Нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) относятся к числу наиболее распространенных лекарственных средств, часто назначаемых врачами для лечения различных заболеваний у пациентов всех возрастных групп [14]. Также нестероидные противовоспалительные препараты относятся к числу наиболее распространенных лекарственных средств, назначаемых ветеринарными врачами для лечения различных заболеваний домашних и сельскохозяйственных животных [12, 19].
Вопрос обезболивания домашних животных возникает перед врачом не только во время оперативного вмешательства, но и в послеоперационный период, при травмах и заболеваниях, сопровождающихся болью. Эффективное устранение острой боли у животных в домашних условиях чрезвычайно затруднено из-за невозможности назначать и применять животным наркотические анальгетики (морфин, фентанил, промедол и др.), являющиеся наиболее мощными препаратами для купирования боли.
В настоящее время в РФ для применения животным доступно несколько препаратов из группы НПВП. Большая часть этих лекарственных средств предназначена для лечения людей. Традиционно назначаемыми медикаментами из этой группы являются: метамизол натрий (Metamizole sodium) – анальгин, Баралгин, Максиган; ацетилсалициловая кислота (Acetylsalicylic acid) – Аспирин; ацетаминофен (Панадол, Парацетамол); индометацин (Indometacin) – Метиндол; диклофенак (Diclofenac) – Вольтарен, Диклонат П, Ортофен; кеторолак (Ketorolac) – Кеторол, Кетродол; кетопрофен (Ketoprofen) – Кетонал; ведапрофен – Квадрисол; карпрофен – Римадил. К специальным НПВП, предназначенныем эксклюзивно для мелких домашних животных, относится ведапрофен (квадрисол), кетопрофен (кетофен) и карпрофен (римадил) [1].
Все перечисленные препараты обладают анальгетическим эффектом различной силы [1 , 9]. К побочным эффектам НПВП относятся нарушения функции печени, почек, гематологические реакции, НПВН-ассоциированные патологии ЦНС [8, 6, 3].
Общеизвестно, что прием НПВП приводит к развитию патологии желудочно-кишечного тракта через неделю после начала лечения практически в 100% случаев [2]. НПВП–гастропатия является важнейшей патологией, ассоциированной с НПВП [5].
Вместе с тем, не менее важна другая НПВП-ассоциированная патология пищеварительной системы – поражение печени в форме НПВП-ассоциированного гепатита – и поражение поджелудочной железы – в форме НПВП-ассоциированного панкреатита – у людей и животных.
В последнее время в специальной литературе появляется все больше работ, посвященных вопросам гепатотоксичности НПВП [16, 18, 20]. При этом разные исследователи пришли к неоднозначным выводам: так, некоторые авторы утверждают, что взаимосвязь между применением НПВП и заболеваниями печени еще недостаточно документирована; частота поражения печени при этом очень низка и относительно незначительна по сравнению с риском возникновения НПВП-гастропатий [3].
Тем не менее, на сегодняшний день все больше специалистов приходят к выводу о несомненной взаимосвязи НПВН и гепатотоксичности; в литературе чаще стали появляться сообщения о поражениях печени на фоне приема препаратов данной группы, которые колеблются от бессимптомных форм, склонных к спонтанному разрешению, до фульминантного гепатита, который без экстренной трансплантации печени приводит к гибели больного [4].
В настоящее время большое внимание уделяется вопросу гепатотоксичности нимесулида [20], ибупрофена [18], диклофенака натрия (вольтарена) [6, 13], рофекоксиба [16], сулиндака и индометацина [17].
В патогенезе НПВП-ассоциированного поражения печени обсуждается роль блокады ферментных систем цикла Кребса и разобщения окислительного фосфорилирования (по типу синдрома Рейе) в митохондриях гепатоцитов [7], блокады фосфодиэстеразы IV, нарушения экскреции желчи вследствие образования объемных комплексов метаболитов НПВП с желчными кислотами, энтеропеченочной рециркуляции НПВП, а также иммунологических нарушений [11, 10].
Клинические и экспериментальные исследования показывают, что как иммунологические, так и идиосинкратические реакции могут участвовать в патогенезе вызываемых селективными НПВП поражений печени [15]. Возможно, что в процессе дезорганизации цитолемма гепатоцита приобретает антигенные свойства, что приводит к индукции аутоиммунного ответа и морфологически проявляется как перипортальный отек и мононуклеарная инфильтрация [4].
Недавние лабораторные исследования на животных способствовали определенному прогрессу в понимании механизмов НПВП-гепатотоксичности, но в настоящее время требуется проведение дальнейших исследований для полного представления патогенеза этого явления, что обеспечит лучшее понимание факторов риска и патофизиологии этого явления [15], а, следовательно, будет способствовать разработке путей направленной патогенетической коррекции НПВП-ассоциированного гепатита.
Материалы и методы. Моделирование НПВП-индуцированного поражения печени у нелинейных белых крыс осуществлялось пероральным введением нимесулида (Найз®) в течение 21 дня на фоне обычного пищевого режима за 1 час до кормления в следующих дозировках: 0,5 мг/кг (терапевтическая доза, n=10), 2,5 мг/кг (n=10) и 5 мг/кг (n=10). Контрольную группу составили 10 интактных животных.
Все эксперименты выполнены в соответствии с «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18.III.1986 (Текст изменен в соответствии с положениями Протокола (ETS № 170), после его вступления в силу 2 декабря 2005 года; Лиссабонский договор о внесении изменений в Договор о Европейском союзе и Договор об учреждении Европейского сообщества вступили в силу 1 декабря 2009 года) и «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» [Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N 755].
