Scientific journal
Modern problems of science and education
ISSN 2070-7428
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 0,791

COMPARATIVE ANALYSIS OF VAGINAL MICROFLORA IN FEMALES IN THE PUBERTY PERIOD

Uvarova E.V. 1 Kazakova A.V. 2
1 Federal State Budget Institution «Research Center for Obstetrics, Gynecology and Perinatology», Ministry of Healthcare of the Russian Federation
2 Samara State Medical University
Проведен анализ показателей микроценоза влагалища у девочек в пубертатном периоде полового созревания. Критерии возрастного интервала выбранных групп были обусловлены основными этапами формирования репродуктивной системы. Количество обследованных девочек составило 115, из них девочек от менархе до 15 лет — 44 человека, от 15 лет до 18 лет — 71. Исследование состояния влагалищного микробиоценоза проводили при помощи комплексной количественной полимеразной цепной реакции с использованием тест-систем «Фемофлор-17». При оценке состава условно-патогенной флоры учитывалось не только ее присутствие, но и количество по отношению к общей бактериальной массе. Сравнительный анализ микробного пейзажа влагалища в пубертатном периоде полового развития показал, что в составе микрофлоры в зависимости от фазы пубертата достоверных различий нет. Микрофлора влагалища в основном представлена Lactobacillis spp. и незначительной долей анаэробных микроорганизмов, лидирующее положение из которых занимает gardnerella.
We have evaluated and analyzed the vaginal microcenosis in adolescent females. The criteria of the choice of the age intervals subjected to the study are their relation to the main formation stages of the reproductive system. The research covered 115 females, including 44 girls from menarche stage to the age of 15 and 71 girls aged 15-18. The condition of vaginal microbiocenosis was estimated through the complex quantitative polymerase chain reaction involving the use of «Femoflor-17» test-system. While evaluating potentially pathogenic microflora we not only considered its presence but also its quantity as related to the total bacterial number. The comparative analysis of vaginal microflora in puberty showed neither relevance of the microflora composition to the puberty stage nor the significant difference between the stages. The vaginal microflora is mainly represented by Lactobacillis spp. and an insignificant amount of anaerobic microorganisms amongst which gardnerella is prevalent.
microcenosis
puberty
total bacterial number.

В настоящее время большое внимание уделяется проблеме микробной флоры влагалища, имеющей большое значение в формировании репродуктивного здоровья у детей и подростков.

В структуре гинекологической пораженности доля воспалительных заболеваний вульвы и влагалища занимает лидирующее значение.

На современном этапе развития детской гинекологической помощи мало исследований, посвященных изучению микрофлоры влагалища, учитывая периоды полового развития девочки [2–6]. В результате норма биоценоза влагалища, изменяющаяся в зависимости от стадии полового развития ребенка, описываемая разными авторами, имеет много вариаций, что не дает возможности стандартизировать эти показатели. Вследствие этого практический врач не всегда в состоянии оценить микрофлору влагалища как имеющую прямое отношение к патологическому процессу. В ряде случаев существует гипердиагностика вульвовагинитов за счет того, что случайные находки и комменсалы полового тракта принимаются за патогенный фактор [1, 8–10].

Становится очевидной необходимость определения микробиологической картины и стандартизации показателей микрофлоры половых путей в зависимости от стадии полового созревания для дальнейшего использования их в практике врача детской и подростковой гинекологии.

Целью нашего исследования явилось изучение показателей микроценоза влагалища у девочек в пубертатном периоде полового созревания.

Задачи:

  1. Сформировать группы девочек, участвующих в исследовании, учитывая этапы формирования репродуктивной системы.
  2. Определить микробиологические характеристики влагалища методом комплексной количественной полимеразной цепной реакции с использованием тест-систем «Фемофлор-17» в группах девочек от менархе до 15 лет и 16–18 лет.
  3. Выявить закономерности изменения микрофлоры и стандарты влагалищного биотопа у здоровых девочек в периоде пубертата.

