинико-инструментальной диагностики, согласно национальному стандарту Российской Федерации (протокол ведения больных с инсультом от 01.09.2009 г.).

Группа контроля была сформирована НИИ СО РАМН в ходе международного проекта HAPIEE (Health, Alcohol and Psychosocial factors In Eastern Europe). Программа исследования включала: измерение артериального давления, антропометрию (рост, вес, объем талии, бедер), социально-демографические характеристики, опрос о курении, употреблении алкоголя (частота приема и типичная доза), уровень физической активности, оценку липидного профиля (общий холестерин, триглицериды, холестерин липопротеидов высокой плотности), опрос на выявление стенокардии напряжения согласно опроснику (ROSE), ЭКГ-покоя в 12 отведениях. Группа контроля представлена в количестве 157 человек без артериальной гипертензии (АГ) (106 мужчин и 51 женщина). В этой группе каждые 6 месяцев по данным двух и более исследований в течение нескольких лет с интервалом не менее 6 месяцев зафиксировано артериальное давление (АД) не выше «нормального». Половозрастные показатели группы контроля были сопоставимы с показателями основной группы.

Молекулярно-генетическое исследование проводили в ФГБУ «НИИ терапии и профилактической медицины» СО РАМН г. Новосибирска. Геномную ДНК выделяли из 5–10 мл периферической крови по стандартной методике с использованием протеиназы с последующей экстракцией фенол-хлороформом.  Полиморфизм гена тестировали с помощью ПЦР в реальном времени в соответствии с протоколом фирмы-производителя (зонды TaqMan, Applied Biosystems, США) на приборе AB 7900HT.

Статистическая обработка полученных данных выполнялась в программе SPSS, версии 20.0. Описательная статистика результатов исследования представлена для качественных признаков в виде процентных долей и их стандартных ошибок доли, для количественных – в виде средних арифметических и стандартных отклонений. Проверка нормальности распределения значений переменных в группах наблюдения проводилась с использованием критерия Колмогорова—Смирнова. Значимость различий качественных признаков в группах наблюдения оценивали при помощи непараметрического критерия χ2 Пирсона с поправкой на непрерывность. При частоте встречаемости признака 5 и менее использовался точный критерий Фишера. Различия во всех случаях оценивали как статистически значимые при р<0,05.

Результаты и обсуждение

Результаты анализа rs1378942 гена CSK среди больных с инсультом и в контрольной группе представлены в таблице 1. Частота гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю у больных с инсультом составила 28,4%±3,3, гетерозиготного генотипа — AС –52,5%±3,7 и гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю – 19,1%±2,9. В контрольной группе 40,1%±3,9 являлись носителями гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю, 39,5%±3,9 – носителями гетерозиготного генотипа AС и 20,4%±3,2 – носителями гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена CSK.

Как следует из представленных данных, доказано статистически значимое снижение количества носителей гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю у больных с инсультом (28,4%±3,3) по сравнению с контролем (40,1%±3,9). Также выявлено статистически значимое преобладание гетерозиготного генотипа АС в группе больных с инсультом (52,5%±3,7) в сравнении с контрольной группой (39,5%±3,9) (табл. 1).

Вероятно, носительство гомозиготного распространенного генотипа АА и аллеля А полиморфизма rs 1378942 гена CSK имеет протективное значение в генезе развития ишемического инсульта.

Таблица 1

Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs1378942 гена CSK среди больных с инсультом и группы контроля

Генотипы:

Инсульт (n=183)

Контроль (n=157)

p

n

%±m

n

%±m

 

AA

52

28,4±3,3

63

40,1±3,9

0,031

AC

96

52,5±3,7

62

39,5±3,9

0,023

CC

35

19,1±2,9

32

20,4±3,2

0,878

Аллели:

 

 

Аллель A

200

54,6±2,6

188

59,9±2,8

0,195

Аллель C

166

45,4±2,6

126

40,1±2,8

0,195

ОШ; 95% ДИ ОШ

0,807; 0,595–1,096

 

Генотип AA

52

28,4±3,3

63

40,1±3,9

0,031

Генотипы AC+CC

131

71,6±3,3

94

59,9±3,9

0,031

ОШ; 95% ДИ ОШ

1,688; 1,074–2,655

 

Примечание: р — уровень значимости при сравнении распределения генотипов с контрольной группой

Проведен анализ распределения генотипов гена CSK среди женщин, имеющих инсульт. По результатам исследования установлено, что различия в носительстве гетерозиготного генотипа AС гена CSK среди женщин с инсультом (47,2%±5,9) по сравнению с контрольной группой (29,4%±6,4) статистически незначимы.

Проведено сравнение распределения генотипов гена CSK среди 111 мужчин, имеющих инсульт, и 106 мужчин из группы контроля. Так, частота гомозиготного генотипа AA по распространенному аллелю у мужчин с инсультом составила 26,1%±4,2, гетерозиготного генотипа AС – 55,9%±4,7 и гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю – 18,0%±3,6. При исследовании частоты встречаемости генотипов и аллелей статистически значимых различий не выявлено.

При выделении в отдельную группу больных с атеротромботическим подтипом ишемического инсульта (n=130) частота носителей гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю составила 28,5±4,0, а гетерозиготного генотипа АС — 52,3±4,4, по гомозиготному редкому генотипу — 19,2±3,5. В сравнении с группой контроля, где эти же генотипы были распределены следующим образом:  АА (40,1±3,9), АС (40,1±3,9) и СС (19,7±3,2), статистически значимых различий при сравнении в этих группа выявлено не было.