В течение эксперимента осуществляли ежедневное наблюдение за животными – оценка активности, внешнего вида, аппетита, физиологических функций. По окончании эксперимента проводили забор образцов ткани печени под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. Гистологическое исследование выполнено стандартными методиками [8]. Результаты, полученные при проведении гистологического исследования образцов тканей, полученных от животных экспериментальных групп, сравнивали с результатами, полученными при исследовании биоматериала, полученного от животных контрольной группы, используя критерий х2. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимали равным p<0,05.
Результаты и их обсуждение. При гистологическом исследовании печени животных контрольной группы (n=10) ткань печени представлена дольками, имеющими правильную гексагональную форму. В центре долек визуализируются центральные вены, часть которых заполнена кровью. Дольки печени состоят из радиально расположенных печеночных балок, представляющих собой анастомозирующие тяжи печеночных клеток. В печени крысы междольковая соединительная ткань развита слабо, границы между дольками прослеживаются нечетко. Между печеночными балками видны синусоидные капилляры печени, выстланные эндотелиальными клетками. Большинство гепатоцитов одноядерные. В них четко выявляется однородно окрашенное ядро и гомогенная цитоплазма розового цвета. При микроскопии препаратов обнаруживаются и двуядерные гепатоциты – в небольшом количестве. Между дольками выявляются типичного строения триады и собирательные вены.
При гистологическом исследовании ткани печени крыс, которым вводили перорально нимесулид в терапевтической дозе – 0,5 мг/кг (I экспериментальная группа, n=10), у всех животных отмечалось полнокровие центральных вен и расширение синусоидных капилляров (рис. 1). У части животных (60%) наблюдались ограниченные участки зернистой дистрофии гепатоцитов в паренхиме органа, у одного животного (20%) – ограниченные участки вакуольной дистрофии гепатоцитов. Некрозы и очаги регенерации в паренхиме печени выявлены у двух животных (40%); инфильтрация портальных трактов клетками крови – у одного животного (20%).
В группе у крыс, получавших нимесулид в дозировке 2,5 мг/кг, превышающей терапевтическую дозу в 5 раз (II экспериментальная группа, n=10), во всех случаях (100%) в паренхиме печени выявлено полнокровие центральных вен, расширение и полнокровие синусоидных капилляров, очаги зернистой дистрофии разного размера выявлялись также у всех животных группы, у 50% – вакуольная дистрофия гепатоцитов. У 50% животных этой группы выявлены обширные очаги некроза с регенерацией, сопровождающиеся появлением большого количества двуядерных и гипертрофированных гепатоцитов, у 25% – очаги инфильтрации портальных трактов клетками крови.
У крыс, получавших нимесулид в дозе 5 мг/кг и превышающей терапевтическую в 10 раз (III экспериментальная группа, n=12) при микроскопии препаратов в 100% случаев отмечалось полнокровие центральных вен, сосудов триад и расширение и полнокровие синусоидных капилляров. В большинстве гепатоцитов выявлялись морфологические признаки белковой (зернистой – у 100% животных, и вакуольной – у 83,33% животных группы) дистрофии, отмечались также некрозы паренхимы печени и появление большого количества двуядерных клеток – в основном, по периферии зон некроза. В ряде случаев (58,33%) в паренхиме печени визуализировались междольковые и перипортальные инфильтаты, представленные клетками крови, в основном, идентифицируемыми при световой микроскопии как лимфоциты (рис. 1). Выявленные изменения требуют дальнейшего изучения с применением современных методов гистологической диагностики.
В целом, изменения в ткани печени у животных опытных групп выглядели следующим образом (табл. 1; рис. 2).
Рис. 1. Перипортальная инфильтрация в ткани печени крысы, вакуольная дистрофия и некрозы гепатоцитов, двуядерные клетки.
Окраска гематоксилином и эозином х 600
Таблица 1
Патоморфологические изменения в паренхиме печени у животных экспериментальных групп при приеме нимесулида
|
Признак |
Доза 0,5 мг/кг, % животных в группе |
Доза 2,5 мг/кг, % животных в группе |
Доза 5,0 мг/кг, % животных в группе |
|
Полнокровие центральных вен |
100 |
100 |
100 |
|
Расширение синусоидных капилляров |
100 |
100 |
100 |
|
Зернистая дистрофия |
60 |
100* |
100* |
|
Вакуольная дистрофия |
20 |
50* |
83,33* |
|
Некрозы |
40 |
50 |
100* |
|
Двуядерные клетки |
40 |
50 |
100* |
|
Инфильтрация паренхимы печени |
20 |
25 |
58,33* |
*p<0,05 по отношению к терапевтической дозе (0,5 мг/кг)
Метод статистического анализа – критерий х2
Рис. 2. Патоморфологические изменения в паренхиме печени у животных экспериментальных групп при приеме нимесулида
Выводы:
1. При пероральном приеме нимесулида в течение 21 дня в ткани печени экспериментальных животных отмечались патоморфологические изменения, характерные для токсического поражения органа: расширение синусоидных капилляров, очаги дистрофии и некрозов; при этом отмечался дозозависмый эффект.
2. У животных, получавших перорально нимесулид в течение 21 дня, в ткани печени выявлены лимфоцитарные инфильтраты; частота их обнаружения также возрастала по мере увеличения дозы препарата; выявленные изменения требуют дальнейшего изучения и трактовки.
Рецензенты:
Аксенова В.М., д.б.н., профессор, «Пермская Государственная сельскохозяйственная академия им. Д.Н. Прянишникова», г. Пермь;
Татарникова Н.А., д.в.н., профессор, «Пермская Государственная сельскохозяйственная академия им. Д.Н. Прянишникова», г. Пермь.