Материалы и методы исследования

Взятие биоматериала осуществлялось на базе детского поликлинического отделения № 1 ГБУЗ СО СГП № 13 с февраля по август 2015 г., при подписании пациенткой или законным представителем информированного согласия на проведение исследования.

Количество обследованных девочек составило 115 человек, из них девочек от менархе до 15 лет — 44 человека, от 15 лет до 18 лет — 71 . Критерии возрастного интервала выбранных групп были обусловлены основными этапами формирования репродуктивной системы.

Критерии включения: здоровые девочки, проходившие профилактический осмотр с отсутствием жалоб, неизмененной слизистой влагалища, а также физиологическими выделениями из половых путей.

Критерии исключения: применение антибактериальных препаратов за месяц до обследования, отсутствие тяжелой экстрагенитальной патологии и наличие острых воспалительных заболеваний на момент осмотра и забора материала.

Исследование состояния влагалищного микробиоценоза проводили при помощи комплексной количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием тест-систем «Фемофлор-17» (производства ООО «НПО ДНК-Технология», Россия).

Материалом для исследования методом комплексной количественной ПЦР у девочек являлся соскоб эпителиальных клеток, который забирался из заднего свода влагалища через гименальное кольцо. Хранение материала осуществлялось при температуре 2–8°С не более 8 ч, далее при температуре –20°С в течение 1 месяца или при температуре –70°С в течение 1 года.

Всего исследовано 115 образцов соскобов отделяемого слизистой влагалища. Спектр диагностируемых показателей включал КВМ (контроль взятия материала), ОБМ (общая бактериальная масса), наличие микоплазм (Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp.), дрожжеподобных грибов (Candida spp.); Lactobacillus spp., (Enterobacterium spp., Streptococcus spp., Staphylococcus spp.), (Gardnerella vaginalis/Prevotella bivia/Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Sneathia spp./Leptotrichia spp./Fusobacterium spp., Megasphaera spp./Veillonella spp./Dialister spp., Lachnobacterium spp./Clostridium spp., Mobiluncus spp./Corinebacterium spp., Peptostreptococcus spp., Atopobium vaginae), а также идентификацию патогенов (Mycoplasma genitalium).

Заключение по результатам диагностического теста Real-Time PCR получали в виде диаграммы, которая описывала вид микробной флоры влагалища.

Рассчитывали абсолютные (в логарифмах полученных показателей бактериальной массы условно-патогенного организма Lg10УПМ) и относительные показатели (разница логарифмов полученных показателей общей бактериальной массы условно-патогенного организма (УПМ) и общей бактериальной массы (ОБМ) — Lg10УПМ – Lg10ОБМ). Оценку наличия Candida spp., Mycoplasma hominis, Ureaplasma spp., Mycoplasma genitalium проводили только в абсолютных показателях.

При оценке состава условно-патогенной флоры учитывалось не только ее присутствие, но и количество по отношению к общей бактериальной массе (ОБМ). Также определялось количество лактобактерий по отношению к общей бактериальной массе.

Статистическая обработка данных проводилась с использованием компьютерного программного пакета (Microsoft Office Excel 2007).

Результаты исследования

Пубертатный период, который продолжается от начала первой менструации и до 18 лет, делится на 2 фазы. Первая фаза пубертатного периода (с менархе до полных 15 лет) характеризуется периодическим и последовательным выделением эстрогенов. С 16 лет начинается вторая фаза пубертатного периода репродуктивной системы, которая характеризуется синхронизацией деятельности центрального и периферического звена репродуктивной системы. С началом менструальной функции, когда уровень половых гормонов резко увеличивается и происходит становление менструации, pH влагалища меняется, и среда приобретает высокую кислотность. Всех исследуемых мы разделили на группы с учетом фазы пубертатного периода.