При дальнейшем разделении групп больных с ишемическим атеротромботическим инсультом, учитывая гендерные различия, получены следующие данные. Установлено статистически значимое преобладание носителей гетерозиготного генотипа АС в группе женщин с ишемическим атеротромботическим инсультом — 51,9±6,9 по сравнению с женщинами группы контроля — 28,0±6,3 (табл. 2).

Обращая на это внимание, можно предположить, что носительство гетерозиготного генотипа АС полиморфизма rs1378942 гена CSK является генетическим фактором риска развития атеротромботического подтипа ишемического инсульта у женщин.

Таблица 2

Распределение частот генотипов и аллелей полиморфизма rs1378942 гена CSK среди женщин с ишемическим атеротромботическим инсультом и группы контроля

Генотипы:

Женщины с ишемическим атеротромботическим инсультом (n=52)

Контроль (n=50)

p

n

%±m

n

%±m

 

AA

16

30,8±6,4

24

48,0±7,1

0,114

27

51,9±6,9

14

28,0±6,3

0,024

СС

9

17,3±5,2

12

24,0±6,0

0,555

Аллели:

 

 

Аллель A

59

56,7±4,9

62

62,0±4,9

0,533

Аллель С

45

43,3±4,9

38

38,0±4,9

0,533

ОШ; 95% ДИ ОШ

0,804; 0,459–1,407

 

Генотип AA

16

30,8±6,4

24

48,0±7,1

0,075

Генотипы AС+СС

36

69,2±6,4

26

52,0±7,1

0,075

ОШ; 95% ДИ ОШ

0,481; 0,214–1,081

 

Примечание: р — уровень значимости при сравнении распределения генотипов с контрольной группой; р* — уровень значимости, достигнутый точным критерием Фишера

В выделенной группе мужчин с ишемическим атеротромботическим инсультом не установлено статистически значимых различий ни по одному генотипу.

При анализе полиморфизма rs1378942 гена CSK среди больных с ишемическим лакунарным инсультом и контрольной группы получены следующе результаты. Частота гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю у больных с лакунарным ишемическим инсультом составила 30,8%±7,4, гетерозиготного генотипа AС – 56,4%±7,9 и гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена CSK – 12,8% ±5,4. В контрольной группе 40,1%±3,9 являлись носителями гомозиготного генотипа АА по распространенному аллелю, 40,1%±3,9 – носителями гетерозиготного генотипа AС и 19,7%±3,2 – носителями гомозиготного генотипа СС по редкому аллелю гена CSK. По результатам нашего исследования статистически значимых различий не выявлено.

Частота носителей аллеля А гена CSK среди женщин с лакунарным ишемическим инсультом составила 56,7±9,0, у группы контроля – 62,0±4,9. Частоты носителей аллеля С гена CSK распределились следующим образом: женщины с лакунарным ишемическим инсультом – 43,3±9,0 и контрольная группа – 38,0±4,9. Не выявлено статистически значимых отличий ни по одному генотипу между женщинами с лакунарным инсультом и женщинами группы контроля.

Частота носителей аллеля А гена CSK среди мужчин с лакунарным ишемическим инсультом составила 60,4±7,1, у группы контроля – 59,3±3,4. Частоты носителей аллеля С гена CSK распределились следующим образом: мужчины с лакунарным ишемическим инсультом – 39,6±7,1 и контрольная группа – 40,7±3,4. Не выявлено статистически значимых отличий ни по одному генотипу между мужчинами с лакунарным инсультом и мужчинами группы контроля.

В нескольких крупных исследованиях изучалось влияние полиморфизма rs1378942 гена CSK на развитие различных патологических процессов. Исследования, проведенные на популяциях Японии и Восточной Азии, показали взаимосвязь полиморфизма rs1378942 гена CSK с ГБ. Была установлена ассоциация носительства гомозиготного генотипа АА распространенного аллеля А с риском ГБ (ОШ=1,09 95%ДИ 0,98–1,22), одномоментно на этой же популяции изучался уже упомянутый полиморфизм rs1004467 гена CYP17A1, у которого также была выявлена ассоциативная связь носительства гомозиготного генотипа АА с риском ГБ (ОШ 1,30 95% ДИ 1,07–1,25). Российские исследования установили ассоциативную связь гетерозиготного генотипа АС rs1378942 гена CSR c повышением риска артериальной гипертензии.

Полученные в нашей работе результаты перекликаются с данными российских исследований, так как нами установлено, что гетерозиготный генотип АС rs1378942 гена CSK значимо преобладает в группе больных с инсультом (52,5%±3,7) по сравнению с группой контроля (39,5%±3,7) (ОШ 1,688 95% ДИ 1,074–2,655).

Заключение

Установлено статистически значимое преобладание гетерозиготного генотипа АС rs1378942 гена CSK в группе больных с инсультом (52,2%±3,7) по сравнению с группой контроля (39,5%±3,9), (р=0,023), (ОШ; 95% ДИ ОШ 0,807; 0,595–1,096). Статистически значимые различия по гетерозиготному генотипу АС rs1378942 гена CSK получены при сравнении женщин основной группы с атеротромботическим подтипом ишемического инсульта (51,9%±6,9) по сравнению с женщинами группы контроля (28,0%±6,3),(р=0,024); (ОШ; 95% ДИ ОШ 0,804; 0,459–1,407).