В группе девочек с менархе до 15 лет мы обнаружили, что у 89% исследуемых Lg10 Lactobacillis spp. в среднем составил 7,17±0,22, у 41% Lg10 Enterobacteriaceae — 4,03±0,20, у 34% Lg10 Streptococcus spp. — 4,19±0,19, у 55% Lg10 Staphylococcus spp. — 4,04±0,17, у 86% Lg10 Gardnerella vaginalis — 5,59±0,24 , у 91% Lg10 Eubacterium spp. — 5,40±0,19, у 45% Lg 10 Sneathia — 5,13±0,37, у 75% Lg10 Megasphera spp.— 4,94±0,26, у 64% Lg10 Lachnobacterium spp. — 4,48±0,17, у 89% Lg10 Mobiluncus spp. — 4,46±0,15, у 84% Lg10 Peptostreptococcus spp. — 4,56±0,20, у 68% Lg 10 Atopobium vaginae — 3,22±0,40, у 5% Lg10 Mycoplasma hominis (1) – 2,05±0,75, Mycoplasma genitalium (2) не выявлены, у 34% Lg10 Ureaplasma — 4,82±0,25, у 18% Lg10 Candida spp. – 4,41±0,29. Общая бактериальная масса в среднем составила Lg10 ОБМ 7,60±0,12 (табл. 1).

Таблица 1

Состав влагалищного микроценоза у девочек от менархе до 15 лет

Микроорганизм

n

%

M±m

Общая бактериальная масса

44

100%

7,60±0,12

lactobacillus

39

89%

7,17±0,22

Enterobacteriac.

18

41%

4,03±0,20

Streptococ.

15

34%

4,19±0,19

staphyloccoc.

24

55%

4,04±0,17

gardnerella

38

86%

5,59±0,24

eubact.

40

91%

5,40±0,19

sntathia

20

45%

5,13±0,37

megasphera

33

75%

4,94±0,26

lachnobact

28

64%

4,48±0,17

mobiluncus

39

89%

4,46±0,15

peptstrept.

37

84%

4,56±0,20

atopobium

30

68%

3,22±0,40

micoplazma1

2

5%

2,05±0,75

micoplazma2

0

0%

ureaplazma

15

34%

4,82±0,25

candida

8

18%

4,41±0,29

 

В группе девочек 16–18 лет (табл. 2) мы обнаружили, что у 87% исследуемых Lg10 Lactobacillis spp. в среднем составил 7,30±0,15, у 32% Lg10 Enterobacteriaceae — 3,97±0,19, у 32% Lg10 Streptococcus spp. — 4,46±0,33, у 49% Lg10 Staphylococcus spp. — 3,98±0,16, у 86% Lg10 Gardnerella vaginalis — 5,38±0,19, у 93% Lg10 Eubacterium spp. — 5,10±0,16, у 44% Lg10 Sneathia — 4,94±0,29, у 75% Lg10 Megasphera spp. — 4,73±0,22, у 49% Lg10 Lachnobacterium spp. — 4,31±0,20, у 86% Lg10 Mobiluncus spp. — 4,17±0,10, у 65% Lg10 Peptostreptococcus spp. — 4,49±0,14, у 73% Lg10 Atopobium vaginae — 3,73±0,33, у 11% Lg10 Mycoplasma hominis (1) –4,50±0,40, у 3% Lg10 Mycoplasma genitalium (2) — 1,00±0,00 , у 54% Lg10 Ureaplasma — 4,31±0,20, у 28% Lg10 Candida spp. — 3,54±0,13. Общая бактериальная масса в среднем составила Lg10 ОБМ 7,61±0,10.

Таблица 2

Состав влагалищного микроценоза у девочек от 16 до 18 лет

Микроорганизм

n

%

M±m

Общая бактериальная масса

71

100%

7,61±0,10

lactobacillus

62

87%

7,30±0,15

Enterobacteriac.

23

32%

3,97±0,19

Streptococ.

23

32%

4,46±0,33

staphyloccoc.

35

49%

3,98±0,16

gardnerella

61

86%

5,38±0,19

eubact.

66

93%

5,10±0,16

sntathia

31

44%

4,94±0,29

megasphera

53

75%

4,73±0,22

lachnobact

35

49%

4,31±0,20

mobiluncus

61

86%

4,17±0,10

peptstrept.

46

65%

4,49±0,14

atopobium

52

73%

3,73±0,33

micoplazma1

8

11%

4,50±0,40

micoplazma2

2

3%

1,00±0,00

ureaplazma

38

54%

4,31±0,20

candida

20

28%

3,54±0,13

 

При сравнительном анализе групп менархе 15 лет и 16–18 лет достоверных изменений микробиоценоза не выявлено. Из тенденции следует отметить: количество Lg10 Lachnobacterium spp. уменьшается с 4,48±0,17 до 4,31±0,20 (р=0,055) в группе девочек 16–18 лет; количество Lg10 Peptostreptococcus spp. также уменьшается в этой группе с 4,56±0,20 до 4,49±0,14 (р=0,098).

Учитывая отсутствие достоверных изменений в составе влагалищного биотопа у девочек в группе от менархе до 15 лет и в группе девочек от 16 до 18 лет, мы изучили состав микроорганизмов во влагалище у девочек объединенной группы.

Состав влагалищного микроценоза у девочек от менархе до 18 лет представлен в табл. 3.

Общая бактериальная масса в среднем составила Lg10 ОБМ 7,61±0,08.

 

Таблица 3

Состав влагалищного микроценоза у девочек от менархе до 18 лет

Микроорганизм

n

%

M±m

Min

Max

Общая бактериальная масса

115

100,0%

7,61±0,08

5,2

9,2

lactobacillus

101

87,8%

7,25±0,12

3

9

Enterobacteriac.

41

35,7%

4,00±0,14

3

6,8

Streptococ.

38

33,0%

4,35±0,21

3

7,7

staphyloccoc.

59

51,3%

4,00±0,12

3

7,1

gardnerella

99

86,1%

5,46±0,15

3

8,6

eubact.

106

92,2%

5,22±0,12

3,1

8,2

sntathia

51

44,3%

5,01±0,23

3

8,3

megasphera

86

74,8%

4,81±0,17

3

7,9

lachnobact

63

54,8%

4,38±0,13

3

8,8

mobiluncus

100

87,0%

4,28±0,09

3

6,5

peptstrept.

83

72,2%

4,52±0,12

3

7,6

atopobium

82

71,3%

3,54±0,26

0,1

8

micoplazma1

10

8,7%

4,01±0,47

1,3

6

micoplazma2

2

1,7%

1,00±0,00

1

1

ureaplazma

53

46,1%

4,45±0,16

1,6

6,6

candida

28

24,3%

3,79±0,14

3

5,4

 

В группе девочек с менархе до 18 лет у 87,8% исследуемых Lg10 Lactobacillis spp. в среднем составил 7,25±0,12, у 86,1% Lg10 Gardnerella vaginalis — 5,46±0,15, у 92,2% Lg10 Eubacterium spp. — 5,22±0,12, у 35,7% Lg10 Enterobacteriaceae — 4,00±0,14, у 87% Lg10 Mobiluncus spp. — 4,28±0,09, у 74,8% Lg10 Megasphera spp. — 4,81±0,17, у 72,2% Lg10 Peptostreptococcus spp. — 4,52±0,12, у 71,3% Lg10 Atopobium vaginae — 3,54±0,26, у 54,8% Lg10 Lachnobacterium spp. — 4,38±0,13, 51,3% Lg10 Staphylococcus spp. — 4,00±0,12, у 46,1% Lg10 Ureaplasma — 4,45±0,16,у 44,3% Lg10 Sneathia — 5,01±0,23, у 33% Lg10 Streptococcus spp. — 4,35±0,21, у 24,3% Lg10 Candida spp. – 3,79±0,14, у 8,7% Lg10 Mycoplasma hominis (1) – 4,01±0,47, у 1,7% Mycoplasma genitalium (2) — 1,00±0,00.

Таким образом, сравнительный анализ микробного пейзажа влагалища в пубертатном периоде полового развития показал, что в составе микрофлоры в зависимости от фазы пубертата достоверных различий нет. Микрофлора влагалища в основном представлена Lactobacillis spp. и незначительной долей анаэробных микроорганизмов, лидирующее положение из которых занимает gardnerella.